Способ получения целлюлозного антигена

ОП И

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

395438

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”.Ч. Кл, С 12k 1 04

Заявлено 01.Х1.1971 (№ 1г12518 31-16) с присоединением заязкн ¹ —.

Государственный комитет

Совета Министров СССР па делам изобретений и открытий

Приорнтст—

Опубликовано 28.Ч111.1973. Бюллетень М 35

Дата опубликования описания 4..х!1.1973

УДК 576.8.097(088.8) Авторы изобретения

В. М. Никитин и T. В. Никитина

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЗНОГО АНТИГЕНА

Изобретение относится к област:.I медицины, а именно к микрооиологпи.

Известен способ получения гептенцсллюлозного а нтигена путем совместного гидролпза нитроцеллюлозы и микробной массы в 1 лг.г

10%-ного раствора КОН, добавления раствора бриллиантовой зелени 1: 500, i.ейтралнзапии щелочи уксусной кислотой, це:гтрифугнрования и разведения осадка физиологическим раствором.

Однако гептенцеллюлозные антигены, полу чаемые пз микробов указан ным способом, не сохраняют специфи шости антигенов.

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что .микробную массу вносят в раствор гидролизованной нитроцеллюлозы после ее нейтрализации и пидролизуют на водяной бане при рН 5 и 100 С в течение 2 — 3 лин.

Пример. В пробирку, помещают 50 ла высушен ной нитроцеллюлозы в виде пленки (или один мезгбраганый фильтр) и затем туда же доба вляют 1 зг,г 3,5% КОН. Пробирку, легко встряхивая, подогревают на пламен i горелки до буферного,вскипания щелочи и полного растворения пластинки нитроцеллю.тозы с образованием желтоватой жидкости. В пробирку в.(OcHT пастеровской пипеткой сначала 2 капли бриллиантовой зелени 1: 100, затем добавляют 2 капли крепкой уксусной кислоты и заливают 1 игл дистиллированной воды, В ре3 льтате В пробирке образуется !ионная среда цветного раствора цсллголозы, .имеющая cëàбо кислый рН 5. В эту среду вносят необходимое количество микробов в объеме 0,1 — 0,2 лл, которос подбирают опытным путем. Так, количество микробов туляремии должно составлять 2 — 5 мл рд по кишечному оптическому ста.iäàрту пр:i использовании бактернальног0 диагностнкума; чумы (вакцина ЕУ) — 2 — 2.5

10 млрд мнкрооных клеток; холеры (вакцина)

20 — 40 млрд мн1 рооных тел. Пробирку со смесью помещ iioT в водяную башо, доводят до 100 С и кипятят 2 — 3 лин. Затем пробагрку с суспснзней охлаждают, це.ITp:iôóã.iруют и тн 1500 — 2000 оо лин 5 — 10 лин, сливают надосадочную жидкость, а осадок промывают 2 раза дпст. lллнрованной Bo;101i.

С этой целью и осадку дооавляют 3 — 5 лог дистиллированной,воды, ресуспенднруют его и взвесь центрнфуг:ipугoт. Процедуру повторяют дважды. После этого;к полученному осадку частиц зеленого цвета добавляют 1 дг.г 1",р-ного раствора .нормальной сыворотки,,ресуспеггднруют путем встряхггвагпгя, и цветной целгпо25 лозный àíT;lген-дпагностнкум готов к применению, Это будет концентрированный ЦАГ-дпагностикум, ": з которого приготовляют рабочее разведение его путем доразведенпя в 5 — 10 раз тем же раствором нормальной лошадиной сыворотки.

395433"

Предмет изобретения

Составитель С. Щенева

Техред Е. Борисова

Редактор Д. Пинчук

Корректор М. Лейзерман

Заказ 689/2271 Изд. № 940 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

Для постановки реакции агглютинацнн применяют ооа антигена, если используют концентрированный ЦЛГ-диагностпкум, то он заканы вается с помощью пастеровской пипетки с тонко оттянутым капилляром, а в случае прнмененпя рабочего 1раствора UAI — его наносят обычной .пастеровской пипеткой. Препараты ЦЛГ-диатностпкумов представляют сооой цветную,взвесь частиц целлюлозы со специ фпческим и свойствами. Пр11 стоянии онн оседают, образуя достаточно плотный цветной осадок, надосадочная жидкосгь просветляется, становится прозрачной ил и слегка окрашенной. Перед применением цветные целлюлозные антнгены ресуспепдируют с помощью знертпчного встряхивания в пробирке с закрытой резиновой пробкой.

Хранение ЦЛГ-днагпостнкумов осуществляют 3 прооп ркак (прн длительном хранении целесоооразно добавить в препарат мертиолат в конечной концентрации 1:!О тыс) на холоду прн 4 — 10 С. Препараты длительно сохраняют свою активность.

1. Способ получения целлюлозного ант1ггена из микробов путем гидролиза нигроцеллю10 лозы щелочью, добавления красителя, нейтрализации щелочи уксусной кислотой и центрифугирования, от.1ичаюцийся тем, что, с целью сох1ране ия специфичности ангигенов, микробну1о массу вносят в раствор гидролизованной нигроцеллюлозы после ее нейтрализацн:.i u гидролизуют на водяной бане, 2. Спосоо по п. 1, отличпюи1ийся тем, что гидролиз микробной массы проводят прн рН 5 п 100 С в течение 2 — З,яин.