Способ выделения гуанозин-5'-дифосфата
з .сл йлТ",. -„ ..:
ОПИС
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Сбюз советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
N. Кл. С 07d 51/54
Заявлено 21.I1.1972 (№ 1751200/23-4) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано IÎ.ÕI I.1973. Бюллетень ¹ 47
Дата опубликования описания 8.IV.1974
Государственный комитет
Совета Министров СССР па делам изобретений и открытий
УДК 547.857.7.07 (0.88.8) Авторы изобретения Н. С. Тихомирова-Сидорова, Г. Е. Устюжанин и В. В. Коломейцева
Заявитель
Институт высокомолекулярных соединений АН СССР
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГУАНОЗИ Н-5 -ДИ ФО СФАТА
Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения соединения, которое применяется в биохимических исследованиях.
Известен способ выделения гуанозин-5 -дифосфата из продажного препарата, содержащего гуанозпн-5 -монофосфат и о-щепившийся неорганический фосфат. Очистку гуанозин-5 дифосфата осуществляют методом хроматографии на ионообменных смолах. Выход гуанозин-5 -дифосфата составляет 70 — 75%.
Однако известный способ обладает рядом существенных недостатков, важнейшим из которых является трудоемкость процесса очистки. Кроме того, в очищенных препаратах содержится аналитически трудоопределяемые примеси, которые мешают применению гуанозин-5 -дифосфата в биохимических исследованиях.
При осуществлении, предлагаемого способа выделения гуанозин-5 -дифосфата все это устраняется за счет различной растворимости кальциевых солей гуанозин-5 -дифосфата, гуанозин-5 -монофосфата и неорганического фосфата в спирто-солянокислом растворе.
Для упрощения технологии процесса смесь гуанозин-5 -дифосфата, гуанозин - 5 - монофосфата и неорганического фосфата подвергают обработке солями кальция, например хлористым кальцием, и полученную смесь кальциевых солей подвергают дробному осаждению из солянокислого раствора спиртом. Выход достигает 84%.
Пример. Иопользуют динатриевую соль гуанозин - 5 - дифосфата фирмы «Реанал» (Венгрия). При предварительных опытах устанавливают, что в 1 г препарата содержится
lo 417 мг (0,88 ммоль) динатрпевой соли гуанозин-5 -дифосфата, 223 мг (0,55 ммоль) динатриевой соли гуанозин-5 -монофосфата, 40 мг (0,23 ммоль) тринатриевой соли ортофосфорной кислоты, а также крпсталлогидратная во15 да, влага и другие примеси. Таким образом, примесь неорганических ортофосфатов и гуанозин-5 -монофосфатов, отнесенная к гуанозин-5 -дифосфату, составляет 28 и 67 мол% соответственно.
20 1 г препарата растворяют в 30 мл 0,1 н. соля ной кислоты и к раствору прибавляют 45 мл
0,2 М хлористого кальция в этиловом спирте.
Вы павший осадок центрифугируют, промывают спиртом, растворяют в 30 мл 0,1 М соляной
2s кислоты и переосаждают добавлением 80 мл этилового спирта. Переосаждение повторяют несколько раз. После трех переосажденнй в препарате остается менее 3% гуанозин-5 -моПредмет изобретения
Составитель В. Жестков
Редактор Т. Загребельная
Техред 3. Тараиеико Корректор В. Брыксина
Заказ 831/12 Иэд. № 299 Тираж 523 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушская |наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 нофосфата и отсутствует неорганический ортофосфат. Последующее переосаждение приводит к полному удалению монофосфатов.
Для дальнейших анализов кальциевую соль гуанозин-5 -дифосфата переводят в литиевую на катионите Даузкс-50 (Li+-форма) и лиофилизуют. Собирают 330 мг (0,74 ммоль) литиевой соли гуанозин-5 -дифосфата, выход составляет 84%, считая на взятый гуанозин-5 дифосфат.
Способ выделения гуанозин-5 -дифосфата из его смеси с гуанозин-5 -.монофоофатом и отщепившимся неорганическим фосфатом, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения технологии процесса, указанную смесь подвергают обр або пке солями кальция, на1пример хлористым кальцием, и полученную смесь
10 кальциевых солей подвергают дробному осаждению из солянокислого раствора спиртом.
