Способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (и1 42О636

Союз Советский

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 12.06.72 (21) 1796211/23-5 (51) М. Кл. С 08f 27, 00 с присоединением заявки (32) Приоритет

Опубликовано 25.03.74. Бюллетень ¹ 11

Дата опубликования оп»са»»я 26.08. 4

Государственна!й комитет

Совета Министров СССР ао делам изо5ретений и открытий (53) УДК 678.765(OSS.S) (72) Авторы изобретения

Л. Л. Щуковская, Р. И. Пальчик, В. А. Кропачев, Л. H. Буловская, П. Г. Цепелован и В. М. Дильман

Институт высокомолекулярных соединений АН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХ

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПОЛИМЕРОВ

Изобретение относится к получению водорастворимых полимеров с физиологически активными свойствами.

Известен способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров взаимодействием сополимеров N-винилпирролидона с малеиповым ангидридом или кротоновой кислотой, и физиологически активных соединений, например стироидов, в органическом растворителе.

С целью регулирования свойств физиологически активных полимеров предлагается в качестве физиологически активных соединений использовать белково-пептидные гормоны— адренокортикотропный и соматропный (АКТГ и СТГ), которые ковалентно присоединяются к полимерам.

Полученные полимерные гормоны обладают рядом интересных свойств, например пролонгированным действием или сохранением иммунологических свойств при отсутствии гормональной активности.

Использование синтетического полимера для реакции с гормопом позволяет широко варьировать величину молекулярного веса, количество присоединенного АКТГ или СТГ и менять природу полимера (гидрофильный или гидрофобный и пр.), что будет влиять на скорость всасывания гормона.

Присоединение АКТГ к сополимеру N-в»»»лппрролпдо»-мале»новый а»гидрид»роводтггся вза»модейе1в»ем реаге»тов в органическом растворителе. АК 1 Г присоединяется к полимеру за ам»»огруп»у серп»а, образующееся полимерное про»ззодное гормона уже не обладает б»олог!1 !еской активностью.

Пр» этом, .:!е»яя соотношение взятых в реакци10 КО.,IПО»е»тов, .;10?кно изоирателыlо Осу!10 ществить иза»моде!!ствие с определенными группами гормона» получать полимерные произвол»ь1е г0p loIIÎII, не ооладающие гор,!0»а IblIGiI актив»остью, но сОхра!Iя101цие а!1тигенные свойства»ат»в»ого гормона или био15 логичес«»;:êò»âilûе про»звсдные с проло»гирован»ым време»ем действия.

Полученные пол»мерные производные АКТГ и СТГ раствор»мы в воде, Содержание белка в них определяют спектрофотометрически, по

20 поглоще»»10 пр» 2 8 ммкм с учетом поглощения сополимера. Локализацию ковалентных связей в гормо»ах определяют по методу

Грея и Хартл» путем проведения реакции данз!1:!Ирова!!»11 с 1-; имет»лампнонафталин-525 сульфа»ил,ëîð»äîì (311() и последующей двумерной тонкослой»сй хроматографией на бумаге.

Пример 1. К раствору 1 г сополпмера Nвпнилппрро 1»30»а (ВП) и крото»овой кисло30 ты (КК) (ВП-КК-95,7 — 4,3 мол.% (т ) =0,20) 420636

Предмет изобретения

Составитель О. Рокачевская

Редактор Н. Джарагетти Техред Е. Борисова Корректор М. Лейзерман

Заказ 1984!4 Изд. Ке 698 Тираж 565 Подписи о

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 в 30 мл с кого диметилформамида (ДМФ) дооавляют .,2 Më сухого триэтил амина и

0,05 мл пзобутилового эфира хлоругольной

1 1fcJloть1 и перех1ешива!От в течение Одного часа прп охлаждении льдом. К полученному полимерному смешанному ангидриду при Охлаждении добавляют раствор 1 г бычьего

АКТГ в 90 мл сухого ДМФ, Реакционную смесь перемешивают в течение 3 час при охлаждении и оставляют на ночь в холодильнике. Зачем отфильтровывают осадок, а фильтрат ос11гкдают диэтиловым эфиром. Продукт очищают г1среосаждением из этилового спирта в эфир.

Выделен 1 г продукта, выход 50", .

АКТГ присоединен к сополимеру за в-аминогруппы лизина и гидроксильную группу тирозина. Биологическая активность по сравнению с нативным АКТГ составляет 70 /о.

П р и и е р 2. По вышеописанной методике из 1 г бычьего АКТГ и 9 r сополимера ВП-КК (состав тот же) получают 8,4 r продукта, Выход 84%. АКТГ присоединен к сополимеру за концевую аминогруппу серина, е-аминогруппы лизина и гидрокспльную группу тирозина, Производное на 90% теряет биологическую активность по сравнению с нативпым

АКТГ, но аптигенные свойства сохраняет такие же, как в исходном белке.

Пример 3. К раствору 1 г сополимера г1винилпирролидона (ВП) и малеинового ангидрида (МА) (ВП-МА-78 — 22 мол. %, (q) =

=0,28) в 50 мл сухого ДМФ добавляют раствор 1 г бычьего АКТГ в 90 мл сухого ДМФ.

Реакционную смесь перемешивают в течение

10 час при комнатной температуре и оставляют па ночь в холодильнике. Продукт выделяют путем осаждения диэтиловым эфиром. Осадок растворяют в 3,4 мл 5 /о-ного охлажденного раствора бикарбоната натрия и высушивают лиофильно. Выделен 1 г продукта, выход 50 /и. АКТГ присоединен к сополимеру за концевую группу серина. Производное не обладает биологической активностью.

Пример 4. К раствору 0,5 сополимера Nвинилпирролидона и кротоновой кислоты (ВП-KK-95,7 — 4,3 мол.%, (q J =0,20) в 4,5 мл сухого диметилсульфоксида добавляют 0,6 мл трнэтиламина и 0,025 мл этилового эфира

10 хлоругольной кислоты. Полученный раствор перемешивают в течение 50 мин при комнатной температуре и добавляют 50 мг СТГ человека, растворенного в 0,2 мл 0,1 í. NaOH и за1см в 5 мл ДМСО. Реакционную смесь

15 перемешивают в течение 6 час и оставляют па ночь при комнатной температуре. Затем высаждают в эфир-ацетоновую смесь (1: 1) и переосаждают из этилового спирта в диэтиловый эфир. Выделено 0,4 г продукта, выход

20 72 о/

СТГ присоединен к сополимеру за конечную аминогруппу фенилаланина. Продукт сохраняет биологическую активность и пролонгирует действие гормона. Максимум действия от25 мечается через 3 — 4 час по сравнению с действием нативного СТГ через 30 мин.

30 Способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров путем взаимодействия сополимеров N-винилпирролидона с малеиновым ангидридом или кротоновой кислотой и физиологически активного соединения

35 в органическом растворителе, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью регулирования свойств получаемых полимеров, в качестве физиологически активного соединения используют адренокортикотропный или соматропный

40 гор мои.