Способ выделения ферментных инактиваторов
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К П АТЕ НТУ
Сова Советскиа
Социвлистическиа
Республик
Зависимый от патента №
Заявлено 15.Ч.1967 (№ 1155142/28-13) Приоритет 26 Ч.1966. F 49298 IVa/6а.
Федеративная Республика Германии
Опубликовано 20.Ч1.1969. Бюллетень № 21
Комитет по делам иаобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Дата опубликования описания 1З.Х|.1969
Авторы изобретения
Иностранцы
Ойген Верле и Ханс Фритц (Федеративная Республика Германии) Иностранная фирма
«Фарбенфабрикен Байер АГ> (Федеративная Республика Германии) Заявитель
СПОСОБ ВЪ|ДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТНЪ|Х ИНАКТИВАТОРОВ
Способ выделения ферментных инактиваторов, например калликреина, из комплекса энзима, пр исоединенного к полимерному носителю, не известен.
Для получения высокоочищенного инактиватора предлагается комплекс энзима и полимерного носителя приводить в воде в контакт с раствором калликреин-инактиватора.
После этого полученный комплекс промывают, диссоциируют и изолируют таким образом инактиватор.
Способ выделения ферментных инактиваторов, например калликреина, заключается в том, что энзимы, например трипсин, химотрипсин, калликреин, присоединяют ковалентно к нерастворимому или растворимому носителю (полимерному веществу) . Полученный при этом продукт присоединения приводят в воде в контакт с раствором калликреин-инактиватора, полученный при этом комплекс очищают промыванием, например, водой и буферным раствором диссоциируют и выделяют калликреин-инактиватор.
Причем носители (полимерные вещества) должны содержать функциональные группы, способные реагировать с энзимами по методу химии пептидов,,например смолы, содержащие группы ангидрида хлорангидрида кислоты, изоцианата и азида или смолы, содержащие активированные атомы фтора.
Диссоциация достигается, например, посредством смещения рН или добавлением веществ, ослабляющих действие молекулярного обмена, например, мочевины.
Пример. Для получения калликреин-колонки 400 мг калликреина гомогенизпруют в
200 мл 0,2 М фосфатного буфера с рН 7,5 при
0 С. Затем добавляют 2 мл 1 -ного раствора
10 гексаметплендиамина, размешивают,в течение
3 мин, после чепо добавляют 100.000 КЕ (2упротеин I(E), растворенные в 20 м г 0,2 М фосфатного буфера с рН 7,5. Полученную суспензию размешивают около 8 час при температу15 ре 0 — 4 С. Для выделения калликреина 80000 единиц калликреина смешивают приблизительно с четырехкратным обьемом порошка целлюлозы и заливают в колонку (вышеописанную), охлажденную водой и заполненную
20 Sephadex G-25 слоем в 1 см. Последгиою промывают буфером с рН 7,8, содержащихг 0,1 И триэтаноламина и 0,2 М NaCI, адсорбируют в колонке 75000 единиц. из них 40000 единиц элюируют аммонийацетатным буфером с
25 рН 2,0.
Калликреин-инактиватор можно элюировать от калликреин-колонки 8 М раствором мочевины с добавлением буфера с рН 7,8 0,1 М триэтаноламина при нейтральном рН. После
50 отделения мочевины с помощью колонны
247134
Составитель Т. Полянская
Техред Л. В. Куклина Корректор Г. И. Тарасова
Редактор А. Бер
Заказ 2887/15 Тираж 480 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Раушская, д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 ерЬаг1ех G-25 выход фермента каллекреининактиватора составлял около 100 /о.
Предмет изобретения
Способ выделения ферментных инактиваторов, например калликреина, .из комплекса энзима, присоединенного к полимерному носителю, отличающийся тем, что, с целью получения высокоочищенного инактиватора, комплекс энзима и полимерного носителя приводят в воде в контакт с раствором калликреин5 инакпиватора, после чего полученный комплекс промывают, диссоциируют и изолируют таким образом инактиватор.
