Способ выделения микроорганизмов

Ъ

О П И С А Н И Е 336880

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскиз

Социалистичвскиа

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимыи от патента №

i !. Кл. С 12с 11 26

Заявлено 08Х.1969 (№ 1328867/28-13)

Приоритет 10Х.19б8, № 151500, Франция

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 663 14(088.8) Опубликовано 21.1Ч.1972. Бюллетень № 14

Дата опубликования описания 29Х,1972

Авторы изобретения

Иностранцы

Клод Гателье и )Корж Гликман (Франция) Заявитель

Иностранная фирма

«Энститю Франсэ дю Петроль, дэ Карбюран э Любрифьян» (Франция) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к области выделения микроорганизмов, в частности дрожжей из питательной среды, содержащей углеводородные фракции нефти.

Известны способы выделения микроорганизмов, предусматривающие введение в питательную среду полярного р астворителя, например ацетона и этанола, с последующим разделением образовавшихся фракций.

Недостатком известных способов является то, что они не обеспечивают эффективного разделения питательной среды на фракции и удовлетворительной очистки выделенных микроорганизмов.

С целью более эффективного разделения питательной среды на фракции по предлагаемому способу в среду наряду с полярным растворителем дополнительно вводят диалкилкетон, содержащий четыре атома углерода.

Диалкилкетон выбирают из группы метилкетона и пропилэтилкетона, при этом диалкилкетон может быть добавлен до введения полярного растворителя или в виде смеси с этим растворителем.

Смесь диалкилкетона и полярного растворителя используют в количестве 1 — 10, предпочтительно 2 — 5 объемов на один объем питагельной среды.

Весовое соотношение диалкилкетона и полярного растворителя составляет 1 — 8, предпочтительно 1,5 — 5. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Жидкие стоки из ферментатора подвергают предварительному разделению на водную фазу, половину которой возвращают в ферментатор, и эмульсию, содержащую остаточные углеводороды, дрожжи и воду с мине10 ральными солями.

Полученную эмульсию обрабатывают при интенсивном перемешивании диалкилкетонами и полярным растворителем, вводимыми последовательно или в виде смеси. Обработку

15 эмульсии проводят при температуре 20 — 45 С, а более предпочтительно при температуре около 30 С. рН эмульсии доводят до 2 — 8.

После премешивания эмульсию разделяюT на три фракции — от большей плотности к

20 меньшей: нижняя часть (водная паста микроорганизмов); жидкий промежуточный слой, состоящий в основном из воды и полярного растворителя; жидкий слой, образованный в основном диалкилкетоном и остаточными угле25 водородами.

При этом водная паста микроорганизмов, расположенная в нижней части резервуара, не соприкасается с легкой фазой, содержащей остаточные углеводороды.

336880

Из трех фракций сцеживают тяжелую водную пасту микроорганизмов, которую затем обрабатывают смесью из полярного растворителя и диалкилкетона или идентичной смеси, используемой для выделения дрожжей из питательной среды.

Дрожжи, освобожденные таким образом от остаточных углеводородов и побочных продуктов типа жирных кислот, могут быть выделены для обеспечения их длительного хра- 10 пения без появления пригорклого вкуса.

Две другие фракции также легко разделяют, например, отгонкой остаточных углеводородов из более легкой фракции и воды из промежуточной фракции. 15

Полярный раствор и тель и диалкилкетон используют для выделения и очистки микроорганизмов.

Весовое соотношение между диалкилкетоном и полярным растворителем зависит от количеств водной фазы и углеводородов, находящихся в подлежащей обработке эмульсии.

В предпочтительном случае используют небольшой избыток диалкилкетона IIQ отношению к полярному растворителю. Это весовое соотношение составляет от 1 до 8 или 1,5до 5.

Пример 1. Дрожжи вида Candida

lipolytica непрерывно культивируют в ферментаторе на питательной среде, состоящей 30 из газойля, содержащего 11О/О линейных парафиновых углеводородов, и водной минеральной среды следующего состава, г: диаммонийфосфат 2,2 хлористый калий 1,2 сульфат магния 0,9 проточная вода, содержащая олигоэлементы экстракт дрожжей дистиллированная вода

0,08

lppp 4о

Выращивание осуществляют при аэрировании, рН среды близким к 4,0 и температуре около 27 С, Из ферментатора культуральная среда, со- 45 держащая 90 вес. О/ц воды с минеральными солями, 5 /о дрожжей и 5 /о остаточных углеводородов, поступает в декантатор. На 1 объем культуральной среды в декантатор вводят

2 объема жидкой смеси, состоящей из 4 об. ч. 50 метилэтилкетона и 1 оо. ч, ацетона.

При этом происходит разделение культуральной среды на три фазы: нижняя — водная фаза дрожжей, средняя, состоящая в основном из ацетона и воды, верхняя, состоящая 55 в основном из метилэтилкетопа и остаточных углеводородов.

Нижнюю (тяжелую водную фазу) отделяют, выделяют из нее дрожжи, при этом последние освобождены от остаточных углево- 60 дородов и побочных продуктов типа жирных кислот. Дрожжи сушат и хранят.

Две другие фазы (среднюю и верхшою) перегоняют, ацетон и метилэтилкетон рекуперируют и используют вновь. 65

Пример 2. Выращивание осуществляют так же, как и в примере 1.

В культуральную среду после завершения выращивания вводят смесь, содержащую 1 ч. ацетона и 4 ч. изопропанола. Однако разделение суспензии на фазы не происходит, а увеличивается лишь объем смеси, при этом необходимо смесь центрифугировать для отделения дрожжей. Выделенные таким образом дрожжи содержат 1,2О/о углеводородов.

Изменение соотношения между ацетоном н изопропанолом при повторении операции пе приводит к успеху.

Пример 3. Для выделения дрожжей из культуральной среды используют в одном случае смесь, содержащую метилизобутилкетон и этанол, в другом — метилэтилкетон+пропанол. Остальные условия соблюдаются такие же, как описаны в примере 1.

Б обоих случаях происходит разделение среды на трп фазы. Выделенные дрожжи не содержат углеводородов и побочных продуктов.

Пример 4. Повторяют условия, описанные в примере 1, со следующими изменениями.

Выращивание осуществляют на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода депарафинизированные смазочные масла, содержащие 90О/о линейных парафинов. Водная минеральная среда используется без изменений.

В декантатор поступает культуральная среда, содержащая 90 /о воды, 9,5О/о дрожжей и

0,5О/о остаточных углеводородов.

В декантатор вводят 5 объемов смеси, содержащей 1,5 вес. ч. метилэтилкетона и 1 вес. ч. ацетона, при этом происходит расслоение образовавшейся смеси на три фазы. Выделенные дрожжи из более тяжелой фазы практически освобождены от углеводородов и побочных продуктов.

Пример 5. Повторяют условия, описанные в примере 4.

Однако в декантатор вводят смесь, содержащую гексан и этанол (весовое соотношение гексан/этанол равно 1,5, а объемное — 65/35), при этом не наблюдается разделение эмульсии на три фазы. Эмульсию подвергают центрифугированию, при этом получают дрожжи, содержащие около 0,2 остаточных углеводородов.

Предмет изобретения

1. Способ выделения микроорганизмов, например дрожжей, из питательной среды, содержащей углеводородные фракции нефти, путем введения в нее полярного растворителя, например ацетона, этанола, с последующим разделением образовавшихся фракций, отлияа>ощийся тем, что, с целью более эффективного разделения питательной среды на фракции, в среду наряду с полярным растворителем дополнительно вводят диалкилкетоп, содержащий 4 атома углерода.

336880

Составитель А. Киселева

Техред Л Евдонов

Коррекгор T. Грсвцова

Редактор В. Блохина

Заказ 1492,, 12 Изд. № 611 Тираж 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва. Ж-35, Раушская наб., д. 4 5

Типография, пр. Сапунова, ?

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве диалкилкетона используют метилэтилкетон, метилизобутилкетон, диэтилкетон и пропилэтилкетон.

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем,,то диалкилкетон вводят перед введением Iloлярного растворителя, например ацетона, спирта.

4. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что диалкилкетон вводят в смеси с полярным растворителем, в количестве 1 — 10 объемов, предпочтительно 2 — 5 объемов смеси ча

1 объем питательной среды.

5. Способ по пп. 1, 2 и 4, отличающийся тем, что весовое соотношение диалкнлкетона и полярного растворителя составляет 1 — 8, предпочтительно 1,5 — 5.