Ингибиторы протеазы серина

 

Изобретение относится к соединениям формулы (I), где А, В, X, У и r имеют значения, представленные в описании, или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим антитромбиновой активностью. Описаны также фармацевтическая композиция, обладающая антитромбиновой активностью, и соединения для изготовления фармацевтических композиций. 2 с. и 12 з. п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к ингибитору протеазы серина, имеющему алкиниламиновую боковую цепь, к содержащим его фармацевтическим композициям, а также к использованию указанного ингибитора для лечения и профилактики заболеваний связанных с тромбином.

Протеазы серина представляют собой ферменты, которые среди прочего играют важную роль в каскаде коагуляции крови. Членами этой группы являются, например, тромбин, трипсин, факторы VIIa, IXa, Ха, XIa, XIIa и протеин С.

Тромбин является протеазой серина, которая регулирует последнюю стадию в каскаде коагуляции. Главной функцией тромбина является расщепление фибриногена для генерирования мономеров фибрина, которые образуют нерастворимый гель путем поперечного сшивания. Кроме того, тромбин регулирует свое собственное продуцирование, активируя факторы V и VIII на ранних стадиях каскада. Он также оказывает важные воздействия на клеточном уровне, где он воздействует на специфичные рецепторы, вызывая агрегацию тромбоцитов, активацию клеток эндотелия и пролиферацию фибропласта. Таким образом, тромбин играет центральную регуляторную роль в гемостазе и образовании тромбов. Поскольку ингибиторы тромбина могут иметь широкий круг терапевтических применений, в этой области проводились интенсивные исследования.

При разработке синтетических ингибиторов протеаз серина и более конкретно тромбина возрос интерес к малым синтетическим пептидам, которые распознаются протеолитическими ферментами так же, как природные субстраты. В результате были получены новые пептидоподобные ингибиторы, такие как ингибиторы переходного состояния тромбина.

Не ослабевает поиск более эффективных и более селективных ингибиторов протеазы серина для того, чтобы получить ингибиторы, которые могут вводиться в меньших дозах и дают меньше побочных эффектов, и эти эффекты менее тяжелы. Кроме того, особое внимание уделяется биодоступности при оральном введении. Сильные внутривенные ингибиторы тромбина являются клинически эффективными при кратковременном введении, требуемом при лечении связанных с тромбином заболеваний. Однако особенно предупреждение связанных с тромбином заболеваний, таких как инфаркт миокарда, тромбоз и удар, требует продолжительной терапии, предпочтительно путем перорального введения антикоагулянта.

Большинство пептидоподобных ингибиторов тромбина, описанных в предшествующих публикациях, содержит боковую цепь аргинина. Ингибиторы тромбина могут также содержать боковую цепь лизина вместо аргинина как ингибитор N-Me- D-Cha-Pro-Lys-COOH и его производные, описанные Jones et al. , J. Enzyme Inhibition, 9 (1995), 43-60, и ингибиторы N-Me-D-Phe-Pro- Lys-X, где X представляет карбоксамид или карбоновую кислоту, описанные Lewis et al. , Thrombosis and Haemostasis, 74 (4) (1995), 1107-12. Кроме того, Brady et al. , Bioorganic & Medical Chemistry, 3 (1995), 1063-78 описывают D-Phe-Pro-Lys-2 кетоэфир. Другие ингибиторы тромбина описаны в WO 94/25051, где боковая цепь лизина или аргинина заменена аминоциклогексиловыми остатками. Недостатком известных ингибиторов тромбина, содержащих аргинин и лизин, является то, что они имеют низкую биодоступность при пероральном применении.

Было найдено, что ингибиторы протеазы серина и в особенности ингибиторы тромбина, Ха и VIIa, имеющие алкиниламиновую боковую цепь формулы (I) в которой А представляет H, необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил, R¹, R¹-O-C (О)-, R¹-C (О)-, R¹-SO₂-, R¹OOC- (chr²)_m-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, где R¹ выбран из групп (C_1-12) алкил, (C_2-12) алкенил, (C_2-12) алкинил и (С_3-8)циклоалкил, которые могут быть необязательно замещены (С_3-8)циклоалкилом, (С_1-6)алкокси, оксо, OH, COOH, CF₃ или галогеном, и из (C_6-14) арил, (C_7-15) аралкил и (C_8-16) аралкенил, арильные группы которых могут быть необязательно замещены (С_1-6)алкилом, (С_3-8)-циклоалкилом, (C_1-6) алкокси, OH, COOH, CF₃ или галогеном; каждая группа R² независимо представляет H или имеет те же значения, что и R¹; m равно 1, 2 или 3; В представляет собой связь, аминокислоту формулы -NH- CH[(CH₂)_pС(O)OH] -С(O)- или ее производный эфир, причем p является 0, 1, 2 или 3, -N((C_1-12) алкил)-CH₂-СО-, -N ((C_2-12) алкенил) - CH₂-CO-, -N ((C_2-12)алкинил)-CH₂-СО-, -N-(бензил)-CH₂-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или L- или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную, основную или нейтральную боковую цепь, причем аминокислота может быть необязательно замещена N-(C_1-6)-алкилом; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴-chr⁵-C(О)-, в котором R³ и R⁴ независимо представляют R¹, R¹-O-C(О)-, R¹-С(О)-, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m -SO₂-, R²OOC-(chr²)_m, H₂NCO- (chr²)_m- или N-защитную группу, или один из R³ и R⁴ соединен с R₅, образуя 5- или 6-членное кольцо вместе с "N-C", с которым они связаны, причем кольцо может быть конденсировано с алифатическим или ароматическим 6-членным кольцом; и R⁵ представляет гидрофобную основную или нейтральную боковую цепь; X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, серин, треонин, циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (С_1-6)-алкилом, (С_1-6)алкокси, бензилокси или оксо, или X представляет -NR²-CH₂-C(О) - или фрагмент или
в котором n равняется 2, 3 или 4, и W представляет CH или N; Y представляет H, -CHF₂, -CF₃, -CO-NH-(С_1-6)-алкилен-С₆H₅, - COOR⁶, причем R⁶ представляет H или (С_1-6)алкил, -CONR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (C_1-6) алкил, или R⁷ и R⁸ вместе представляют (С_3-6)-алкилен, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола, причем гетероциклы могут быть необязательно замещены (C_1-6)-алкилом, (С_1-6)- алкокси, бензилокси или оксо; и
r равняется 0, 1, 2 или 3;
или их пролекарство, или их фармацевтически приемлемая соль являются сильными и эффективными ингибиторами. Кроме того, некоторые из соединений по изобретению показывают хорошую биодоступность при пероральном введении.

Вещества по настоящему изобретению используются для лечения и профилактики вызываемых тромбином или связанных с тромбином заболеваний. Они включают ряд тромботических и протромботических состояний, в которых активирован коагуляционный каскад, что включает, но не ограничивается этим, глубокий тромбоз вен, легочную эмболию, тромбофлебит, закупорку артерий в результате тромбоза или эмболии, откупорку артерий во время или после пластической хирургии сосудов или тромболиза, рестеноз после повреждения артерий или инвазивных кардиологических процедур, послеоперационные венозные тромбоз или эмболию, острый или хронический атеросклероз, удар, инфаркт миокарда, рак и метастазы, и нейродегенеративные расстройства. Вещества по изобретению могут быть также использованы как антикоагулянты в экстракорпоральных потоках кровообращения, которые необходимы при диализе и хирургии. Вещества по изобретению могут быть также использованы как антикоагулянты in vitro.

Предпочтительные соединения по изобретению имеют формулу I, в которой X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, серин, треонин или -NR²-CH₂-C(О)-.

Другими предпочтительными соединениями формулы I являются те, где А является таким, как определено ранее; В представляет собой связь, аминокислоту формулы -NH-СH[(CH₂)_pС(O)OH] -С(O)- или ее производный эфир, причем p равняется 0, 1, 2 или 3, -N((С_1-6)-алкил)-CH₂-СО-, -N((C_2-6) алкенил)-CH₂-СО-, -N-(бензил)-CH₂-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, причем аминокислота может быть необязательно замещена N-(C_1-6) алкилом; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-; и X представляет циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (C_1-6)-алкилом, (C_1-6)-алкокси, бензилокси или оксо, или X представляет -NR²-CH₂-C(О) - или фрагмент

или

Более предпочтительными являются соединения формулы I, в которых А представляет H, 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-, 9-гидроксифлуорен-9-карбоксил, R¹, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, где R¹ выбран из групп (C_1-12) алкил, (C_2-12)алкенил, (C_6-14)арил, (C_7-15)аралкил и (С_8-16)аралкенил; каждая группа R² независимо представляет H или имеет те же значения, что и R¹, В представляет собой связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где аминокислота может быть необязательно замещена N-(C_1-6) алкилом; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-; Y представляет - CO-NH-(C_1-6) алкилен-C₆H₅, -COOR⁶, -CONR⁷R⁸ или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола.

Особо предпочтительными являются те соединения, где А представляет H, R¹-SO₂- или R²OOC- (chr²)_m-; В представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, в котором по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R²OOC- (chr²)_m- или R¹-SO₂-, а другой независимо представляет (C_1-12)алкил, (C_2-12)алкенил, (C_2-12)алкинил, (С_3-8)-циклоалкил, (C_7-15)-аралкил, R¹-SO₂- или R²OOC-(chr²)_m-, и R⁵ представляет гидрофобную боковую цепь; Y представляет -CO-NH-(C_1-6)-алкилен-C₆H₅,
-COOR⁶, где R⁶ представляет H или (C_1-3)алкил, - CONR⁷R⁸, R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (C_1-3)алкил, или R⁷ и R⁸ вместе представляют (С_3-5) алкилен, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

Когда А представляет R²OOC-(chr²)_m-, В предпочтительно представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N- chr⁵-C(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R²OOC-(chr²)_m-, а другой независимо представляет (С_1-12)алкил, (C_2-6)алкенил, (С_3-8)-циклоалкил, бензил, R¹-SO₂- или R²OOC- (chr²)_m-; и X представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту или - [N-(С_3-8)циклоалкил] -CH₂-С(О)-. Более предпочтительными являются соединения, в которых А есть HOOC-СH₂-; В есть D-Phe, D-Cha, D- Coa, D-Dpa, p-C1-D-Phe, p-OMe-D-Phe, p-OEt-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-ОМе-O-Pbe, D-Chg; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет HOOC-CH₂- и другой независимо представляет (С_1-4)алкил, (С_1-4)алкил-SO₂- или HOOC-СH₂, и R⁵ представляет (С_3-8)циклоалкил, (С_3-8)циклоалкил-(C_1-4)алкил, фенил, бензил, необязательно замещенный хлором или (С_1-4)алкокси. Особенно предпочтительны те соединения, в которых Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

Если А представляет R¹-SO₂-, В предпочтительно представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, в котором по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R¹-SO₂- и другой независимо представляет (С_1-12)алкил или R¹-SO₂-; Х представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4- дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту, -[N-циклопентил] -CH₂-С(O)- или фрагмент

или

Более предпочтительными являются те соединения, в которых А представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-; В представляет связь, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, p-OMe-D-Phe, p-OEt-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-ОМе-D-Phe, D-Chg; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-С(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-, а другой независимо представляет (С_1-12)алкил или R¹-SO₂- и R⁵ представляет (С_3-8)циклоалкил, (С_3-8)циклoaлкил (C_1-4)aлкил, фенил, бензил, дифенилметинил, причем группы необязательно замещены хлором или (С_1-4)алкокси. Наиболее предпочтительными являются те соединения, в которых Y представляет -CO-NH-CH₂-C₆H₅, -CO-NH-CH₂CH₂-С₆H₅ или -CONR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (C_1-3) алкил, или R⁷ и R⁸ вместе являются (С_3-5)алкиленом, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

Hаиболее предпочтительно r в соединениях формулы I равняется 1.

N-защитная группа, как она определена при определении остатка А, является любой N-защитной группой, применяемой для пептидов. Подходящие N- защитные группы можно найти в Т. W. Green and P. G. M. Wuts: Protective Groops in Organic Synthesis, Second Edition (Wiley, NY, 1991) и в The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, E. Gross and J. Meienhofer, Eds. (Academic Press, New York, 1981).

Термин "необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил" означает группу формулы HO-CR^aR^b-C(О)-, в которой R^a и R^b независимо представляют H, гидрофобную боковую цепь, R^a и R^b вместе образуют 5- или 6-членное кольцо, которое необязательно конденсировано с одним или двумя алифатическими или ароматическими 6-членными кольцами, и 5- или 6-членное кольцо состоит из атомов углерода и необязательно одного гетероатома, выбранного из N, О и S. Предпочтительными D, L--гидроксиацетильными группами являются 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил- и 9-гидроксифлуорен-9- карбоксил.

Термин (С_1-12)алкил означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 12 атомов углерода, такую как метил, этил, трет-бутил, изопентил, гептил, додецил и т. п. Предпочтительными алкильными группами являются (С_1-6)алкилгруппы, имеющие 1-6 атомов углерода. Более предпочтительными являются (C_1-4) алкилгруппы. Более предпочтительными в определении R⁶, R⁷ и R⁸ являются (C_1-3) алкилгруппы, имеющие 1-3 атома углерода, такие как метил, этил, изопропил.

Группа (С_2-12)алкенил представляет разветвленную или неразветвленную ненасыщенную углеводородную группу, имеющую от 2 до 12 атомов углерода. Предпочтительными являются (С_2-6)алкенилгруппы. Примерами являются этенил, пропенил, аллил, и т. п.

Термин (C_1-6) алкилен означает разветвленную или неразветвленную алкиленовую группу, имеющую от 1 до 6 атомов углерода, такую как -(CH₂)_m, где m имеет значения от 1 до 6, - CH(CH₃)-, -CH(CH₃)-(CH₂)- и т. д. Предпочтительными алкиленовыми группами в определении Y являются этилен и метилен.

Группа (C_1-12) алкинил представляет разветвленную или неразветвленную углеводородную группу, содержащую тройную связь и имеющую от 2 до 12 атомов углерода. Предпочтительными являются (С_2-6)алкинилгруппы, такие как этинил и пропинил.

Группа (С_6-14)арил представляет ароматическую группу из 6-14 атомов углерода. Арильная группа может, кроме того, содержать один или несколько гетероатомов, таких как N, S или О. Примерами арильных групп являются фенил, нафтил, (изо)хинолил, инданил и т. п. Наиболее предпочтительной является фенильная группа.

Группы (C_7-15)аралкил и (C_8-16)аралкенил являются, соответственно, алкильными и алкенильными группами, замещенными одной или несколькими арильными группами, с общим числом атомов углерода соответственно от 7 до 15 или от 8 до 16.

Термин (C_1-6) алкокси означает алкоксигруппу, имеющую 1-6 атомов углерода, алкильная часть которой может иметь значения, определенные выше.

Термин (С_3-8)циклоалкил означает циклоалкильную группу, имеющую 3-8 атомов углерода, а именно циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил. Предпочтительными циклоалкильными группами являются циклопентил и циклогексил.

Термин "галоген" означает фтор, хлор, бром или йод.

Термин "производный эфир" означает любое подходящее эфирное производное, предпочтительно (С_1-4)алкиловые эфиры, такие как метиловый, этиловый или трет-бутиловый эфиры.

Термины 1- и 3-Tiq обозначают соответственно 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1- или -3-карбоновую кислоту; 1- и 3-Piq представляют, соответственно, 1- и 3-карбоксипергидро-изохинолин; Atc представляет 2-аминотетралин-2-карбоновую кислоту; Aic представляет аминоинданкарбоновую кислоту; Phe представляет фенилаланин; Cha представляет циклогексилаланин; Dpa представляет дифенилаланин; Coa представляет циклооктилаланин; Chg представляет циклогексилглицин; N1e представляет норлейцин; Asp представляет аспарагиновую кислоту.

Термин "гидрофобная боковая цепь" означает (С_1-12)алкил, необязательно замещенный одним или несколькими (С_3-8)циклоалкилгруппами или (C_6-14) арилгруппами (которые могут содержать гетероатом, например азот), такими как циклогексил, циклооктил, фенил, пиридинил, нафтил, тетрагидронафтил и т. п. , причем гидрофобная боковая цепь может необязательно быть замещена заместителями, такими как галоген, трифторметил, низший алкил (например, метил или этил), низший алкокси (например, метокси), фенилокси, бензилокси, и т. п.

В этих определениях термин "замещенный" означает замещенный одним или несколькими заместителями.

Аминокислоты, имеющие основную боковую цепь, представляют, например, аргинин и лизин, предпочтительно аргинин, но не ограничены этим. Термин "аминокислоты, имеющие нейтральную боковую цепь" относятся к таким аминокислотам как метионинсульфон и т. п.

Циклические аминокислоты представляют, например, 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 1-амино-1-карбокси-(С_3-8)циклоалкан (предпочтительно C₄, C₅ или С₆), 4-пиперидинкарбоновую кислоту, 4-тиазолидин-карбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, азапролин, 2-октагидроиндол-карбоновую кислоту и т. п. Предпочтительными являются 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, пипеколиновая кислота, 4-тиазолидинкарбоновая кислота, 3,4-дегидропролин и 2- октагидроиндолкарбоновая кислота.

Термин "пролекарство" означает соединение, в котором алкиниламино боковая цепь соединения формулы I защищена, например, гидрокси, (С_1-6)алкокси или (С_1-6)алкоксикарбонильной группой.

Изобретение, кроме того, защищает способ получения соединения формулы I, включающий сочетание подходящих защищенных аминокислот или аналогов аминокислот с последующим удалением защитных групп.

Соединения формулы I могут быть получены обычным для таких соединений способом. Модифицированная аминокислота, имеющая алкиниламино боковую цепь вводятся способом, подобным известным методам для других аминокислот.

Для этой цели подходящие производные аминокислот или пептиды с защищенным N в -положении (и с защищенной боковой цепью, если имеется реакционноспособная боковая цепь) активируют и вводят в реакцию сочетания с подходящими производными аминокислот или пептидами с защищенным карбоксилом либо в растворе, либо на твердом носителе. Защиту -аминогрупп обычно осуществляют уретановыми группами, такими как лабильные под действием кислот третбутилоксикарбонильная (Boc) группа, бензилокси-карбонильная (Z) группа и их замещенные аналоги или лабильная под действием оснований 9-флоренилметилоксикарбонильная (Fmoc) группа. Z группа может быть также удалена каталитическим гидрирированием. Другие подходящие аминозащитные группы включают Nps, Bmv, Врос, Msc и др. Хороший обзор аминозащитных групп дан в The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, E. Gross and J. Meienhofer, Eds. (Academic Press, New York, 1981). Защиту карбоксильных групп осуществляют путем образования сложных эфиров, например эфиров, лабильных под действием оснований, подобных метиловым или этиловым эфирам, или эфиров, лабильных под действием кислот, подобных трет-бутиловым эфирам, или эфиров, лабильных при гидрогенолизе, подобных бензиловым эфирам. Защита алкиниламиновой боковой цепи может быть осуществлена при использовании вышеупомянутых групп. Активация карбоксильной группы подходящих защищенных аминокислот или пептидов может осуществляться азидом, смешанным ангидридом, активным эфиром или карбодиимидным методом, особенно с добавлением каталитических и подавляющих рацемизацию соединений, таких как 1-гидроксибензотриазол, N- гидроксисукцинимид, 3-гидрокси-4-оксо-3, 4-дигидро-1,2,3- бензотриазин, N-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид, что описано в The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology (см. выше) и Pure and Applied Chem. 59(3), 331-344 (1987).

Соединения по изобретению, которые могут быть в форме свободного основания, могут быть выделены из реакционной смеси в форме фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемые соли могут быть также получены путем реакции свободного основания формулы I с органической или неорганической кислотой, такой как хлористый водород, бромистый водород, йодистый водород, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, метансульфоновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, щавелевая кислота, лимонная кислота, бензойная кислота и аскорбиновая кислота.

Соединения по изобретению могут иметь один или несколько хиральных атомов углерода и могут поэтому быть получены в виде чистого энантиомера, или в виде смеси энантиомеров, или в виде смеси, содержащей диастереомеры. Способы получения чистых энантиомеров хорошо известны в практике, например кристаллизация солей, полученных из оптически активных кислот и рацемической смеси, или хроматография с использованием хиральных колонок. Для диастереомеров могут быть использованы колонки с прямой фазой или с обращенной фазой.

Соединения по изобретению могут вводиться энтерально или парентерально, и для человека предпочтительно в суточной дозе 0,001-100 мг на кг веса тела, предпочтительно 0,01-10 мг на кг веса тела. Эти соединения в смеси с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, описанными, например, в стандартной ссылке на Gennaro et al. Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. Mack Publishing Company, 1990, см. в особенности Part 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture) могут быть спрессованы в твердые стандартные дозировки, такие как пилюли, таблетки, или могут быть превращены в капсулы или свечи. Посредством фармацевтически пригодных жидкостей соединения могут быть также применены в форме раствора, суспензии, эмульсии, например, для использования как препарат для инъекций или как спрей, например для использования в виде носового спрея.

Для изготовления дозированных единиц, например таблеток, предполагается использовать обычные добавки, такие как наполнители, красители, полимерные связующие и тому подобное. В общем, может быть использована любая фармацевтически приемлемая добавка, которая не нарушает функцию активного соединения.

Подходящие носители, с которыми могут вводиться композиции, включают лактозу, крахмал, производные целлюлозы и т. п. , или их смеси, используемые в подходящих количествах.

Изобретение дополнительно поясняется нижеследующими примерами.

ПРИМЕРЫ
Термин "лизининил" в сочетаниях -Лизининил [COCO] -OH, -лизининил-ОМе и -лизининил-(2-тиазолил) означает остаток следующей формулы:

где Y = COOH, OCH₃ и 2-тиазолил соответственно;
Azt = 2-азетидинкарбоновая кислота;
Boc = трет-бутилоксикарбонил;
Cbz = бензилоксикарбонил; Bzl = бензил.

ПРИМЕР 1
HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(a) 1-амино-4-хлор-2-бутингидрохлорид
1,4-дихлор-2-бутин (73,8 г) растворяли в хлороформе (600 мл). Добавляли гексамин (84,0 г) и реакционную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 2,5 ч и затем выдерживали на холоду при 5^oC в течение 24 часов. Гексаминовый комплекс (220 г) отфильтровывали. Раствор комплекса в этаноле (1 л) перемешивали в течение 24 часов при комнатной температуре с концентрированной соляной кислотой (180 мл). Выпавший в осадок хлористый аммоний отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении до тех пор, пока не начиналась кристаллизация. После этого добавлением диэтилового эфира осаждали гидрохлорид 1-амино-4- хлор-бутина. Перекристаллизацией из смеси этанол/эфир получали 1-амино-4-хлор-2-бутин-гидрохлорид (59,75 г).

ТСХ: R_f = 0,60, силикагель, дихлорметан/метанол/вода 70/30/5 (по объему).

(b) 1 -ацетиламино-4-хлор-2-бутин
1-амино-4-хлор-2- бутингидрохлорид (59,75 г) растворяли в 10% водном растворе ацетата натрия (335 мл). Добавляли этилацетат (500 мл), и при комнатной температуре вводили по каплям уксусный ангидрид (70 мл). 25% водный раствор ацетата натрия добавляли до pH 5 и раствор перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Этилацетатный слой отделяли и водный слой дважды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, рассолом и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали под вакуумом, получая 1-ацетиламино-4-хлор-2-бутин в виде желтого сиропа (58,8 г).

ТСХ: R_f = 0,99, силикагель, дихлорметан/метанол/вода 70/30/5 (по объему).

(с) Диэтиловый эфир ацетамидо(4-ацетамидо-2-бутинил)-малоновой кислоты
К холодному (0^oC) раствору гидрида натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 3,48 г) в диоксане (70 мл) добавляли по каплям абсолютный этанол (70 мл). Смеси давали нагреться до комнатной температуры и по каплям добавляли раствор диэтилацетамидомалоната (20,5 г) в диоксане (70 мл). Добавляли йодистый натрий (9,07 г) и при комнатной температуре по каплям вводили раствор 1-ацетиламино- 4-хлор-2- бутина (11 г) в диоксане (140 мл). После добавления еще 100 мл этанола смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2,5 ч. Реакционную смесь охлаждали и образовавшийся осадок отфильтровывали. Очистка с использованием хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/метанол, 9/1 по объему) дала диэтиловый эфир ацетамидо-(4-ацетамидо-2-бутинил)малоновой кислоты (15,9 г).

ТСХ: R_f = 0,25, силикагель, этилацетат.

(d) Дигидрохлорид 2,6-диамино-4-гексиноевой кислоты (H-лизинин дигидрохлорид)
Диэтиловый эфир ацетамидо(4-ацетамидо-2- бутинил)малоновой кислоты (7,64 г) растворяли в смеси уксусной кислоты (140 мл) и 6 М раствора соляной кислоты (290 мл) и нагревали в течение ночи при 95^oC. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток кристаллизовали из смеси этанол/вода, получая дигидрохлорид 2,6-диамино-4-гексиноевой кислоты в виде кристаллического порошка (4,0 г).

(е) Вос-лизининил (Cbz) -OH
Пентагидрат сульфата меди (II) (287 мг) добавляли к раствору дигидрохлорида 2, 6-диамино-4-гексиноевой кислоты (500 мг) в 17 мл смеси диоксан/вода (3/2 по объему) и pH доводили до 9 добавлением 2 М раствора гидроокиси натрия. При комнатной температуре добавляли по каплям N-(бензилоксикарбонилокси)сукцинимид (573 мг) в диоксане (10 мл) и вместе с ним 2 М раствор гидроокиси натрия для поддержания pH около 9-9,5. После того как добавление закончилось, реакционную смесь оставляли на ночь при перемешивании при комнатной температуре. Смесь фильтровали и полученный таким образом осадок суспендировали в диоксане (20 мл). Добавляли ди-третбутилдикарбонат (500 мг) и pH доводили до 12-13 добавлением 4 М раствора гидроокиси натрия. Реакционную смесь оставляли на ночь при перемешивании при комнатной температуре. Смесь фильтровали и фильтрат разбавляли водой. Добавляли 4 М раствор соляной кислоты до pH 2 и водный слой дважды экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы промывали водой и сушили над сульфатом натрия, растворитель удаляли выпариванием, получая Вос- лизининил(Cbz)-OH (540 мг).

ТСХ: R_f = 0,70, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(f) Вос-лизининил (Cbz) -NMeOMe
Гидрохлорид N, O- диметилгидроксиламина (363 мг) и [2-(1H-бензотриазол-1-ил) -1,1,3,3-тетраметилуронийтетрафторборат] (1,2 г) добавляли к раствору Вос-лизининил (Cbz)-OH (1,4 г) в дихлорметане (50 мл), и pH доводили до 9-10 добавлением N, N-диизопропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь промывали последовательно холодным 2 М раствором соляной кислоты, водой, 5% водным раствором гидрокарбоната натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: этилацетат/гептан 3/2 по объему), получая Вос- лизинил(Cbz)-NMeOMe (1,37 г).

ТСХ: R_f = 0,70, силикагель, этилацетат/гептан 4/1 (по объему).

(g) Вос-лизининил (Cbz)-(2-тиазолил)
Раствор 2-бромтиазола (1,78 г) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли по каплям при перемешивании к холодному (-78^oC) раствору н-бутиллития (10,9 ммоль) в диэтиловом эфире (10,9 мл). После перемешивания раствора в течение 30 мин при -78^oC медленно добавляли раствор Boc-лизинил(Cbz)-NMeOMe (1,37 г) в сухом тетрагидрофуране (15 мл). Смесь перемешивали при -78^oC в течение 1 ч, затем добавляли 5% водный раствор гидрокарбоната натрия. Смеси давали нагреться до комнатной температуры и слои разделяли. Водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: этилацетат/гептан, 1/1 по объему), получая Вос- лизининил(Cbz)-(2-тиазолил) (1,21 г).

ТСХ: R_f = 0,72, силикагель, этилацетат/гептан 3/1 (по объему).

(h) H-лирининил (Cbz)-(2-тиазолил)TFA
Вос-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил) (1,21 г) растворяли в смеси трифторуксусная кислота (TFA)/дихлорметан (15 мл; 1/1 по объему) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. После удаления растворителя выпариванием сырой амин выделяли с количественным выходом в виде желтого масла и напрямую использовали для получения N-Boc-N- (трет-бутилоксикарбонилметил) -D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) -(2-тиазолила).

ТСХ: R_f = 0,25, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(i) H-D-Cha-OMeHCl
К холодному (-20^oC) и сухому метанолу (195 мл) добавляли по каплям тионилхлорид (28 мл). Добавляли H-D-Cha-OHHCl (40 г) и реакционную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 5 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и совместно выпаривали с метанолом (3 раза). Остаток кристаллизовали из смеси метанол/диэтиловый эфир, получая H-D-Cha-OMeHCl в виде белого кристаллического порошка (40,9 г).

ТСХ: R_f = 0,66, силикагель, н-бутанол/уксусная кислота/вода 10/1/3 (по объему).

(j) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-OMe
Трет-бутилбромацетат (36 г) добавляли при перемешивании к раствору H-D-Cha-OMeHCl (40,9 г) в 400 мл ацетонитрила. Величину pH смеси доводили до 8,5 N, N-диизопропилэтиламином. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и выпаривали под вакуумом. Остаток растворяли в дихлорметане, раствор промывали водой, сушили над сульфатом натрия и выпаривали под вакуумом. Хроматография на силикагеле смесью гептан/этилацетат 9/1 (по объему) дает 64 г N-(трет- бутилоксикарбонилметил) -D-Cha-OMe.

ТСХ: R_f = 0,25, силикагель, этилацетат/гептан 1/1 (по объему).

(к) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe
Величину pH раствора N- (трет-бутилоксикарбонилметил) -D-Cha-OMe (64 г) и ди-трет- бутилдикарбоната (40,3 г) в N. N-диметилформамиде (500 мл) доводили до 8,5 N. N-диизопропилэтиламином. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли под вакуумом. К остатку добавляли дихлорметан и воду. Органический слой отделяли, промывали холодной 1N соляной кислотой, водой, 5% гидрокарбонатом натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом натрия и фильтрат выпаривали до аморфного твердого N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-ОМе с выходом 59,6 г.

ТСХ: R_f = 0,50, силикагель, этилацетат/гептан 1/1 (по объему).

(l) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH
Раствор N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe (59,6 г) в 900 мл смеси диоксан/вода 9/1 (по объему) обрабатывали избытком 6N гидроокиси натрия для поддержания pH на уровне 12 в течение 6 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили над сульфатом натрия. Фильтрат упаривали, получая 54 г N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-OH.

ТСХ: R_f = 0,60, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 (по объему).

(m) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Osu
Раствор N- (трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (12,5 г) в 200 мл ацетонитрила вводили в реакцию с N-гидроксисукцинимидом (4,1 г) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлоридом (6,84 г), оставляя смесь на ночь при комнатной температуре. Реакционную смесь выпаривали до сухого остатка и остаток растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали, получая активный эфир, который напрямую использовали на следующей стадии.

(n) N- (трет- бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-Pro-OH
H-Pro-OHHCl (7,5 г) растворяли в 100 мл воды. Величину pH раствора доводили до 8 1N раствором гидроокиси натрия, после чего вводили по каплям растворенный в 100 мл N, N-диметилформамида N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Osu. Реакцию проводили при перемешивании, оставляя смесь на ночь при комнатной температуре при pH 8. Реакционную смесь охлаждали и pH доводили до 2 1N соляной кислотой. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом натрия и выпаривали под вакуумом. Очистка на силикагеле с использованием градиента этилацетат /метанол 9/1 -> 1/1 (по объему) давала 11,0 г целевого дипептида.

ТСХ: R_f = 0,81, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 163/20/6/11 (по объему).

(о) N-Boc-N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-Pro-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил
N-Boc-N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-Pro-OH (1, 31 г) растворяли в сухом /диметилформамиде (15 мл). После добавления триэтиламина (750 мкл) реакционную смесь помещали под азот и охлаждали до -15^oC. После этого добавляли изобутилхлороформиат (352 мкл) и смесь оставляли перемешиваться в течение 15 мин при - 15^oC. H-L-лизининил (Cbz)-(2-тиазолил) TFA (1,15 г) растворяли в сухом /диметилформамиде (10 мл) и добавляли по каплям к холодному раствору смешанного ангидрида, поддерживая pH на уровне 8,5 добавлением триэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -15^oC. Реакционную смесь выпаривали до сухого остатка. Остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно водой, 5% водным раствором гидрокарбоната натрия, водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: дихлорметан/метанол 95/5 по объему), получая N-Boc-M- (трет-бутилоксикарбонилметил) - D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) - (2-тиазолил) (1,77 г).

(p) HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
N-Boc-N- (трет- бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz)-(2-тиазолил) (1,77 г) обрабатывали смесью трифторуксусная кислота/тиоанизол 10/1 по объему (20 мл) в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и остаток растворяли в воде. Водную фазу обильно промывали диэтиловым эфиром. Водный слой напрямую подавали на препаративную ЖХВР, колонка Supelcosil LC-18-BD, используя градиентное элюирование системой от 20% А/ 70% В/10% С до 20% А/ 50% В/ 30% С за 45 мин, скорость потока 20 мл/мин (А: 0,5 М фосфатный буфер, pH 2,1; В: вода; С: ацетонитрил/вода 3/2 по объему).

Выход двух диастереомеров:
^*Масса 300 мг: ES1^*: 518,5 [АН] ⁺; 259,8 [АH2] ²⁺
R_t (ЖХ): 28,81 мин; от 20% А/ 80% В до 20% А/ 20% В/ 60% С за 40 мин.

^*Масса 500 мг: ES1^*: 518,5 [АH] ⁺; 259,8 [АH2] ²⁺
R_t: (ЖХ): 29,88 мин, от 20% А/ 80% В до 20% А/ 20% В/ 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 2
N-Ме-D-Phe-Pro-лизинил [COCO] -OH
(а) Вос-лизининил (Cbz)-OMe
[2-(1H-бензотриазол)-1,1,3,3-тетраметилуронийтетрафторборат] (1,83 г) добавляли к раствору Вос-лизининил(Cbz)OH (2,15 г) в смеси дихлорметан: метанол 9: 1 (25 мл) и pH доводили до 7-8 добавлением N, N-диизипропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь промывали 1N соляной кислотой, водой, 5% раствором гидрокарбоната натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния в смеси этилацетат/гептан 6/4 (по объему). Выход 2,17 г.

R_f = 0,5, силикагель, этилацетат/гептан, 3: 1 по объему.

(b) 2-ацетокси-3- (трет-бутилоксикарбониламино)-7-(бензилоксикарбониламино) - гепт-5-ин-нитрил
К раствору 2 г Вос-лизининил-ОМе в 60 мл дихлорметана при -78^oC при перемешивании добавляли 18,2 мл переохлажденного раствора гидрида диизобутилалюминия (1,0 М раствор в гексане) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже -70^oC. Раствор перемешивали в течение 0,5 ч. Смесь выливали в раствор лимонной кислоты в воде и экстрагировали дихлорметаном. Объединенные экстракты промывали водой, 5% раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушили над сульфатом натрия и фильтровали.

Фильтрат концентрировали под вакуумом, получая 2,25 г масла. Сырой продукт растворяли в 25 мл дихлорметана. Раствор охлаждали до 0^oC и добавляли 0,31 г бензилтриэтиламмонийхлорида, 1,2 мл уксусного ангидрида и раствор 2,5 г цианида натрия в 75 мл воды. Смесь интенсивно перемешивали в течение 30 мин при 0-5^oC. Органический слой отделяли, дважды промывали водой, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали до сухого остатка. Остаток хроматографировали на окиси кремния в смеси гептан: этилацетат, 8: 2 (по объему), получая 1,4 г 2-ацетокси-3- (трет- бутилоксикарбониламино)-7-(бензилоксикарбониламино)-гепт-5-ин- нитрила. R_f = 0,6, силикагель, гептан: этилацетат 1: 1 (по объему).

(с) H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OH
6,5 г газообразного хлористого водорода вводили при -20^oC в раствор 1,4 г 2-ацетокси-3- (бутилоксикарбониламино)-7-(бензилоксикарбониламино) -гепт-5-ин- нитрила в смеси диэтиловый эфир/метанол 9/1 (по объему). Смесь оставляли при перемешивании на ночь при 0-4^oC. Затем смесь охлаждали до -20^oC и добавляли 6,75 мл воды. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при 20^oC. Органический слой отделяли. Величину pH водной фазы доводили до 10 1N гидроокисью натрия, после чего проводили экстракцию н-бутанолом. Объединенные экстракты промывали рассолом и концентрировали под вакуумом, получая 650 мг H- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OH.

R_f = 0,17 в смеси этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(d) N-Boc-N-Me-D-Phe-OH
Коммерчески доступный H-N-Me-D-Phe-OH (11 г) растворяли в смеси диоксан/вода 1/2 (165 мл), после чего добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (19,1 г). Показатель pH реакционной смеси поддерживали на уровне 8,5-9, используя гидроокись натрия в качестве основания. Далее реакционную смесь концентрировали под вакуумом и остаток растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали 0,1N соляной кислотой и насыщенным хлористым натрием, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали до сухого остатка, получая 17,1 г продукта.

ТСХ: R_f = 0,35, силикагель, дихлорметан/метанол 8/2 (по объему).

(е) N-Boc-N-Me-D-Phe-Pro-OH
N-Boc-N-Me-D-Phe-OH (17,1 г) и H-Pro-OMeHCl (10,1 г) вводили в реакцию сочетания по методике, описанной для синтеза N- (трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl (см. Пример 1). Полученный дипептид, N-Boc-N-Me-D-Phe-Pro-OMe (22,6 г) растворяли в смеси диоксан/вода 9/1 (200 мл) и обрабатывали 4N гидроокисью натрия при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли 300 мл ледяной воды, подкисляли (pH 2), используя 4N соляную кислоту, и экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали насыщенным хлористым натрием, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали до сухого остатка, получая сырой продукт. Кристаллизация из смеси диэтиловый эфир/гептан 2/3 (по объему) дает чистый N-Boc-N-Me-D-Phe-Pro-OH (12,6 г).

ТСХ: R_f = 0,20, силикагель, толуол/этилацетат 6/4 (по объему).

(f). N-Вос-N-Ме-Р-Phe-Pro-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OH
Изобутилхлороформиат (0,101 г) добавляли к раствору N-Boc-N-Me-D- Phe-Pro-OH (0,195 г) в N, N-диметилформамиде (10 мл) при -20^oC и pH смеси доводили до 8 триэтиламином. К реакционной смеси при -20^oC добавляли раствор H-L-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH (0,3 г) в N, N- диметилформамиде (10 мл), pH которого был доведен триэтиламином до 8,5. Смесь оставляли при перемешивании на ночь. Реакция протекала не до конца, в связи с чем раствор N-Boc-N-Me-D-Phe-Pro-OH (293 мг) в N, N-димeтилфopмaмидe (5 мл) обрабатывали при 0^oC N-гидроксисукцинимидом (95 мг) и 1,3-дициклогексилкарбодиимидом при pH 8,5 и добавляли к реакционной смеси. Смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Летучие компоненты удаляли под вакуумом. Остаток растворяли в дихлорметане. Раствор промывали водой, сушили над сульфатом натрия и выпаривали до сухого остатка. Остаток хроматографировали на силикагеле в смеси этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/5/1,5/2,75 (по объему). Фракции разливали тонким слоем, получая 0,26 г N- Boc-N-Me-D-Phe-Pro-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH.

R_f = 0,24 в смеси этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/5/1,5/2,75 (по объему).

(g) N-Boc-N-Me-D-Phe-Pro-лизининил(Cbz) [COCO] -OH
Раствор N-Вос-N-Ме-D-Phe-Pro-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH (260 мг) в 20 мл дихлорметана обрабатывали 1,1,1-триацетокси- 1,1-дигидро-1,2-бензйодоксол-3-(1H)-оном (180 мг). Смесь перемешивали в течение 3,5 ч при комнатной температуре, промывали раствором тиосульфата натрия и водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали до сухого остатка, получая 0,35 г N-Boc-N-Me-D-Phe-Pro- лизининил(Cbz) [COCO] -OH вместе с некоторыми продуктами разложения реагента.

R_f = 0,36 в смеси этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(h). N-Me-D-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH
Раствор N-Вос-N-Ме-D-Phe-Pro-лизининил (Cbz) [COCO] -OH (0,3 г) в смеси трифторуксусная кислота/тиоанизол 10/1 (10 мл) перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, растворяли в воде и промывали диэтиловым эфиром. Остаток сушили под вакуумом, получая 430 мг сырого N-Me-D-Phe-Pro- лизининил [COCO] -OH, который очищали препаративной ЖХВР на колонке Supelcosil LC-18-DB, используя градиентное элюирование от А 20%; В 80%; С 0% до А 20%; В 70%; С 10% за 45 мин при скорости потока 20 мл/мин. Выход двух диастереомеров:
^*53,7 мг; MS: FAB⁺ 429,1 [М+H] ; FAB^- 426,9 [M-H]
_t(ЖХ): 15,25 мин; от А: 20%; В: 80%; С: 0% до A: 20%: В: 20%; С: 60% за 40 мин,
^*51,6 мг; MS: FAB" 429,1 [M+H] ; FAB^- 426,8 [M-H]
R_t(ЖХ): 16,30 мин; от А: 20%; В: 80%; С: 0% до А: 20%; В: 20%; С: 60% за 40 мин.

ПРИМЕР 3
N-Me-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OH
(a) N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-OH
N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-OH получали по такой же методике, какая описана в примере 2 (е), исходя из N-Me-N-Boc-D-Cha-OH и H-Pro-OMeHCl.

ТСХ: R_f = 0,26, силикагель, этилацетат/метанол 4/1 (по объему).

(b) Вос-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -ОМе
Раствор 2-ацетокси-3- (трет-бутилоксикарбониламино)-7-1(бензилоксикарбониламино)-гепт- 5-ин-нитрила (36 г) в смеси диэтиловый эфир/метанол (3/1 по объему, 1 л) охлаждали до -20^oC. Газообразный хлористый водород пропускали через раствор до достижения концентрации 3 М (109 г), после чего смесь оставляли при перемешивании на ночь при температуре 0-4^oC. Добавляли воду (170 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру < 5^oC. Далее смеси давали нагреться и перемешивали ее еще 5 часов при комнатной температуре. Органическую фазу отделяли. Величину pH водной фазы доводили до 10 разбавленным раствором гидроокиси натрия, после чего экстрагировали бутанолом. Объединенные экстракты промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и выпаривали до сухого остатка, получая H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMe (58 г). К раствору H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe (58 г) в метаноле добавляли ди-третбутилдикарбонат (18,4 г) и pH доводили до 8 добавлением триэтиламина. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. После завершения реакции смесь концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в этилацетате и промывали 0.1 N раствором соляной кислоты и рассолом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: градиент гептан/этилацетат 7/3 об. /об. ---> этилацетат ---> этилацетат/метанол 8/2 об. /об. ). Фракции разливали тонким слоем, получая 4,76 г Вос-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe.

ТСХ: R_f = 0,40, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 (по объему).

Далее выделяли побочный продукт, который идентифицировали как Вос-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OBu (0,94 г).

ТСХ: R_f = 0,47, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 (по объему).

(с) H-лизининил (Cbz), [CHOHCO] -OMeTFA
По методике, описанной в Примере 1 (h), Вос- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe (500 мг) превращали в соединение, названное в заголовке (500 мг) и немедленно использовали в реакции сочетания.

TCX: R_f = 0,12, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(d) N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe
К холодному (0^oC) раствору N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-OH (546 мг) в N, N-диметилформамиде (10 мл) добавляли последовательно 1- гидроксибензотриазол (202 мг), дициклогексилкарбодиимид (308 мг) и H-лизинил(Cbz) [CHOHCO] -OMeTFA (516 мг), после чего pH смеси доводили до 8 триэтиламином. Реакционную смесь перемешивали 1 час при 0^oC и затем выдерживали ночь при комнатной температуре. Смесь охлаждали до -20^oC и фильтрацией удаляли дициклогексилмочевину. Фильтрат упаривали до сухого остатка. Остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно 1N соляной кислотой, водой, 5% гидрокарбонатом натрия и водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток хроматографировали на силикагеле со смесью гептан/этилацетат 1/1--->1/4 (по объему) в качестве элюента. Фракции, содержащие N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe, разливали тонким слоем и упаривали. Выход: 544 мг.

TCX: R_f = 0,39, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(е) N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OH
N-Ме-N-Boc-D-Cha-Рго-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe (544 мг) растворяли в смеси диоксан/вода 7/3 (по объему) (13 мл) и обрабатывали 2N раствором гидроокиси натрия (0,61 мл) в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли водой (30 мл), добавляли 2N раствор соляной кислоты до pH 2 и водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом, получая желаемый продукт. Выход: 560 мг.

ТСХ: R_f = 0,47, силикагель, дихлорметан/метанол 4/1 (по объему).

(f) N-Ме-N-Вос-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz)[COCO] -ОH
N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz)[CHOHCO] -OH (500 мг) растворяли в 2,3 мл 0,5 М раствора 1-гидрокси-1,2- бензйодоксол-3-(1H)-он 1-оксида в диметилсульфоксиде и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили раствором тиосульфата натрия (1,25 г) в 150 мл воды, охлаждали в ледяной бане, после чего pH раствора доводили до 2 2N соляной кислотой. Водный слой экстрагировали дихлорметаном и объединенные органические слои промывали насыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали под вакуумом, получая сырой N-Me-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz)[COCO] -ОH.

ТСХ: R_f = 0,71, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 88/31/18/7 (по объему).

(g) N-Me-D-Cha-Рго-лизининил (Cbz)[COCO] -ОH
Сырой N-Ме-N-Вос-D-Cba-Pro-лизининил(Cbz)[СОСО] -ОH обрабатывали при таких же условиях, как описано в Примере 2 (h), получая после очистки ЖХВР 175 мг чистого N-Me-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz)[COCO] -ОH в виде диастереомерной смеси.

R_t(ЖХ): 22,19 и 22,83 мин, 20% A, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 4
3,3-дифенилпропионил-Pro-лизининил [COCO] -OH
(а) 3,3-дифенилпропионил-пролил-ОH
3,3-дифенилпропионил-пролил-ОH (5,2 г) получали по той же методике, которая описана в Примере 2(е), используя 3,3-дифенилпропионовую кислоту (5,0 г) и H-Pro-OMeHCl (3,66 г).

ТСХ: R_f = 0,65, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(b) 3,3-дифенилпропионил-Pro-лизининил [СHОHСО] -OMe
По такой же методике, как описана в Примере 3, 3,3- дифенилпропионил-пролил-ОH (648 мг) вводили в реакцию сочетания с H-лизининил [CHOHCO] -OMeTFA (722 мг), получая после очистки защищенный трипептид 3,3-дифенилпропионил-Pro- лизининил [СHОHСО] -ОМе (1,13 г).

ТСХ: R_f = 0,40, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(с) 3,3-дифенилпропионил-Pro-лизининил [COCO] -OH
3,3-дифенилпропионил-Pro-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe (860 мг) омыляли по той же методике, какая описана в Примере 3 (е). Сырой продукт окисляли в дихлорметане (80 мл), используя 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бензйодоксол-З-(1H)-он (594 мг), как описано в Примере 2 (g). Последующее отщепление защитной группы в TFA и тиоанизоле (Пример 2h) дало 3,3- дифенилпропионил-Pro-лизинини [COCO] -OH (229 мг) в виде диастереомерной смеси.

R_t(ЖХ): 20,31 мин, 20% А, 60% В и 20% С к 20% А, 80% С за 30 мин.

ПРИМЕР 5
БензилSO₂-norLeu(цикло)-Gly-лизининил [COCO] -OH
norLeu(цикло)-Gly-означает структурный фрагмент формулы:

(a) H-Boc-L--амино--капролактам
К раствору 10 г в смеси диоксан/вода (2/1 по объему, 30 мл) при перемешивании добавляли 1N раствор гидроокиси натрия (7,8 мл) и после него ди-трет-бутилдикарбонат (18,8 г). Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в этилацетате, промывали водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали под вакуумом. Сырой продукт растирали с гексаном, фильтровали и сушили под вакуумом, получая N-Boc-L--амино--капролактам (16 г).

ТСХ: R_t = 0,85, силикагель, этилацетат/гептан 1/1 (по объему).

(b) Boc-norLeu (цикло)-Gly-OMe
N-Boc-L- -амино--капролактам (10 г) растворяли в дихлорметане (100 мл). При -20^oC медленно добавляли 1 М раствор бис (триметилсилил) амида в смеси тетрагидрофуран/циклогексан (1/1 по объему, 1 экв. ) и смесь перемешивали в течение 30 мин. После этого добавляли метилбромацетат (4 мл) и смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Для того чтобы заставить реакцию пройти до конца, вводили дополнительно бис (триметилсилил) амид в смеси тетрагидрофуран/циклогексан (1/1 по объему). Смесь разбавляли дихлорметаном и промывали 0,1N раствором соляной кислоты, водой, 5% водным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: гептан/этилацетат 6/4 по объему), получая N-Boc-norLeu(цикло)- Gly-OMe (12 г).

ТСХ: R_f = 0,55, силикагель, этилацетат/гептан 6/4 (по объему).

(с) БензилSO₂-norLeu (цикло)-G1y-OMe
N-Boc-погLeu(цикло)-Gly-OMe (5,4 г) растворяли в 50% смеси TFA - дихлорметан (1/1 по объему) (40 мл) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали под вакуумом. Сырой амин растворяли в дихлорметане (40 мл), охлаждали (0^oC) и добавляли бензилсульфонилхлорид (3,43 г). Добавляли триэтиламин, чтобы поддерживать pH на уровне 8 в ходе реакции. Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего смесь концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в этилацетате и промывали 5% раствором гидрокарбоната натрия, водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали под вакуумом, получая бензилSO₂- norLeu(цикло)-G1y-ОМе (6,1 г).

ТСХ: R_f = 0,88, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 (по объему).

(d) БензилSO₂-norLeu(цикло)-G1y-OH
Раствор бензил SO₂-norLeu (цикло)-G1y-OMe (6,1 г) в 100 мл смеси диоксан/вода 9/1 обрабатывали избытком 1N гидроокиси натрия, поддерживая pH 13, в течение 2 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили над сульфатом натрия. Фильтрация с последующим выпариванием дает желаемое соединение (6,3 г).

ТСХ: R_f = 0,73, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(е) БензилSO₂-norLeu(цикло)-G1y-лизининил [COCO] -OH
Указанное в заголовке соединение получали по такой же методике, какая описана в Примере 3, исходя из бензилSO₂- norLeu(цикло)-G1y-OH (385 мг) и H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] - OMeTFA (520 мг). Защищенный трипептид (625 мг) омыляли, окисляли и отщепляли защитную группу (см. Пример 4), получая после очистки ЖХВР чистый бензилSO₂-norLeu(цикло)-G1y- лизининил [COCO] -OH (68 мг) в виде диастереомерной смеси.

R_t(ЖХ): 25,9 мин, 20% А, 80% В к 20% А, 20% В и 80% С за 40 мин.

ПРИМЕР 6
ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OMe
(а) Boc-D-Cha-Pro-OPac(-OPac-фенилацильный эфир)
Boc-D-Cha-Pro-OPac получали таким же образом, как описано в Примере 2, используя Boc-D-Cha-OH и H-Pro-ОРас.

ТСХ: R_f = 0,5, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(b) ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-ОРас
Boc-D-Cha-Pro-OPac (3,8 г) растворяли в 50% TFA/дихлорметан (25 мл) и перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали под вакуумом. Сырой амин растворяли в дихлорметане (50 мл) и при -78^oC добавляли этансульфонилхлорид (0,8 мл). Для поддержания pH 8 во время реакции добавляли триэтиламин. Смесь перемешивали в течение 3 ч при 0^oC, после чего добавляли воду (25 мл). После дополнительного перемешивания в течение 30 минут при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в диэтиловом эфире и промывали 1N раствором соляной кислоты, водой, 5% раствором гидрокарбоната натрия и рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали под вакуумом. Растирание сырого продукта с метанолом дает этилSO₂-D-Cha-Pro-ОРас (3,0 г).

ТСХ: R_f = 0,6, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(с) ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-OH
К раствору этилSO₂-D-Cha-Pro-OPac (10 г) в тетрагидрофуране (250 мл) добавляли 1 М раствор фтористого тетрабутиламмония в тетрагидрофуране (84 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре и выливали в воду (1 л). Водный раствор экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали последовательно 1N раствором соляной кислоты и водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали кристаллизацией из смеси этилацетат/диизопропиловый эфир, получая этилSO₂-D-Cha-Pro-OH (6,0 г).

ТСХ: R_f = 0,2, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 163/20/6/11 (по объему).

(d) ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OMe
Сочетание этилSO₂-D-Cha-Pro-OH (515 мг) и H-лизининил (Cbz)[CHOHCO] -OMeTFA проводили как описано в Примере 3 (d), получая защищенный трипептид (550 мг). Окисление с последующим снятием защиты (см. Пример 2) дает после очистки ЖХВР желаемый продукт в виде смеси диастереомеров.

R_t(ЖХ): 38,2 и 38,5 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 7
ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -ОH
По аналогии с примером 6 получали этилSO₂-D-Cha-Pro- лизининил [COCO] -OMe (550 мг). Последующие омыление, окисление и снятие защиты по методикам, описанным в Примерах 3 и 2, дают после очистки ЖХВР 180 мг этилSO₂-D-Cha-Pro- лизининил [COCO] -OH (диастереомерная смесь).

R_t(ЖХ): 35,7 и 36,0 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С.

ПРИМЕР 8
1-Piq-Pro-лизининил [COCO] -OH
(a) 2-Cbz-(4aR, 8aR)-пергидроизохинолин-1(R, S)-карбоновая кислота (= N-(Cbz) -1-Piq-OH)
N-(Cbz)-1-Piq-OH синтезировали как описано в ЕР 0643073, Пример 1.

TCX: R_f = 0,85, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(b) N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH
Сочетание N-(Cbz)-1-Piq-OH (500 мг) и H-Pro-O(трет-Bu) (270 мг) по методикам, описанным в Примере 2, дало N-(Cbz)-1-Piq-Pro-O(TpeT-Bu) (634 мг).

Удаление трет-бутилового эфира проводили в смеси дихлорметана (1 мл), трифторуксусной кислоты (3 мл), анизола (0,15 мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом при низкой температуре и остаток растворяли в воде при pH 9,5. Водную фазу промывали диэтиловым эфиром, после чего водный слой подкисляли до pH 2,5 2 М раствором соляной кислоты. Водный слой экстрагировали этилацетатом и органическую фазу промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом, получая N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH (588 мг).

ТСХ: R_f = 0,54, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 60/3/1/2 (по объему).

(с) 1-Pig-Pro-лизининил [COCO] -OH
N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH (478 мг) вводили в реакцию сочетания с блоком лизининила в соответствии со способами, описанными в Примере 3. Очищенный защищенный трипептид (667 мг) омыляли, окисляли и снимали защиту (см. Пример 2), получая после очистки ЖХВР единственный изомер 1-Piq-Pro- лизининил [COCO] -OH (33 мг).

R_t (ЖХ): 20,08 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С.

ПРИМЕР 9
HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OH
Следуя методикам, описанным в Примере 3, 685 мг М-(третбутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-OH (см. Пример 1) сочетали с H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMeTFA (см. Пример 3с), после чего защищенный трипептид (658 мг) омыляли, окисляли, снимали защиту и очищали, получая 158 мг HOOC-CH₂-D-Cha-Pro- лизининил [COCO] -OH в виде смеси диастереомеров.

R_t (ЖX): 22,3 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С.

ПРИМЕР 10
HOOC-СH₂-D-Cha-N-циклопентил-G1y-лизининил [COCO] -OH
(а) N-циклопентил-Gly-ОМе
H-Gly-OMeHCl (46,4 г) растворяли в 400 мл метанола, добавляли циклопентанон (34 г) и цианборгидрид натрия (14 г) и реакции проводили в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили 6 М соляной кислотой до pH 2 и перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель удаляли выпариванием под пониженным давлением, остаток растворяли в воде и промывали диэтиловым эфиром. Величину pH доводили до pH более 10 добавлением 6 М раствора NaOH, продукт экстрагировали дихлорметаном, промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Соединение кристаллизовали из этилацетата в виде HCl - соли. Выход: 43,5 г.

ТСХ: R_f = 0,71, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 88/31/18/7 (по объему).

(b) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N- циклопентил-Gly-OH
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha- N-циклопентил-Gly-OH получали по методике, описанной в Примере 1 для дипептидного блока, используя N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-OH и N-циклопентил-Gly-OMe.

ТСХ: R_f = 0,30, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 (по объему).

(с) HOOC-СH₂-D-Cha-N-циклопентил-Gly-лизининил [COCO] -ОH
В соответствии со способами, описанными в Примере 3, N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N-циклопентил-G1y- OH (547 мг) вводили в реакцию сочетания с H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMeTFA (см. Пример 3с), после чего защищенный трипептид (660 мг) омыляли, окисляли, снимали защиту и очищали, получая 212 мг HOOC-CH₂-D-Cha-N-циклопентил- G1y-лизининил [COCO] -OH в виде смеси диастереомеров.

R_t (ЖХ): 28,5 и 29,1 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С.

ПРИМЕР 11
HOOC-CH₂-D-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH
N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH получали по методикам, описанным в Примере 19, используя N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Phe-OH и H-Pro-OBzlHCl.

ТСХ: R_f = 0,63, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 664/31/18/7 (по объему).

HOOC-CH₂-D-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH
В соответствии со способами, описанными в Примере 3, 667 мг N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH вводили в реакцию сочетания с H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMeTFA, после чего полученный трипептид (814 мг) омыляли, окисляли, снимали защиту и очищали ЖХВР, получая HOOC-CH₂-D-Phe-Pro- лизининил [COCO] -OH (284 мг) в виде смеси диастереомеров.

R_t (ЖХ): 16,1 и 17,0 мин, 20% A, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С.

ПРИМЕР 12
HOOC-CH₂-D-р-Cl-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH
(a) N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-p-Cl-Phe-OH
В соответствии с аналогичными методиками, описанными в Примере 1, H-D-p-Cl-Phe-OHHCl (10 г) превращали в H-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-p-Cl-Phe-OH. Выход: 16,7 г.

ТСХ: R_f = 0,27, силикагель, этилацетат/метанол 9/1 (по объему).

(b) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-OSu (Su = сукцинимид)
Раствор N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p- Cl-Phe-OH (14,67 г) в 250 мл ацетонитрила обрабатывали N- гидроксисукцинимидом (4,11 г) и 1-(3-диметиламинопропил)-3- этилкарбодиимид гидрохлоридом (6,86 г) в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали до сухого остатка и остаток растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали, получая 19,11 г активного эфира, который непосредственно использовали на следующей стадии.

(с) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-OH
H-Pro-OHHCl (10,79 г) растворяли в 100 мл N, N- диметилформамида и 100 мл воды. Величину pH реакционной смеси доводили до 8 1N раствором гидроокиси натрия, после чего по каплям добавляли N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-OSu (19,11 г), растворенный в 120 мл N, N- диметилформамида. Реакционную смесь с pH 8 оставляли при перемешивании на ночь при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали и pH доводили до 2 1N соляной кислотой. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом натрия и упаривали под вакуумом.

Очистка на силикагеле при использовании градиента этилацетат/метанол 9/1 ---> 1/1 дает 7,04 г желаемого дипептида.

ТСХ: R_f = 0,24, силикагель, этилацетат/метанол 8/2 (по объему).

(d) HOOC-CH₂-D-p-Cl-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH
В соответствии со способами, описанными в Примере 3, N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-OH (500 мг) вводили в реакцию сочетания с H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] - OMeTFA, после чего полученный трипептид (572 мг) омыляли, окисляли, снимали защиту и очищали ЖХВР, получая HOOC-CH₂-D- p-Cl-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH (129 мг) в виде смеси диастереомеров.

R_t (ЖХ): 22,3 и 23,1 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С.

ПРИМЕР 13
HOOC-GH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -NH₂
N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH получали так, как описано в Примере 1. Вос-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OBu получали так, как описано в Примере 3 (b).

(а) Вос-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OH
К раствору Boc-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OBu (320 мг) в смеси диоксан/вода 9/1 по объему (11,2 мл) добавляли 1 мл 1N раствора гидроокиси натрия. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Смесь доводили до pH 7 добавлением 1 М соляной кислоты и большую часть диоксана удаляли выпариванием. Смесь выливали в холодную воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали под вакуумом, получая 308 мг Вос-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH.

ТСХ: R_f = 0,46, силикагель, дихлорметан/метанол 8/2 (по объему).

(b) Вос-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -NH₂
К раствору Вос-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OH (308 мг) в N, N-диметилформамиде (16,6 мл) добавляли 1- гидроксибензотриазолгидрат (117 мг), N-метилморфолин (132 мкл), хлористый аммоний (107 мг) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлорид (186 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали 1N раствором соляной кислоты, водой, 5% раствором гидрокарбоната натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: градиент смеси дихлорметан/метанол от 98/2 до 96/4 по объему), получая Вос- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -NH₂ (117 мг).

ТСХ: R_f = 0,14, силикагель, дихлорметан/метанол 97/3 (по объему).

(с) Вос-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -NH₂TFA
H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -NH₂TFA получали так, как описано в Примере 1 (h).

(d) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -NH₂
К раствору N-(третбутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-OH (119,6 мг) в N, N-диметилформамиде (2 мл) при 0^oC добавляли 1-гидроксибензотриазолгидрат (50 мл) и дициклогексилкарбодиимид (60 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при 0^oC. Раствор H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -NH₂TFA (100 мг) в N, N-диметилформамиде (1 мл), pH которого доводили до 8 N, N- диизопропилэтиламином, добавляли к холодному раствору. Спустя 1 ч смеси давали нагреться до комнатной температуры и оставляли при перемешивании на ночь. Реакционную смесь охлаждали до -20^oC, фильтровали и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в этилацетате и промывали 5% раствором гидрокарбоната натрия, водой, 2% водным раствором лимонной кислоты и рассолом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали.

Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: градиент дихлорметан/метанол от 97/3 до 95/5 по объему), получая N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -NH₂ (93,5 мг).

ТСХ: R_f = 0,34, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(е) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha- Pro-лизининил (Cbz) [COCO] -NH₂
N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Рго-лизининил (Cbz) [COCO] -NH₂ получали так, как описано в Примере 2(g). Смесь промывали раствором тиосульфата натрия, 5% раствором гидрокарбоната натрия и водой.

ТСХ: R_f = 0,38, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(f) HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -NH₂
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -NH₂ получали как описано в Примере 2 (h). Водный слой напрямую подавали на колонку препаративной ЖХВД DeltaPak, используя градиентную систему элюирования от 20% А, 70% В, 10% С до 20% А, 30% В, 50% С за 40 мин при скорости потока 50 мл/мин (А: 0,5 М фосфатный буфер pH 2,1, В: вода, С: ацетонитрил/вода, 3/2 по объему). Из 87 мг N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D- Cha-Pro-лизининил(Cbz) [СОСО] -NH₂ получали 35 мг HOOC-CH₂-D-Cha-Рго-лизининил [COCO] -NH₂.

Масса: Сl⁺ 478,4 [М-H] ⁺; Сl^- 476,4 [М-H] ^-.

R_t (ЖХ): 21,10 и 21,41 мин (смесь диастереомеров); 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В, 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 14
HOOC-CH₂-D-Cha-Рго-лизининил - [COCO] -OEt
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH получали так, как описано в Примере 1. Вос- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMe получали так, как описано в Примере 3 (b).

(а) H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OEtHCl
Вос-лизининил(Cbz) [CHOHCO)-OMe (2,14 г) растворяли в 3 М растворе хлористого водорода в этаноле (100 мл) при -20^oC. После этого реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч при комнатной температуре и концентрировали под вакуумом, получая H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OEtHCl (2,36 г).

ТСХ: R_f = 0,17 и R_f = 0,25 (смесь диастереомеров), силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(b) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [COHCO] -OEt
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил(Cbz) [COHCO] -OEt получали из H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OEtHCl (2,40 г) и N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH (2,38 г), как описано в Примере 13(d), но вместо N, N-диизопропилэтиламина использовали триэтиламин. Сырой продукт очищали на окиси кремния (элюент: градиент от гептан/этилацетат 1/1 по объему до дихлорметан/метанол 97/3 и до 95/5 по объему), получая N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [COHCO] -OEt (1,24 г).

ТСХ: R_f = 0,51, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 (по объему).

(с) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [COCO] -OEt
N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N- Boc-D-Cha-Pro-лизинил(Cbz) [COCO] -OEt получали так, как описано в Примере 13 (е).

ТСХ: R_f = 0,51, силикагель, дихлорметан/метанол 97/3 (по объему).

(d) HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OEt
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -ОЕt получали так, как описано в Примере 13 (f). Водный слой напрямую подавали на колонку препаративной ЖХВД DeltaPak, используя градиентную систему элюирования от 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 54% В, 26% С за 45 мин при скорости потока 80 мл/мин (А: 0,5 М фосфатный буфер pH 2,1, В: вода, С: ацетонитрил/вода, 3/2 по объему). Из 293 мг N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [COCO] -OEt получали 62 мг HOOC-CH₂-D- Cha-Pro-лизининил [COCO] -OEt.

Масса: ESI⁺ 507,9 [MH] ⁺.

R_t (ЖХ): 26,45 и 27,30 мин (смесь диастереомеров); 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В, 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 15
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] - (1-азетидин)
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH получали так, как описано в Примере 1. N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -(1-азетидин) получали так, как описано в Примере 13, исходя из Boc- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OBu. Снятие защиты (см. Пример 13(f)) 427 мг N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro- лизининил [COCO] -(1-азетидин) дает после очистки ЖХВР 105 мг продукта.

Условия ЖХВД: колонка DeltaPak, градиентная система элюирования от 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 45% В, 35% С за 45 мин при скорости потока 80 мл/мин (А: 0,5 М фосфатный буфер pH 2,1, В: вода, С: ацетонитрил/вода, 3/2 по объему).

Масса: FAB⁺: 518,3 [М+H] ⁺, FAB^-: 516,2 [М+H] ^-.

R_t (ЖХ): 26,24 и 26,70 мин (смесь диастереомеров); 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В, 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 16
HOOC-СH₂-D-Cha-N-циклопентил-G1y-лизининил [COCO] -(1-азетидин)
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N- циклопентилглицин получали согласно методике в Примере 1.

N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N-циклопентил-Gly- лизинини [COCO] -(1-азетидин) получали таким же образом, как описано в Примере 15. Снятие защиты с 401 мг N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-N-циклопентил- Gly-лизининил [COCO] -(1-азетидин) дает после очистки ЖХВР 107 мг продукта.

Масса: FAB⁺: 546,2 [М+H] ⁺, FAB^-: 544,0 [М+H] ^-.

R_t (ЖХ): 35,85 мин: 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В, 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 17
HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -NHCH₂Ph
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH получали так, как описано в Примере 1. H-лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMeTFA получали так, как описано в Примере 3 (с).

(а) N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMe получали таким же образом, как описано в Примере 13 (d) из H-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMeTFA (1,09 г) и N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH (1,18 г). Сырой продукт очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: градиент гептан/этилацетат от 4/6 до 3/7 по объему), получая N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OMe (0,99 г).

ТСХ: R_f = 0,5, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 по объему.

(b) N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH
К раствору N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -OMe (0,98 г) в смеси диоксан/вода 9/1 по объему (20 мл) добавляли 1 мл 1N раствора гидроокиси натрия. Смесь выливали в холодную воду, доводили до pH 2 добавлением 1N раствора соляной кислоты и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали под вакуумом, получая 1,05 г N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH.

ТСХ: R_f = 0,4, силикагель, этилацетат/метанол 7/3 по объему.

(с) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил (Cbz) [CHOHCO] -NHCH₂Ph
К раствору N- (трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил(Cbz) [CHOHCO] - OH (502 мг) в N, N-диметил-формамиде (16,6 мл) добавляли 1- гидроксибензотриазолгидрат (150 мг), N-метилморфолин (150 мкл), бензиламин (155 мкл) и 1-(3-диметиламинопропил)-3- этилкарбодиимид гидрохлорид (190 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 17 ч при комнатной температуре. Смесь выливали в холодный 1N раствор соляной кислоты и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, 5% раствором гидрокарбоната натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали под вакуумом, получая N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- лизининил(Cbz) [CHOHCO] -NHCH₂Ph (512,4 мг).

TCX: R_f = 0,5 силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 по объему.

(d) N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [COCO] -NHCH₂Ph
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [COCO] -NHCH₂Ph получали, как описано в Примере 13(е).

TCX: R_f = 0,32 силикагель, дихлорметан/метанол 97/3 по объему.

(е) HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [COCO] - NHCH₂Ph
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [COCO] -NHCH₂Ph получали так, как описано в Примере 13(f).

R_t (ЖХ): 39,05 мин: 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В, 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 18
HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -N(CH₃)₂
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -N(CH₃)₂ получали подобно тому, как описано в Примере 17, исходя из N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH.

R_t (ЖХ): 32,84 мин: 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В, 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 19
HOOC-CH₂-D-Dpa-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) Boc-D-Dpa- Pro-OBzl
К холодному (0^oC) раствору Boc-D-Dpa-OH (5,2 r) в N, N- диметилформамиде (50 мл) добавляли последовательно 1- гидроксибензотриазол (3,1 г), дициклогексилкарбодиимид (3,3 г), H- Pro-OBzlHCl (4,07 г) и триэтиламин (2,46 мл). Смесь перемешивали при 0^oC в течение 1 часа и затем выдерживали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь охлаждали до -20^oC и дициклогексилмочевину удаляли фильтрацией. Фильтрат упаривали до сухого остатка. Остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно 5% гидрокарбонатом натрия, водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: гептан/этилацетат 4/6 по объему), получая Boc-D-Dpa-Pro-OBzl (8,7 г).

ТСХ: R_f = 0,95, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 520/31/18/7 (по объему).

(b) Boc-D-Dpa-Pro-OH
10% палладий на древесном угле (1 г) добавляли к раствору Boc-D- Dpa-Pro-OBzl (7,0 г) в метаноле (140 мл). Смесь гидрировали под атмосферным давлением при комнатной температуре в течение 1 часа. Палладиевый катализатор удаляли фильтрацией и растворитель удаляли испарением под пониженным давлением, получая Boc-D-Dpa-Pro-OH (5,5 г).

ТСХ: R_f = 0,59, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 520/31/18/7 (по объему).

(с) Boc-D-Dpa-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между Boc-D-Dpa-Pro- OH и H-лизининил(Cbz)-(2-тиaзoлил)TFA (см. Пример 1) проводили согласно методикам, описанным в Примере 22, получая N-Вос-D-Dpa- Pro-лизининил-(2-тиазолил) (560 мг).

ТСХ: R_f = 0,1, силикагель, толуол/этилацетат 3/7 по объему.

(d) H-D-Dpa-Pro-лизининил-(2-тиазолил)TFA
N-Вос-D-Dpa- Pro-лизининил-(2-тиазолил) (560 мг) растворяли в сухом дихлорметане (2,5 мл) и трифторуксусной кислоте (2,5 мл) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Раствор концентрировали под вакуумом и выпаривали с толуолом, получая H-D- Dpa-Pro-Lys(Cbz)-(2- тиазолил)TFA (670 мг).

ТСХ: R_f = 0,1, силикагель, толуол/этилацетат 3/7 по объему.

(е) N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-D-Dpa-Pro-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил
H-D-Dpa-Prc-Lys(Cbz)-(2-тиaзoлил)TFA (570 мг) растворяли в ацетонитриле (10 мл) и добавляли трет-бутилбромацетат (141 мкл). Раствор доводили до pH 8 N, N-диизопропилэтиламином и перемешивали 2 суток при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, растворяли в этилацетате, промывали водой и рассолом, сушили над сульфатом магния и вновь концентрировали. Остаток хроматографировали на окиси кремния, используя этилацетат/толуол 1/4 в качестве элюента, получая N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-D-Dpa-Pro-лизининил(Cbz)-(2- тиазолил) (499 мг).

TCX: R_f = 0,47, силикагель, дихлорметан/метанол 96/4 по объему.

(f) HOOC-CH₂-D-Dpa-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
Снятие защиты и очистку N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-D-Dpa-Pro- лизининил (Cbz)-(2-тиазолила) проводили согласно методикам, описанным в Примере 22. Выход смеси двух диастереомеров: 177 мг.

R_t (ЖХ): 32,57 и 33,22 мин: 20% А и 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 20
HOOC-СH₂-D-Cha-N-циклопентил-G1y-лизининил [COCO] -NH₂
N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N- циклопентилглицин получали согласно методике синтеза дипептида в Примере 1. N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha- N-циклопентил-Gly-лизининил [COCO] -NH₂ получали подобно тому, как описано в Примере 13, исходя из Boc-лизининил (Cbz) [CHOHCO] - OMe.

R_t (ЖХ): 34,09 мин: 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 21
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -NHCH₃
HOOC-СH₂-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -NHCH₃ получали подобно тому, как описано в Примере 17, исходя из N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Рго-лизининил (Cbz) [CHOHCO] -OH.

R_t (ЖХ): 29,61 мин: 20% А, 80% В, 0% С до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 22
N-Me-D-Nle-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) H-D-Nle-OMeHCl
К 270 мл метанола, охлажденного до - 15^oC, добавляли 18,2 г тионилхлорида. Затем температуре давали возрасти до -10^oC и выдерживали ее постоянной в течение 20 мин, после чего добавляли 10 г H-D-Nle-OH. Температуру медленно поднимали до кипения с обратным холодильником и поддерживали постоянной в течение 5 часов. Продукт кристаллизовали из метанола и диэтилового эфира при 4^oC, получая выход 12,9 г.

ТСХ: R_f = 0,61, силикагель, н-бутанол/уксусная кислота/вода 10/1/3 по объему.

(b) Boc-D-Nle-OMe
H-D-Nle-OMeHCl (12,9 г) растворяли в 200 мл сухого метанола с последующим добавлением ди-трет-бутилдикарбоната (15,5 г) и триэтиламина (19,8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре, после чего смесь концентрировали под вакуумом. Затем остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Продукт хроматографировали на силикагеле, используя гептан/этилацетат 3/1 по объему. Выход: 16,9 г.

ТСХ: R_f = 0,55, силикагель, гептан/этилацетат 3/1 по объему.

(с) N-Me-Boc-D-Nle-OMe
Boc-D-Nle-OMe (16,9 г) растворяли в 200 мл сухого N, N- диметилформамида под азотом. Далее добавляли йодистый метил (24,9 мл), охлаждали до 0^oC, добавляли гидрид натрия (3,31 г, 60% дисперсия в масле) и смеси давали реагировать в течение 16 час при комнатной температуре. Смесь концентрировали под вакуумом, растворяли в этилацетате, промывали 0,1N соляной кислотой, водой, бикарбонатом натрия (5%) и водой, сушили и вновь концентрировали. Получали 18,8 г алкилированного продукта.

ТСХ: R_f = 0,56, силикагель, гептан/этилацетат 3/1 по объему.

(d) N-Me-Boc-D-Nle-OH
N-Me-Boc-D-Nle-OMe (18 г) растворяли в 400 мл смеси диоксан/вода 9/1 (по объему) и pH раствора доводили до 12 1N NaOH. Реакцию проводили в течение 2 ч, поддерживая pH постоянным на уровне 12. Процедура включала подкисление соляной кислотой, охлаждение на льду, добавление добавочной воды (400 мл) и экстракцию дихлорметаном. Органический слой промывали рассолом, сушили, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Эта процедура давала 18,9 г продукта.

ТСХ: R_f = 0,26, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 по объему.

(е) N-Me-Boc-D-Nle-Pro-OH
Вначале получали N-сукцинимидный эфир исходя из N-Me-Boc-D-Nle-OH. 18 г этого производного растворяли в ацетонитриле (250 мл) и добавляли 1-этил-3-[3- (диметиламино)пропил] карбодиимид гидрохлорид (EDCI) (14,5 г) и N-гидрокси-сукцинимид (HONSu) (8,7 г). Реакцию вели 16 ч при комнатной температуре, после чего растворитель удаляли, остаток растворяли в этилацетате, промывали водой и сушили. Таким образом получали 24,3 г сырого ONSu-эфира. На следующей стадии пролинHCl (20,9 г) растворяли в 300 мл N, N- диметилформамида и pH доводили до 8 2N раствором NaOH. К этому раствору при pH 8 добавляли по каплям раствор ONSu-эфира (24,3 г в 300 мл N, N-диметилформамида). Реакция завершалась через 5 ч, после чего основную часть растворителя удаляли путем испарения под пониженным давлением. Добавляли дополнительно воду (300 мл) и смесь подкисляли. Продукт экстрагировали этилацетатом и промывали водой. После сушки, фильтрации и концентрирования получали продукт в виде желтого масла с выходом 22,2 г. Сырой продукт хроматографировали на двуокиси кремния, используя этилацетат/метанол 8/2 об. /об. в качестве элюента. Выход: 13,2 г.

ТСХ: R_f = 0,65, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 163/20/6/11 (по объему).

(f) N-Ме-Вос-D-Nle-Pro-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил)
N-Me-Boc-D-Nle-Pro-OH (376 мг) растворяли в сухом N, N-диметилформамиде (3 мл). После добавления N, N-диизопропилэтиламина (0,19 мл) реакционную смесь помещали под азот и охлаждали до -20^oC. После этого добавляли изобутилхлороформаат (136 мкл) и смесь выдерживали при перемешивании в течение 15 мин при -20^oC. H-лизининил (Cbz)- (2-тиазолил)TFA (см. Пример 1) растворяли в сухом N, N- диметилформамиде (3 мл) и добавляли по каплям к холодному раствору смешанного ангидрида, поддерживая pH на уровне 8,5 добавлением N, N-диизопропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при -20^oC и 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь выпаривали до сухого остатка. Остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно 5% водным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на двуокиси кремния (элюент: этилацетат/гептан 1/1 по объему), получая Boc-N-Me-D-Nle-Pro-лизининил(Cbz)-(2- тиазолил) (408 мг).

ТСХ: R_f = 0,21, силикагель, этилацетат/гептан 1/1 по объему.

(g) N-Me-D-Nle-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
Boc-N-Me-D-Nle-Pro-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил) (408 мг) получали по методике, описанной в Примере 1 (р). Сырой продукт подвергали препаративной ЖХВД в колонке Deltapack С18 RP, используя градиентную систему элюирования из 20% А/80% В до 20% А/30% В/50% С за 40 мин при скорости потока 80 мл/мин. Выход двух диастереомеров:
105 мг; R_t (ЖХ): 19,17 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин;
110 мг; R_t (ЖХ): 21,47 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 23
N-Me-D-Phe-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а). N-Me-Boc-D-Phe-Pro-OH
Синтез N-Me-Boc-D-Phe-Pro-OH исходя из H-D-Phe-OH проводили по методикам, описанным в Примере 2.

(b) N-Me-D-Phe-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между N-Me-Boc-D-Phe- Pro-OH и H-лизининил(Cbz)-(2-тиaзoлил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22. Выход двух диастереомеров:
89 мг; R_t (ЖХ): 8,45 мин, 20% А, 60% В и 20% С до 100% С за 40 мин;
63 мг; R_t (ЖХ): 10,98 мин, 20% А, 60% В и 20% С до 100% С за 40 мин.

ПРИМЕР 24
N-Me-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) N-Me-Boc-D-Cha-Pro-OH
Синтез N-Me-Boc-D-Cha-Pro-OH исходя из H-D-Cha-OH проводили по методикам, описанным в Примере 3.

(b) N-Me-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между N-Me-Boc-D-Cha-Pro-OH и H-лизининил(Cbz)- (2-тиазолил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22. Выход двух диастереомеров:
140 мг; R_t (ЖХ): 12,93 мин, 20% А, 60% В и 20% С до 100% С за 40 мин;
139 мг; R_t (ЖХ): 14,31 мин, 20% А, 60% В и 20% С до 100% С за 40 мин.

ПРИМЕР 25
ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-ОH
Синтез ЭтилSO₂-D-Cha-Pro-ОH исходя из Boc-D-Cha-OH и H-Pro- OPac проводили по методикам, описанным в Примере 6.

(b) ЭтилSO₂- D-Cha-Pro-лизининил- (2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между ЭтилSO₂-D- Cha-Pro-OH и H-лизининил(Cbz)-(2-тиaзoлил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22. Выход диастереомеров: 127 мг.

R_t (ЖХ): 44,52 и 45,58 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 26
2-Пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) Boc-Asp(OMe)-OH
H-Asp(OMe)-OH (10,0 г) растворяли в смеси диоксан/вода 2/1 (150 мл) и охлаждали на льду. Бикарбонат натрия (4,6 г) и ди-трет-бутилдикарбонат (13,1 г) добавляли частями. Смесь перемешивали в течение 16 ч, поддерживая pH 8,5 бикарбонатом натрия. Добавляли воду (400 мл) и смесь тщательно промывали гептаном, охлаждали на льду, подкисляли 1N соляной кислотой до pH 2,5 и экстрагировали этилацетатом (300 мл). Органический слой промывали водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали под вакуумом, получая Boc-Asp(OMe)-OH (10,25 г).

TCX: R_f = 0,58, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 163/20/6/11 (по объему).

(b) Boc-Asp (OMe)-Pro-OBzl
Boc-Asp(OMe)-Pro-OBzl синтезировали как описано в WO 95/35312, Пример 1, заменив N-метилморфолин на N-этилморфолин.

TCX; R_f = 0,40, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 по объему.

(с) H-Asp (OMe) -Pro-OBzlHCl
Boc-Asp (OMe)-Pro-OBzl (7,25 г) растворяли в сухом этилацетате (25 мл) и охлаждали на льду. Добавляли этилацетат, насыщенный хлористым водородом (45 мл) и смесь перемешивали при 0^oC в течение 5 ч. Избыток хлористого водорода удаляли продувкой азотом, и полученный раствор концентрировали под вакуумом, получая H-Asp (OMe) -Pro-OBzl- HCl в виде белого твердого вещества (6,21 г).

TCX: R_f = 0,17, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 по объему.

(d) 2-пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-OBzl
Раствор H-Asp (OMe)-Pro-OBzl-HCl (6,21 г), сухой дихлорметан (10 мл) и N, N-диизопропилэтиламин (200 мкл) добавляли при 0^oC к раствору ангидрида 2-пропилпентаноевой кислоты, который получали растворением 2-пропилпентаноевой кислоты (1,63 мл) в сухом дихлорметане (15 мл), охлаждением на льду, добавлением 1,3- дициклогексилкарбодиимида (1,11 г) и перемешиванием этого раствора в течение 5 мин. Смесь перемешивали при комнатной температуре, поддерживая pH 8,5 добавлением N, N- диизопропилэтиламина, в течение 16 ч, после чего добавляли 0,5 эквивалента ангидрида 2-пропилпентаноевой кислоты и раствор перемешивали еще 4 ч. Затем 1,3-дициклогексилмочевину удаляли фильтрацией. Фильтрат концентрировали под вакуумом и остаток растворяли в этилацетате. Раствор промывали последовательно 1N соляной кислотой, насыщенным гидрокарбонатом натрия и рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на силикагеле кремния, используя толуол/этилацетат 8/2 (по объему) в качестве элюента, получая 2- пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-OBzl (6,54 г).

ТСХ: R_f = 0,65, силикагель, дихлорметан/метанол 95/5 по объему.

(е) 2-пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-OH
10% палладий на древесном угле (750 мг) добавляли к раствору 2-пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-OBzl (705 мг) в метаноле (10 мл). Смесь гидрировали под атмосферным давлением при комнатной температуре в течение 2 ч. Палладиевый катализатор удаляли фильтрацией и растворитель удаляли выпариванием под пониженным давлением, получая 2-пропилпентаноил- Asp(OMe)-Pro-ОH (580 мг).

ТСХ: R_f = 0,48, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 163/20/6/11 (по объему).

(f) 2-пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-лизининил-(2- тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между 2- пропилпентаноил-Asp (OMe)-Pro-ОH и H-лизининил(Cbz)-(2- тиазолил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22.

Выход смеси двух диастереомеров: 186 мг.

R_t (ЖХ): 23,16 и 24,30 мин, 20% А, 60% В и 20% С до 100% С за 40 мин.

ПРИМЕР 27
l-Piq-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) 1-Piq-Pro-OH
Синтез 1-Piq-Pro-OH вели в соответствии с методикой, описанной в Примере 8.

(b) 1-Piq-Pro-лизининил- (2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между 1-Piq-Pro-OH и H-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22. Выход двух диастереомеров:
92 мг; R_t (ЖX): 23,75 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин;
97 мг; R_t (ЖХ): 25,72 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 28
HOOC-СH₂-D-Cha-H-циклопентил-G1y-лизининил-(2-тиазолил)
(а) N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-H-Вос-D-Cha-N-циклопентил-Gly-OH
Синтез N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-N- циклопентил-Gly-OH проводили исходя от H-D-Cha-OHHCl в соответствии с методиками, описанными в Примере 10.

(b) HOOC-СH₂- D-Cha-N-циклопентил-Gly-лизининил-(2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N- Вос-D-Cha-N-циклопентил-Gly-ОH и H-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22.

Выход смеси двух диастереомеров: 107 мг.

R_t (ЖХ): 20,39 и 20,82 мин, 20% А, 60% В и 20% С до 100% С за 40 мин.

ПРИМЕР 29
HOOC-CH₂-D-Phe-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH
Синтез N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH проводили исходя от H- D-Phe-OH-HCl в соответствии с методиками, описанными в Примере 11.

(b) HOOC-СH₂-D-Phe-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc- D-Phe-Pro-OH и H-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22.

Выход двух диастереомеров:
143 мг; R_t (ЖХ): 24,98 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин;
149 мг; R_t (ЖX): 26,91 мин, 20% А, 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 30
HOOC-CH₂-D-p-Cl-Phe-Pro-лизининил-(2-тиазолил)
(а) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-OH
Синтез N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-OH проводили исходя от H-D-p-Cl-Phe-OHHCl в соответствии с методиками, описанными в Примере 12.

(b) HOOC-CH₂-D-р-Cl-Phe-Pro- лизининил-(2-тиазолил)
Реакцию сочетания в смешанный ангидрид между N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-OH и H-лизинил(Cbz)-(2-тиазолил)TFA (см. Пример 1), снятие защиты и очистку проводили в соответствии с методиками, описанными в Примере 22.

Выход смеси двух диастереомеров: 187 мг.

R_t (ЖХ): 28,86 и 30,63 мин, 20% А и 80% В до 20% А, 20% В и 60% С за 40 мин.

ПРИМЕР 31
Кроме того, при использовании способа по настоящему изобретению были получены следующие соединения:
-HOOC-СH₂-D-Cha-Рес-лизининил [COCO] -OH;
-HOOC-СH₂-Cha-Рес-лизининил-(2-тиазолил);
-HOOC-CH₂-D-Cha-(N-циклогексил)-Gly-лизининил [COCO] -OH;
-HOOC-CH₂-D-Cha-(N-циклогексил)-Gly-лизининил- (2- тиазолил);
-HOOC-CH₂-D-Cha-(N-циклопропил)-Gly-лизининил [COCO] -OH;
-HOOC-CH₂-D-Cha-(N-циклопропил)-Gly-лизининил-(2- тиазолил),
-N-Me-D-Phe-(N-циклопентил)-Gly-лизининил [COCO] - OH;
-N-Me-D-Phe-(N-циклопентил)-Gly-лизининил-(2-тиазолил);
-2-пропилпентаноил-Asp(OMe)-Pro-лизининил [COCO] -OH;
-2-пропилпентаноил-Asp-Pro-лизининил [COCO] -OH;
-2-пропилпентаноил-Asp-Pro-лизининил-(2-тиазолил),
-2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-Pro-лизининил [COCO] - OH;
-2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-Pro-лизининил-(2- тиазолил);
-1-Piq-(N-циклопентил)-Gly-лизининил [COCO] -OH;
-1-Piq-(N-циклопентил)-Gly-лизининил-(2-тиазолил);
-дифенилпропионил-Pro-лизининил-(2-тиазолил);
-N-Me-D-Nle-Pro-лизининил [COCO] -OH;
-ЭтилSO₂-D-Phe-Pro-лизининил [COCO] -OH;
-ЭтилSO₂-D-Phe-Pro-лизининил-(2-тиазолил);
-ЭтилSO₂-N(Me)-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OH;
-ЭтилSO₂-N(Me)-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил);
-ЭтилSO₂-N(Me)-D-Cha-Pro-Лизининил-(2-оксазолил);
-HOOC-CH₂-N(Me)-D-Cha-Pro-лизининил [COCO] -OH;
-HOOC-CH₂-N(Me)-D-Cha-Pro-Лизининил-(2-тиазолил),
-HOOC-CH₂-N(Me)-D-Cha-Pro-лизининил-(2-оксазолил);
ПРИМЕР 32
Антитромбиновый тест
Тромбин (Фактор IIa) представляет фактор в каскаде коагуляции. Антитромбиновую активность соединений по настоящему изобретению определяли путем спектроскопического измерения скорости гидролиза хромогенного субстрата S-2238, на который влияет тромбин. Этот тест на антитромбиновую активность в буферной системе использовали для определения значения IC₅₀ для испытуемых соединений.

Среда анализа: Буфер Трометамин-NaCl-полиэтиленгликоль 6000 (TNP). Стандартное вещество: 12581 (Kabi) Носитель: ТМР- буфер. Солюбилизации могут способствовать диметилсульфоксид, метанол, этанол, ацетонитрил или трет-бутиловый спирт, которые не вызывают обратных эффектов в концентрациях до 2,5% на конечную реакционную смесь.

Методика
Реагенты^*:
1. Трометамин-NaCl (TN) буфер. Состав буфера: Трометамин (Tris) 6,057 г (50 ммоль), NaCI 5,844 г (100 ммоль), вода до 1 л. pH раствора доводят до 7,4 при 37^oC добавлением HCl (10 ммоль/л).

2. TNP буфер: Полиэтиленгликоль 6000 растворяли в TN-буфере до концентрации 3 г/л.

3. Раствор S-2238: Одну ампулу S-2238 (25 мг, Kabi Diagnostica, Sweden) растворяли в 20 мл TN- буфера до концентрации 1,25 мг/мл (2 ммоль/л).

4. Раствор тромбина: Тромбин человека (16000 nKat на ампулу; Centraal Laboratorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam, The Netherlands) растворяли в TNP-буфере, чтобы получить исходный раствор 835 nKat/wi. Непосредственно перед использованием этот раствор разбавляли TNP-буфером до концентрации 3,34 nKat/мл.

^* - Все используемые ингредиенты имели квалификацию "для анализа".

Для приготовления водных растворов использовали сверхчистую воду (качества Milli-Q).

Приготовление растворов испытуемого и стандартного соединений
Испытуемое и стандартное соединения растворяли в воде Milli-Q до концентраций исходных растворов 10^-2 моль/л. Каждую концентрацию дробно разводили носителем до концентраций 10^-3, 10^-4 и 10^-5 моль/л. Разведения, включая исходное разведение, использовали при анализе (конечные концентрации в реакционной смеси: 310^-3; 10^-3; 310^-4; 10^-4; 310^-5; 10^-5; 310^-6 и 10^-6 моль/л соответственно).

Процедура
При комнатной температуре 0,075 мл и 0,025 мл растворов испытуемого соединения или стандартного соединения или носителя поочередно вводили пипеткой в ячейки микротитровального планшета, и эти растворы разбавляли, соответственно, 0,115 мл и 0,0165 мл TNP-буфера. Аликвоты 0,030 мл раствора S-2238 добавляли в каждую ячейку и планшет предварительно подогревали и предварительно инкубировали при встряхивании в инкубаторе (Amsterdam) в течение 10 мин при 37^oC. После прединкубации начинали гидролиз S-2238, добавляя в каждую ячейку 0,030 мл раствора тромбина. Планшет инкубировали (при встряхивании в течение 30 с) при 37^oC. Спустя 1 мин после начала инкубации в течение 90 мин через каждые 2 мин измеряли поглощение каждого образца при 405 нм, используя кинетический микротитровальный планшет-ридер (Twinreader plus. Flow Laboratories).

Все данные передавались на персональный компьютер IBM с помощью LOTUS-MEASURE. Для каждой концентрации соединения (выраженной в моль/л реакционной смеси) и для контроля строили графики зависимости поглощения от времени реакции в мин.

Оценка реакции: Для каждой конечной концентрации максимальное поглощение рассчитывали из графика опыта. Значение IC₅₀ (конечная концентрация, выраженная в мкмоль/л, вызывающая 50% ингибирование максимального поглощения контроля) рассчитывали методом logit transformation analysis, согласно Hafner et al. (Arzneim. - Forsch. /Drug Res. 1977, 27(11): 1871-3). В следующей таблице представлены данные о значениях IC₅₀ для соединений по изобретению:
Пример - Величина IC₅₀ (мкмоль)
1 - 0,56
3 - 4,3
11 - 5
15 - 0,7
27 - 4,64
30 - 5,1

Формула изобретения

1. Соединение, имеющее формулу I

в которой А представляет Н; необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил; R¹; R¹-O-C(O)-; R¹-C(O)-; R¹-SO₂; R²OOC-(chr²)_m; где R¹ выбран из групп, включающей (С_1-12)алкил, и (С_3-8)циклоалкил, (С_6-14)арил и (С_7-15)аралкил; каждая группа R² независимо представляет Н или имеет те же значения, что и R¹; m = 1;
В представляет собой связь, аминокислоту формулы -NH-CH[(CH₂)_pC(O)OH] -C(O)- или ее производный эфир, где р = 1, D-l-Piq или L-или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, причем гидрофобная боковая цепь означает (С_1-12)алкил, необязательно замещенный одной или несколькими (С_3-8)циклоалкил, группами или (С_6-14) арил группами, такими как циклогексил и фенил, причем гидрофобная боковая цепь может быть необязательно замещена заместителями, такими как галоген, или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-C(O)-, в котором R³ и R⁴ независимо представляют R¹ или R¹-SO₂ и R⁵ представляет гидрофобную основную или нейтральную боковую цепь;
X представляет циклическую аминокислоту, например, пролин, пипеколиновую кислоту, или X представляет -NR²-CH₂-C(O)- или фрагмент

в котором n = 2, 3 или 4, Y представляет -СО-NH-(С_1-6)-алкилен-С₆Н₅, -СООR⁶, причем R⁶ представляет Н или (С_1-6)алкил, -СОNR⁷R⁸, и R⁷ и R⁸ независимо представляет Н или (С_1-6)алкил, или R⁷ и R⁸ вместе представляют (С_3-6)алкилен, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-оксазола; и r = 0, 1, 2 или 3;
или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где X представляет -NR²-CH₂-С(О)-.

3. Соединение по п. 1, где А представляет Н, 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-, 9-гидроксифлуорен-9-карбоксил, R¹, R¹-SO₂- или R²ООС-(СНR²)-.

4. Соединение по п. 3, где А представляет Н, R¹-SO₂- или R²OOC-chr²-.

5. Соединение по п. 4, где А представляет R²ООС-СНR²-, B представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; и X представляет пролин, пипеколиновую кислоту или [N(C_3-8)-циклоалкил] -СН₂-С(О)-.

6. Соединение по п. 5, где А представляет НООС-СН₂-; B представляет D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, или D-Chg.

7. Соединение по п. 6, где Y выбирают из 2-тиазола и 2-оксазола.

8. Соединение по п. 4, где А представляет R¹-SO₂-, В представляет связь D-l-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-СHR⁵-С-(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R¹-SO₂- и другой независимо представляет (С_1-12) алкил или R¹-SO₂-.

9. Соединение по п. 8, где А представляет этил-SO₂- или бензил -SO₂-; В представляет связь, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, или D-Chg; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(O)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-, а другой независимо представляет (С_1-12)алкил или R¹-SO₂-, и R⁵ представляет (C₃-C₈)циклоалкил, (С_3-8)циклаалкил (С_1-4)алкил, фенил, бензил, дифенилметинил, указанные группы необязательно замещены хлором или (С_1-4)алкокси.

10. Соединение по п. 9, где Y представляет -СО-NH-CH₂-С₆Н₅, -СО-NH-СН₂СН₂-С₆Н₅ или -CONR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ независимо представляют Н или (С_1-3) алкил, или R⁷ и R⁸ вместе представляют (С_3-5)алкилен, или Y представляет 2-тиазол или 2-оксазола.

11. Соединение по любому из пп. 1-10, где r = 1.

12. Фармацевтическая композиция, обладающая антитромбиновой активностью, включающая соединение по пп. 1-11 и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

13. Соединение по любому из пп. 1-11 проявляющее антитромбиновую активность.

14. Соединение по любому из пп. 1-11 для изготовления фармацевтических композиций, проявляющих антитромбиновую активность.