Способ идентификации патогенных энтеробактерий
пп 422769
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советскии
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 04.08.72 (21) 1816636/30-15 (51) М. Кл. С 12k 1/04
А 61Ь 10/00 с присоединением заявки ЛЪ
Государственный комитет
Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (32) Приоритет
Оп бликовано 05.04.74. Бюллетень ¹ 13 (53) УДК 576.851.49 (088.8) Дата опубликования описания 14.11.74 (72) Автор изобретения (71) Заявитель
Г. П. Калина
Московский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ
ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной микробиологии, а именно к диагностике патогенных микробов семейства энтеробактерий.
Известен способ идентификации патогенных энтеробактерий с использованием девяти тестов, включающий посев микроорганизмов в питательную среду в шести пробирках и выращивание их в ней в течение двух — трех дней.
Однако недостатком известного способа является то, что известный набор тестов не в состоянии диагносцировать вновь описанные таксономические группы — Аризона, Гафния, Провиденция, Эдвардсиелла, требующие дополнительных тестов. Способ громоздок и не обеспечивает быстроты процесса определения родовой, групповой и видовой принадлежности патогенных энтеробактерий.
Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса определения родовой, групповой и видовой принадлежности патогенных энтеробактерий.
Это достигается тем, что в предлагаемом способе производят посев изучаемой культуры последовательно в различные по составу среды — первую, содержащую пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, лактозу, сахарозу, мочевину и индикатор, затем после 4—
5 час культивирования при 43 С выделяемые в первой среде нс сбраживающие лактозу или сахарозу и не разлагающие мочевину культуры высевают во вторую среду, содержащую в нижнем слое полужидкий питательный агар, 5 а в верхнем слое пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, тиосульфат натрия, лизин и индикатор, и в третью среду, содержащую пептон, поваренную соль, дульцит, маннит и индикатор с последующим определением анти10 генного строения (о-антигены) культуры, снятой с третьей среды.
Предлагаемый способ ос> ществляется путем введения в комбинацию интегрированных (комплексных) сред принципа последователь15 ного трехфазового отбора (СИТО).
Первая среда (для экспрессного определения в одной пробирке в течение 4 — 5 час при
43 С фсрмснтации лактозы, сахарозы и уреаз20 ной активности).
В среду входит: вода 100 мл; пептон 0,4—
0,6 г; поваренная соль 0,3 — 0,5 г, дрожжевой экстракт 3,0 — 5,0 мл, лактоза н сахароза по
0,2 — 0,3 г 1,6,р-ный щелочной раствор бром25 тимолового синего 0,2 — 0,3 мл; стерилизация при 1/2 атм 20 мин, После стерилизации прибавляют 3 — 4 мл 50Р/р-ного водного (самостерилизующегося) раствора мочевины и разливают асептично в маленькие пробирки по 0,4—
30 0,5 мл.
422769
Помещают в рилизуют при 1 в вертикальном
Верхний слой.
Вода
Пептон
Дрожжевой пробирки по 2,5 — 3,0 мл, стеатм 10 — 12 мин и охлаждают положении;
100 мл
0,8 — 1,2 г
2,0 — 3,0 мл экстракт
Предмет изобретения
Составитель О.
Сливкина
Техред Л. Богданова Корректор T. Добровольская
Редактор С. Быяихина
Заказ 2308/14 Изд. № 713 Тираж 456 Подписи >е
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5
Сапунова, 2
Типография, пр.
Вторая среда (для определения подвижности, декарбоксилирования лизина, образования индола и сероводорода).
Среда состоит из двух слоев.
Нижний слой.
Питательный бульон 100 мл
Агар-агар 02 — 03 г
Поваренная соль 0,3 — 0,5 г, тиосульфат натрия 0,02 — 0,06 (предпочтительно 0,05 ) г, лизин 1,0 г, 1,6 /о-ный щелочной раствор бромтимолового синего 0,2 — 0,4 мл. Стерилизуют при 1 — 2 атм 20 мин, разливают асептично вторым слоем по 2,0 мл в пробирки с застывшим полужидким агаром. Посев производят уколом до дна пробирки. Затем между пробкой и стенкой пробирки помешают реактивную бумажку, пропитанную 10%-ным водным раствором уксуснокислого свинца и высушенную в сушильном шкафу. После учета результатов на поверхность верхнего слоя наливают
0,2 — 0,3 мл реактива Ковача (парадиметиламидобензальдегид 5 r, амиловый или изоамиловый спирт 75 мл, концентрированная соляная кислота .20 мл) для определения индол а.
Третья среда (для определения ферментации дульцита и маннита и газообразования при ферментации этих углеводов. Эта же среда служит и для накопления биомассы для заключительной фазы идентификации — серологической).
В среду входит: вода 100 мл, агар-агар 1,2—
1,5 r, поваренная соль 0,5 г, пептон 1,0—
1,5 г, маннит 0,08 — 0,1 r, дульцит 1,0 — 1,2 r, 1,6%-ный щелочной раствор бромтимолового синего 0,3 — 0,5 мл. Разливают в пробирки по
4 — 5 мл, скашивают по типу среды Ресселя (столбик и высокий скос). Посев производят штрихом по поверхности скоса и уколом в столбик.
Способ заключается в следующем.
Подозрительную колонию с элективно-дифференциальной среды вносят целиком в пер5
50 вую cpe, у, которую помещают в водяную баню при 43 С и в этой же бане — в термостат при 43 С. Через 4 — 5 час учитывают результат — пробирки с пожелтевшей и посиневшей средой исключают (для выявления энтеропатогенных кишечных палочек из пожелтевших пробирок можно сделать высев на сектор среды Эцдо). Из пробирок с неизменной или темно-зеленой окраской среды культуру высевают во вторую и третью среду, во второй пробирке помещают между пробкой и стенкой пробирки реактивную бумажку для выявления сероводорода и ставят оое пробирки в термостат при 37 С на 18 — 20 час, затем учитывают изменения в средах второй и третьей, ставят реакцию на индол во второй среде.
На основании комбинации биохимических свойств определяют ориентировочную принадлежность изучаемой культуры к любой группе патогенных энтеробактерий. Культуры, отвечающие признакам патогенных энтеробактерий, испытывают в реакции агглютинации адсорбированными сыворотками соответственно биохимической характеристике.
Способ идентификации патогенных энтеробактерий путем посева микроорганизмов в питательную среду и выращивания в ней, отл и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса определения родовой, групповой и видовой принадежности патогенных энтеробактерий, производят посев изучаемой культуры последовательно в различные по составу среды — первую, содержащую пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, лактозу, сахарозу, мочевину и индикатор, затем после 4 — 5 час культивирования при 43 С выделяемые на первой среде несбраживающие лактозу или сахарозу и не разлагающие мочевину культуры высевают во вторую среду, содержащую в нижнем слое полужидкий питательный агар, а в верхнем слое — пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, тиосульфат натрия, лизин и индикатор, и в третью среду, содержащую пептон, поваренную соль, дульцит, маннит и индикатор, с последующим определением anтигенного строения (о-антигены) культуры, снятой с третьей среды.
