Новые стрептограмины, способ их получения, нуклеотидные последовательности, полипептиды и фармацевтическая композиция

 

Настоящее изобретение относится к новым стрептограминам формулы I и к способу получения стрептограминов путем мутасинтеза при использовании мутированного микроорганизма для изменения биосинтеза по крайней мере одного из предшественников стрептограминов. Описаны также нуклеотидные последовательности и полипептиды, принимающие участие в биосинтезе этих предшественников. Описана также фармацевтическая композиция на основе заявленных соединений, обладающая антибактериальной активностью. 13 с. и 27 з.п. ф-лы, 13 ил., 5 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Соединение общей формулы (I) в которой R₂ и R₄ независимо друг от друга обозначают атом водорода или метильную группу, за исключением случая, когда R₂= R₄-мeтил, Х= СО; R₃ - атом водорода; Х - группа СО, СНОН; R₁ обозначает или

где для замещенных в мета-положении производных А, С, D и Е - атом водорода и В может обозначать галоген, предпочтительно атом фтора; моноалкиламино- или диалкиламино-группу, где алкил обозначает предпочтительно метильную или этильную группу; простую эфирную группу; простую тиоэфирную группу; для замещенных в пара-положении производных А, В, D и Е - атом водорода и С может обозначать галоген; группу NR₁R₂, где R₁ и R₂ независимо друг от друга обозначают группу, выбираемую из водорода; линейной или разветвленной алкильной группы с 1-4 атомами углерода, где когда один из заместителей R₁ или R₂ обозначает метильную группу, другой обязательно обозначает этильную группу; линейной или разветвленной алкенильной группы с 1-4 атомами углерода, где когда один из заместителей R₁ или R₂ обозначает алкенильную группу, другой отличается от метильной группы; или циклоалкильной группы с 3-6 атомами углерода; простую эфирную группу; простую тиоэфирную группу; ацильную или алкоксикарбонильную группу; линейную или разветвленную алкильную группу с 1-6 атомами углерода и предпочтительно выбираемую из метильной, изопропильной и трет-бутильной групп; или тригалогенметильную группу и предпочтительно трифторметил.

2. Соединение по п. 1, выбранное из следующей группы соединений:
4-метилтио-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метилтио-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_H;
5-гидрокси-4-метилтио-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_H;
4-метил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_H;
4-метокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метоксикарбонил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-хлор-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-бром-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-бром-де (-диметиламино) пристинамицин 1_H;
4-иод-де(4-диметиламино)пристинамицин 1_A;
4-иод-де (4-диметиламино)пристинамицин 1_H;
4-трифторметил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-трифторметил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_H;
4-трет-бутил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-изопропил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-изопропил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_E;
4-метиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_H;
4-фтор-4-метил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-амино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-диэтиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-аллиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-диаллиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4- аллилэтиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этилпропиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этилизопропиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этилметилциклопропиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-(1-пирролидинил)-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-трифторметокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-аллилокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этилтио-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метилтиометил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-(2-хлорэтокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-ацетил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-этил-де (4-диметиламино)пристинамицин 1_A;
4-этил-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_H;
4-диметиламино-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A;
4-метилтио-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A и
4-этокси-де (4-диметиламино) пристинамицин 1_A.

3. Способ получения стрептограминов, отличающийся тем, что используют штамм S. pristinaespiralis, имеющий по меньшей мере одну генетическую модификацию, локализованную на уровне одного из генов, выбранных из генов рарА, рарМ, рарС (последовательность 2), рарВ (последовательность 3), pipA (последовательность 5), snbF (последовательность 6), и hpaA (последовательность 8), тем, что вышеуказанный мутантный штамм культивируют в соответствующей культуральной среде, дополнительно включающей по меньшей мере один оригинальный предшественник, выбранный из производных или аналогов аминокислот и альфа-кетокарбоновых кислот, отличающийся от предшественника, биосинтез которого изменяют и выделяют вышеуказанные стрептограмины.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что вышеуказанная предварительная генетическая модификация делает по меньшей мере один из вышеуказанных генов частично или полностью неспособным кодировать природный фермент.

5. Способ по п. 3 или 4, отличающийся тем, что предварительная генетическая модификация состоит в разрушении одного из вышеуказанных генов.

6. Способ по любому из пп. 3-5, отличающийся тем, что штамм S. pristinaespiralis является предпочтительно штаммом S. pristinaespiralis SP92.

7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что предпочтительно названным штаммом является SP92: pVRC508.

8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что предпочтительно названным штаммом является SP212.

9. Способ по п. 6, отличающийся тем, что предпочтительно названным штаммом является SP92pipA: am^R.

10. Способ по п. 6, отличающийся тем, что предпочтительно названным штаммом является SP92hpaA: : am^R.

11. Способ по любому из пп. 3-10, отличающийся тем, что оригинальный предшественник выбирают так, чтобы он был родственным предшественнику, биосинтез которого изменяют.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что оригинальным предшественником является предпочтительно производное фенилаланина, а ген, экспрессию которого изменяют, связан с биосинтезом ДМАФА.

13. Способ по любому из пп. 3-12, отличающийся тем, что получаемым стрептограмином является пристинамицин IB.

14. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, участвующий в биосинтезе ДМАФА, соответствующая гену рарС (последовательность 2) или производной от этой последовательности в силу вырожденности генетического кода.

15. Нуклеотидная последовательность по п. 14, отличающаяся тем, что она представляет собой ген рарС (последовательность 2).

16. Нуклеотидная последовательность по п. 15, отличающаяся тем, что она составляет часть рекомбинантной ДНК.

17. Нуклеотидная последовательность по п. 14 или 15, отличающаяся тем, что она встроена в вектор.

18. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, участвующий в биосинтезе ДМАФА, соответствующая гену рарВ (последовательность 3) или производной от этой последовательности в силу вырожденности генетического кода.

19. Нуклеотидная последовательность по п. 18, отличающаяся тем, что она представляет собой ген рарВ (последовательность 3).

20. Нуклеотидная последовательность по п. 19, отличающаяся тем, что она составляет часть рекомбинантной ДНК.

21. Нуклеотидная последовательность по п. 18 или 19, отличающаяся тем, что она встроена в вектор.

22. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, участвующий в биосинтезе пипеколиновой кислоты, соответствующая гену pipA (последовательность 5) или производной от этой последовательности в силу вырожденности генетического кода.

23. Нуклеотидная последовательность по п. 22, отличающаяся тем, что она представляет собой ген pipA (последовательность 5).

24. Нуклеотидная последовательность по п. 23, отличающаяся тем, что она составляет часть рекомбинантной ДНК.

25. Нуклеотидная последовательность по п. 22 или 23, отличающаяся тем, что она встроена в вектор.

26. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, участвующий в гидроксилировании пипеколиновой кислоты, соответствующая гену snbF (последовательность 6) или производной от этой последовательности в силу вырожденности генетического кода.

27. Нуклеотидная последовательность по п. 26, отличающаяся тем, что она представляет собой ген snbF (последовательность 6).

28. Нуклеотидная последовательность по п. 27, отличающаяся тем, что она составляет часть рекомбинантной ДНК.

29. Нуклеотидная последовательность по п. 26 или 27, отличающаяся тем, что она встроена в вектор.

30. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, участвующий в биосинтезе 3-гидроксипиколиновой кислоты, соответствующая гену hpaA (последовательность 8) или производной от этой последовательности в силу вырожденности генетического кода.

31. Нуклеотидная последовательность по п. 30, отличающаяся тем, что она представляет собой ген hpaA (последовательность 8).

32. Нуклеотидная последовательность по п. 31, отличающаяся тем, что она составляет часть рекомбинантной ДНК.

33. Нуклеотидная последовательность по п. 30 или 31, отличающаяся тем, что она встроена в вектор.

34. Полипептид РарС, участвующий в биосинтезе ДМАФА, образующийся в результате экспрессии нуклеотидной последовательности 2.

35. Полипептид РарВ, участвующий в биосинтезе ДМАФА, образующийся в результате экспрессии нуклеотидной последовательности 3.

36. Полипептид PipA, участвующий в биосинтезе пипеколиновой кислоты, образующийся в результате экспрессии нуклеотидной последовательности 5.

37. Полипептид SnbF, участвующий в гидроксилировании пипеколиновой кислоты, образующийся в результате экспрессии нуклеотидной последовательности 6.

38. Полипептид НраА, участвующий в биосинтезе 3-гидроксипиколиновой кислоты, образующийся в результате экспрессии нуклеотидной последовательности 8.

39. Соединение, выбранное из группы, состоящей из 4-трифторметоксифенилаланина, 3-метиламинофенилаланина, 3-метилтиофенилаланина, 3-фтор-4-метилфенилаланина, 4-метиламинофенилпирувиновой кислоты, 3-этоксифенилаланина, 4-аллиламинофенилаланина, 4-диаллиламинофенилаланина, 4-аллилэтиламинофенилаланина, 4-этилпропиламинофенилаланина, 4-этилизопропиламинофенилалалина, 4-этилметилциклопропиламинофенилаланина, 4-(1-пирролидинил) фенилаланина, 4-этилтиометилфенилаланина, 4-0-(2-хлорэтил)тирозина, 3-диметиламинофенилаланина и 3-этиламинофенилаланина.

40. Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальной активностью, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно соединение по п. 1 или 2 в сочетании со стрептограмином группы А или без него.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157, Рисунок 158, Рисунок 159, Рисунок 160, Рисунок 161, Рисунок 162, Рисунок 163, Рисунок 164, Рисунок 165, Рисунок 166, Рисунок 167, Рисунок 168, Рисунок 169, Рисунок 170, Рисунок 171, Рисунок 172, Рисунок 173, Рисунок 174, Рисунок 175, Рисунок 176, Рисунок 177, Рисунок 178, Рисунок 179, Рисунок 180, Рисунок 181, Рисунок 182, Рисунок 183, Рисунок 184, Рисунок 185, Рисунок 186, Рисунок 187, Рисунок 188, Рисунок 189, Рисунок 190