Хничш-ая еиблйс-тек'л

О П И С А Н И Е 255I42

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от патента ¹

Заявлено 12.Х1.1966 (№ 1112661/23-4) Кл. 12q, 6/01

МПК С 076

Приоритет 12.XI.1965, ¹ 15638 65 (Швейцария).

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР ДК 547.964.4.07 (088.8) Опубликовано 17.Х.1969. Бюллетень ¹ 32

Дата опубликования описания 7.11 .1970

Ав7оры изобретения

Иностранцы

Беат Изелин, Хайни Каппелер, Бернхард Риникер и Вернер Риттель

КОРТИКОТРОПИНА ИЛИ D-СЕРИЛ1-ГЛУТАМИНИЛ.ЛИЗИЛ1т 18-р1»-КОРТИКОТРОПИНА ИЛИ ИХ АМИДОВ

Предлагают способ получения D-серил1-лизи71т 18-р1 1з-кортикстропина или D-серил1глутаминил - лизил1 1s+ 18 - кортикотропина или их амидов, заключающийся в том, ITo защищенный декапептид D-серил-тирозил-серилметионил-глутамил (или глутаминил) - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицин конденсируют известным способом, например методом активированных эфиров, с эфиром или амидом октапептида лизил-пропил- 10 валил-глицил-лизил-.7изил-лизил-лизина, боковые группы которого защищены, с последующим отщеплением защитных групп известным способом.

Полученный таким способом амид октаде- 15 капептида D-серил1-лизил1» — p1 1з-кортик.)тропин или D-серил1-лизил1»-I)1»-кортикотропин, впервые описанный в литературе, обладает большой адренокортикотропной активностью и отличается от других пептидов, Oб- 20 ладающих адренокортикотропным действием, тем, что в качестве первой аминокислоты на аминоконце он содержит D-аминокислоту.

Применяют следующие сокращения:

Л.из — лизил 25

Про — пролил

Вал — валил

Глу — глутамил

Сер — серил

Тир — тирозил .Чет — метиошьч

Гис — гистид.к7

Фен — фенплаланил

Арг — аргинил

Три — триптофи 7

КБЗ вЂ” карбобензокси

БО К вЂ” трет-бутилоксикарбонил

ТБ — трет-бертил

Системы тонкослойной хроматографии обозначаются следующим образом:

Система 43А: трет-амиловый спирт — изопропанол — вода (100: 40: 10).

Система 43С: трет-амиловый спирт — изопропанол — вода (100: 40: 55) .

Система 52: и-бутанол — ледяная уксусная кислота — вода (100: 10: 30).

Система 52А: и-бутанол — ледяная уксусная кислота — вода (67: 10: 23).

Система 100: этилацетат — пиридин — ледяí".ÿ уксусная кислота — вода (62:21: 6: 11).

Система 101: и-бутанол — пиридин — ледяная уксусная кислота — вода (30:20: 6:24).

Пример 1. КБЗ-Лиз(БОК) - Лиз(БОК)ын,.

5 г КБЗ-Лиз(БОК)-Лиз(БОК) - ОСН, растворяют в 100 11л абсолютного метанола, при комнатной температуре насыщают аммиаком и отстаивают в течение 30 час в закрытой колбе. 3 атем р аствор концентрируют до 25 л л и в течение ночи отстаивают для кристаллизации в леднике. Отфильтровывают, промывают охлажденным метанолом и высушивают кристаллы в вакууме. Получают 3,95 г КБЗ-Лиз (БОК)-Лиз(БОК)-NH> с т. пл. 165 С. При тонкослойной хроматографии на силикателе соединение имеет следующие значения Rt.

Rt (хлороформ: метанол 95: 5) 0,11

Rt (хлороформ: метанол 8: 2) 0,75

К ) (43A) 0,76

Примененный в качестве исходного материала КБЗ-Лиз(БОК)-Лнз(БОК)-ОСН: с т. пл. 78 — 84 С можно получить из КБЗЛиз(БОК)-ОН и Н-Лиз(БОК)-ОСН (бельгийский патент № 594338) путем конденсации с помощью дициклогексилкарбодиимида.

Пример 2. Н-Лиз (БОК) -Лиз (БОК) -NH .

Зг КБЗ-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ХН при легком нагреве растворяют в 100 лл метанола и при комнатной температуре гидрируют с 500 .яг палладированного угля при встряхивании с абсорбцией образующейся двуокиси углерода.

Поглощение водорода заканчивается после — 1 час,и в течение последующего 1 час отфильтровывают катализатор. Фильтрат вь.c)шивают. Сырой материал перекристаллизовывают из смеси сложного уксусного эфира и петролейного эфира. Продукт .имеет т. пл.

110 — 112 С. На снликагеле получают следующие значения К .

R< (хлороформ: мет ан ол 8: 2) 0.32

Rt (43А) 0,35

Rt (52) 0,65

Пример 3. КБЗ-Лиз (БОК) - Про-В алГлу-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз (БОК) -NH .

5,13 г КБЗ-Лиз(БОК)-Про-Вал-Глу-Лнз (БОК) -Лиз (БОК) -МН (заявка № 2209ЯЗ дело

5247/5123) растворяют в 60 лл аосолютпого диметилформамида и охлаждают до — 25" С.

При этой температуре при перемешиванпи по каплям добавляют 8,8 ял 2,115 и. соляной кислоты и затем еще 0,973 лл 5 н. ра твора нитрата натрия. Реакционную смесь перемешивают при — 10 С в течение 15 чин, после чсго добавляют предварительно охлажденный до — 10 С раствор 2,0 г н-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)NHg в 10 лл диметилформамида и затем Ilo каплям добавляют 2,6 л.л триэтиламнна. Перемешивают при 0 С в течение 30 иия и затем отстаивают при 0 С в течение 20 час. Для выделения сырого, продукта концентрируют до

30 мл, осаждают добавлением 150 лл воды и отфильтровывают хлопьевидно-студенистьш осадок. После двукратной перекристаллизацин из смеси метанол — вода (2: 1) получают защищенный октапептид в мелкокристаллической форме:и хроматографически чистом виде с т. пл. 220 — 221 С (разложение).

Он имеет на силикагеле следующие значс ния Rt.

R t (хлороформ: метанол 9:! ) О 47

R f (43А) 0,75

Пример 4. н-Лиз(БОК)-Про-Вал-ГлуЛиз (БОК) -Лиз (БОК) -Лиз (БОК) -Лнз (БОК)

NH р " 1,0 г вышеописанного карбобензоксисоедн5 пения растворяют В 250 мл метанола и гидрируют при встряхивании с 200,пг палладированного угля (10 РЛ) при комнатной температуре и при абсорбции двуокиси углерода.

После отстаивания в течение 6 час отфильтро10 вывают катализатор, фильтрат высушивают и остаток дважды переосаждают из смеси метанола и воды. Получают 738 мг хроматографи. чески однородного производного октапептида, которое на силикагеле имеет следующие зна15 чения Rt.

R; (хлороформ: метанол 9: 1) 0,14

Rt (52) 0,63

Rt (43А) 0,28

20 Пример 5. БОК-D - Сер-Тир-Сер-МетГлу(ТБ) — Гис-Феп-Арг-Три-Глу-Лиз (БОК)

Про-Вал - Глу - Лиз(БОК)-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз (БОК) -МН .

988 л г БОК-D-Cep-Тир-Сер-Мет-Глу (ТБ)—

Гис - Фен - Арг-Три-Глу-ОН и 736 мг Н-Лиз (БОК)-При-Вал-Глу-Лиз(БОК) - Лиз(БОК)Лиз (БОК) — Лиз (БОК) -ХН суспендируют в 20 пл пиридина и после добавки 0,3 мл воды и 0,835 ил 1 н. соляной кислоты перемешивают при 50 С в течение 15 мин. После добавки

378 лг дициклогексилкарбодиимида перемешивают при 50 С в течение 3 час, добавляют еще столько же дициклогексилкарбодиимида, перемешивают при 50 С еще в течение 3 час и конце прируют до образования полутвердого о:татка. Прн нагревании с 20 ял диметилформамида пептиды растворяются н;их отделяют фильтрованием от нерастворимой дициклэгекснлмочевины. Фильтрат концентрируют до образования густотекучего остатка, из которого путем добавления 50,яг воды выделяют масляниcTbtl1 сырой продукт, котоpbIH отделяют от маточного щелока и высушивают.

Путем двукратного переосаждения из сложного диметилформ ампдмстанолуксусного эфира получают 1,29 г сырого продукта, который подвергают окончательной очистке по методу

Крейга в системе растворителя .метанол — 6yфер — хлороформ — четыреххлористый уг. tep=p (10: 3: 7: 4). Буфер: 28,5 мл ледяной уксусной кислоты, 19,25 г ацетата аммония в

960 лл воды (с фазовыми объемами по 10 лл).

Сначала вещество распределяется равномерно с наполнением первых 5 элементов. После 171 стадии из элементов K 50 — 74 (р„. = 62, 4=0:57) путем концентрации досуха и сублимации ацетата аммония при 40 С под высоким вакуумом выделяют однородный по тонкослойной хроматографии защищенный октадскапептидамид в виде чистого аморфного порошка с температурой плавления 210 — 225 С (р азложенне) .

На силикагеле он имеет следующие значе. ния Rt.

255142

Составитель Л. Кайгородова

Редактор Л. Новожилова Техред Л. В. Куклина Корректор Р. Н. Крючкова

Заказ 661/7 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва %-35, Раушская наб., д. 4,5

Типография, пр. Сапунова, 2

Rf (хлороформ: метанол 75: 25) 0,51

R г (43С ) 0,62

R1 (52) 0,55

R, (100) 0.43.

Предмет изобретения

Способ получения D-серил1-лизил1т >8+ >8vpmxorponzva или D-серил1-глутаминилвизил1т 1в-ра 1а-кортикотропина или их амиов, отличающийся тем, что защищенный декапептид D-серил-тирозил-серил - метионилглутамил (или глутаминил) - гистидил-фенилаланил-аргинил - триптофил - глицин конденсируют известным способом, например мето5 дом активированных эфиров, с эфиром или амидом октапептида лизил-пролил-валил - глицил - лизил - лизил - лизил — лизина, боковые группы которого защищены, с последующим отщеплением защитных групп известным спо10 со бом.