Ингибиторы сериновых протеаз



 

Описываются новые ингибиторы сериновых протеаз, имеющие пиперидиновую боковую цепь общей формулы (I), где (A) - Н, необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил, R1, R1-О-С(О)-, R1-SO2-, R2OOC-(chr2)m-, где R1 выбирают из (1-12С)алкила и (3-8С)циклоалкила, причем указанные группы могут быть замещены ОН-группой, и из (7-15С)аралкила, а каждая группа R2 независимо представляет Н или имеет те же значения, которые указаны для R1; m = 1, 2 или 3; В - связь, аминокислота формулы -NH-CH[CH2)pC(O)OH]-C(O)-, где р = 0, 1, 2 или 3; -N((1-12C)алкил)-СН2-СО-, D-1-Piq, либо В представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(O)-, где R3 и R4 независимо - R1, R1-О-С(О)-, R1-С(О), R1-SO2-, а R5 представляет гидрофобную или основную боковую цепь; Х - L-аминокислота с гидрофобной боковой цепью; Y - -CO-NH-(1-6C)алкилен - С6Н5, -СООR6, где R6 - Н или (1-6С)алкил, -CONR7R8 независимо представляют Н или (1-6С)алкил либо R7 и R8, взятые вместе, представляют (3-6С)алкилен, либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола; r = 0, 1, 2 или 3, или его фармацевтически приемлемые соли. Вышеуказанные соединения обладают антикоагулирующим действием и могут быть использованы для лечения или предупреждения заболеваний, опосредованных действием тромбина. Описывается также фармацевтическая композиция, содержащая этот ингибтор. 2 с. и 13 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к ингибитору сериновых протеаз, имеющему пиперидиновую боковую цепь; к фармацевтическим композициям, содержащим этот ингибитор; а также к использованию указанного ингибитора в целях изготовления лекарственного средства для лечения и предупреждения заболеваний, ассоциированных с действием тромбина.

Сериновые протеазы представляют собой ферменты, которые, помимо других своих функций, играют важную роль в каскаде реакций свертывания крови. Членами этой группы протеаз являются, например, тромбин, трипсин, факторы VIIa, IXa, Ха, XIa, XIIa и белок С.

Тромбин представляет собой сериновую протеазу, которая регулирует последнюю стадию каскада реакций свертывания крови. Главная функция тромбина заключается в расщеплении фибриногена с продуцированием мономеров фибрина, которые посредством поперечных сшивок образуют нерастворимый гель. Кроме того, тромбин регулирует свое собственное продуцирование путем активации факторов V и VIII, которые действуют на более ранних стадиях каскада реакций. Важно также отметить, что тромбин функционирует на клеточном уровне, где он воздействует на специфические рецепторы, вызывая, тем самым, агрегацию тромбоцитов, активацию эндотелиальных клеток и пролиферацию фибропластов. Таким образом, тромбин играет роль центрального регулятора при гемостазе и образовании тромбов. Поскольку ингибиторы тромбина могут иметь широкий диапазон терапевтических применений, то в этой области были проведены обширные исследования.

При разработке синтетических ингибиторов сериновых протеаз, а более конкретно, тромбина, возрос интерес к небольшим синтетическим пептидам, которые распознаются протеолитическими ферментами по механизму, аналогичному распознаванию природных субстратов. В результате этого были получены новые пептидоподобные ингибиторы, такие как ингибиторы тромбина кратковременного действия.

Исследования по разработке более эффективных и более селективных ингибиторов тромбина неустанно продолжаются с целью получения ингибиторов тромбина, которые могли бы быть введены в малых дозах и которые имели бы меньше побочных эффектов и менее тяжелые побочные эффекты. Кроме того, особое внимание уделяется применимости ингибитора тромбина для перорального введения. Сильные ингибиторы тромбина для внутривенного введения являются клинически эффективными при острых состояниях, требующих лечения заболеваний, ассоциированных с действием тромбина. Однако для предупреждения заболеваний, ассоциированных с действием тромбина, таких как инфаркт миокарда, тромбоз и шок, требуется длительная терапия предпочтительно путем перорального введения определенных доз антикоагулянта.

Большинство пептидоподобных ингибиторов тромбина, описанных в предшествующих публикациях, содержат боковые цепи аргинина. Проблема заключается в том, что эти аргининсодержащие ингибиторы тромбина имеют низкую биодоступность при пероральном введении. В литературе описан ряд ингибиторов тромбина, которые вместо аргинина содержат лизиновые боковые цепи. Было высказано предположение, что более низкая основность лизина по сравнению с аргинином может приводить к повышению пероральной биодоступности этих ингибиторов. Примерами лизинсодержащих ингибиторов тромбина являются N-Me-Cha-Pro-Lys-COOH и их производные, описанные Jones et al., J.Enzyme Inhibition, 9 (1995), 43-60, и ингибиторы N-Me-D- Phe-Pro-Lys-X, где X представляет карбоксамид или карбоновую кислоту, описанные Lewis et al. Thrombosis and Haemostasis, 74(4) (1995), 1107-12. Однако ожидаемого улучшения не наблюдалось, и пероральная биодоступноссть нескольких лизинсодержащих ингибиторов тромбина была аналогична доступности ингибиторов, содержащих аргининовую боковую цепь (Lewis et al. Thrombosis and Haemostasis, 74(4) (1995), 1107-12). Другие ингибиторы тромбина были описаны в WO 94/25051, где лизиновые или аргининовые боковые цепи были заменены аминоциклогексильными радикалами, которые могут рассматриваться как изостеры лизина.

Авторами настоящей заявки было обнаружено, что ингибиторы сериновых протеаз, а в частности ингибиторы тромбина, Ха и VIIa, имеющие пиперидиновую боковую цепь, формулы I: где A представляет H, необязательно замещенный D,L--гидроксилацетил, R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R1-SO2-, R2OOC- (chr2)m-SO2, R2OOC-(chr2)m-, H2NCO-(chr2)m- или N-защитную группу, где R1 выбирают из (1-12C)алкила, (2-12C)алкенила, (2-12C)алкинила и (3-8C)циклоалкила, причем указанные группы могут быть необязательно замещены (3-8C)циклоалкилом, (1-6C)алкокси, оксо, ОН, COOH, CF3 или галогеном, и из (6-14C)арила, (7- 15C)аралкила и (8-16C)аралкенила; причем их арильные группы могут быть необязательно замещены (1-6C)алкилом, (3-8C)циклоалкилом, (1- 6C)алкокси, ОН, COOH, CF3 или галогеном; а каждая группа R2 независимо представляет H или имеет те же значения, которые указаны выше для R1; m=l, 2 или 3; В представляет связь, аминокислоту формулы -NH-СН[(CH2)pС(O)ОН]-С(O)- или ее сложноэфирное производное, где p = 0, 1, 2 или 3; -N((1-12C)алкил)-CH2-СО-, N((2-12C)алкенил)-CH2-СО-, -N((2-12C)алкинил)- CH2-СО-, -N(бензил)-CH2-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или L- или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную, основную или нейтральную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещенной N-(1-6C) алкилом; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(O), где R3 и R4 независимо представляют R1, R1-O-C(О)-, R1-C(О)-, R1-SO2-, R2OOC-(chr2)m-SO2, R2OOC -(chr2)m-, H2NCO-(chr2)m- или N-защитную группу, либо один из R3 и R4, связанный с R5, образует 5- или 6-членное кольцо вместе с группой "N-C", с которой оно связано, где указанное кольцо может быть конденсировано с алифатическим или ароматическим 6-членным кольцом; a R5 представляет гидрофобную, основную или нейтральную боковую цепь; X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, серин, треонин, циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (1-6C)алкилом, (1-6C)алкокси, бензилокси или оксо, либо X представляет -NR2-CH2-C(O)- или фрагмент или где n=2, 3 или 4, a W представляет CH или N; Y представляет H, -CHF2, -CF2, -CO-NH-(1-6C)алкилен-C6H5, -COOR6, где R6 представляет H или (1-6C)алкил, -CONR7R8, а R7 и R8 независимо представляют H или (1-6C)алкил, либо R7 и R8, взятые вместе, представляют (3-6C)алкилен; либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола, где указанные гетероциклы могут быть необязательно замещены (1-6C)алкилом, фенилом, (1-6C)алкокси, бензилокси или оксо; а r=0, 1, 2 или 3;
либо их пролекарства или фармацевтически приемлемые соли являются сильными и селективными ингибиторами. Кроме того, некоторые соединения настоящего изобретения обладают хорошей биологической доступностью при пероральном введении.

Соединения настоящего изобретения могут быть использованы для лечения и предупреждения тромбин-опосредованных и ассоциированных с действием тромбина заболеваний. Такие заболевания включают ряд тромботических и протромботических состояний, при которых активируется каскад реакций свертывания крови и к которым относятся, но не ограничиваются ими, тромбоз глубокой вены, эмболия легких, тромбофлебит, окклюзия артерии в результате тромбоза или эмболии, повторная окклюзия артерии в процессе или после ангиопластики или тромболиза, рестеноз после повреждения артерии или после инвазивных кардиологических процедур, послеоперационный тромбоз или эмболия вен, острый или хронический артериосклероз, шок, инфаркт миокарда, рак и метастазы и нейродегенеративные заболевания. Соединения настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве антикоагулянтов при искусственном кровообращении, необходимом при диализе и хирургических операциях. Соединения настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве in vitro-антикоагулянтов.

Предпочтительные соединения настоящего изобретения имеют формулу I, где X представляет собой L-аминокислоту с гидрофобной цепью, серин, треонин или -NR2-CH2-C(O). Другими предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых А является таким, как он был определен выше; B представляет связь, аминокислоту формулы -NH-CH[(CH2)pC(O)OH]-C(O)- или ее сложноэфирное производное, где p=0, 1, 2 или 3; -N((1-6C)алкил)-CH2-СО-, N((2-6C)алкенил)-CH2-СО-, N(бензил)-CH2-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещенной N-(1-6C) алкилом; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(O), а X представляет циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (1-6C) алкилом, (1-6C)алкокси, бензилокси или оксо; либо X представляет -NR2-CH2-C(O)- или фрагмент

или

Более предпочтительными являются соединения формулы I, где А представляет H, 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-, 9-гидрокси-флуорен-9-карбоксил, R1, R1-SO2-, R2OOC-(chr2)m-SO2, R2OOC-(chr2)m-, H2NCO-(chr2)m- или N-защитную группу, где R1 выбирают из (1-12C)алкила, (2-12C)алкенила, (6-14C)арила, (7-15C)аралкила и (8-16C)аралкенила; каждая группа R2 независимо представляет H или имеет те же значения, которые были указаны для R1; B представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещенной N-(1-6C) алкилом; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(О)-; Y представляет -CO-NH-(1-6C)алкилен-C6H5, - COOR6, -CONR7R8; либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола.

Особенно предпочтительными являются соединения, в которых А представляет H, R1, R1-SO2- или R2OOC-(chr2)m-SO2; B представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-С(O), где, по крайней мере, один из R3 и R4 представляет R2OOC-(chr2)m- или R1-SO2-, а другой независимо представляет (1-12C)-алкил, (2-12C)алкенил, (2-12C)алкинил, (3-8C)циклоалкил, (7-15C)аралкил, R1-SO2- или R2OOC-(chr2)m-, a R5 представляет гидрофобную боковую цепь; Y представляет -CO-NH-(1-6C)алкилен-C6H5, -COOR6, где R6 представляет H или (1-3C)алкил, -CONR7R8, где R7 и R8 независимо представляют H или (1-3C-алкил, либо R7 и R8, взятые вместе, представляют (3-5C)алкилен, либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2- бензоксазола.

Если А представляет R2OOC-(chr2)m-, то B предпочтительно представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(О)-, где, по крайней мере, один из R3 и R4 представляет R2OOC-(chr2)m-, а другой независимо представляет (1-12C)алкил, (2-6C)алкенил, (3-8C)циклоалкил, бензил, R1-SO2- или R2OOC-(chr2)m- ; X представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту или [N(3-8C)циклоалкил]-CH2-C(О)-. Более предпочтительными являются соединения, где А представляет HOOC-CH2-; B представляет D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, п-Cl-D-Phe, п-О метил-D-Phe, п-О этил-D-Phe, D- Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-OMe-D-Phe, D-Chg; или A и B, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(О)-, где, по крайней мере, один из R3 и R4 представляет HOOC-CH2-, а другой независимо представляет (1-4C)алкил, (1-4C)алкил-SO2- или HOOC-CH2-; a R5 представляет (3-8C)циклоалкил, (3-8C)циклоалкил(1-4C)алкил, фенил, бензил, которые необязательно замещены хлором или (1-4C)алкокси. Наиболее предпочтительными являются соединения, в которых А представляет HOOC-CH2-; B представляет D-Cha; X представляет пролин или -[N(циклопентил)] -CH2-С(О)-.

Если А представляет R1- SO2-, то В предпочтительно представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-С(О)-, где, по крайней мере, один из R3 и R4 представляет R1- SO2-, а другой независимо представляет (1-12C)-алкил или R1- SO2-; X представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту, -[N(3-8C)циклоалкил]-CH2-C(O)- или фрагмент

или

Более предпочтительными являются соединения, где А представляет этил-SO2- или бензил-SO2-; B представляет связь, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, п-Cl-D-Phe, п-О метил-D-Phe, п-О этил-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-ОМе-В-Рhе, D-Chg; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(О)-, где, по крайней мере, один из R3 и R4 представляет этил-SO2- или бензил-SO2-, а другой независимо представляет (1-12C)алкил или R1-SO2-, a R5 представляет (3-8C)циклоалкил, (3-8C)циклоалкил(1-4C)алкил, фенил, бензил, дифенилметинил, где указанные группы необязательно замещены хлором или (1-4C)алкокси. Наиболее предпочтительными являются соединения, где А представляет этил-SO2; В представляет D-Cha, а X представляет пролин или -[N циклопентил]-CH2-C(О)-.

Наиболее предпочтительно, если в соединениях формулы I, r=l.

В вышеприведенных определениях N-защитная группа радикала А представляет любую N-защитную группу, используемую в пептидах. Подходящие N-защитные группы могут быть найдены в работах Т.W.Green and P.G.M. Wuts: Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition (Wiley, NY, 1991) and in The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol 3 E. Gross and J.Meienhofer, Eds., (Academic Press, New York, 1981).

Термин "необязательно замещенный D,L --гидроксиацетил" означает группу формулы HO-CRaRb-C(О)-, где Ra и Rb независимо представляют H, гидрофобную боковую цепь; либо Ra и Rb, взятые вместе, образуют 5- или 6-членное кольцо, которое необязательно конденсировано с одним или двумя алифатическими или ароматическими 6-членными кольцами, и где указанное 5-или 6-членное кольцо состоит из атомов углерода и необязательно одного гетероатома, выбранного из N, О и S. Предпочтительными D,L- -гидроксиацетильными группами являются 2-гидрокси-3-циклогексил-пропионил- и 9-гидрокси-флуорен-9-карбоксил.

Термин "(1-12C)алкил" означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую 1-12 атомов углерода, такую как метил, этил, трет-бутил, изопентил, гептил, додецил и т.д. Предпочтительными алкильными группами являются (1-6C)-алкильные группы, имеющие 1-6 атомов углерода. Наиболее предпочтительными группами, указанными выше для R6, R7 и R8, являются (1-3C)алкильные группы, имеющие 1-3 атома углерода, такие как метил, этил, изопропил. (2-12C)алкенильная группа представляет собой разветвленную или неразветвленную ненасыщенную углеводородную группу, имеющую 2-12 атомов углерода. Предпочтительными являются (2-6C)алкенильные группы. Примерами таких групп являются этенил, пропенил, аллил и т.п.

Термин "(1-6C)алкилен" означает разветвленную или неразветвленную алкиленовую группу, имеющую 1-6 атомов углерода, такую как (CH2)m-, где m=1-6; -CH(CH3)-, -CH(CH3)-(CH2)- и т.п. Предпочтительными алкиленовыми группами в определении Y являются этилен и метилен.

(2-12C)Алкинильная группа представляет собой разветвленную или неразветвленную углеводородную группу, содержащую тройную связь и имеющую 2-12 атомов углерода. Предпочтительными являются (2-6C)алкинильные группы, такие как этинил и пропинил.

(6-14C)Арильная группа представляет собой ароматический радикал, состоящий из 6-14 атомов углерода. Арильная группа может, кроме того, содержать один или несколько гетероатомов, таких как N, S или О. Примерами арильных групп являются фенил, нафтил, (изо)хинолин, инданил и т.п. Наиболее предпочтительной является фенильная группа.

(7-15C)Аралкильная и (8-16C)аралкенильная группы представляют собой алкильные и алкенильные группы, соответственно замещенные одной или несколькими арильными группами, причем общее число атомов углерода в этих группах составляет 7-15 и 8-16 соответственно.

Термин "(1-6C)алкокси" означает алкокси-группу, которая имеет 1-6 атомов углерода и алкильная часть которой является такой, как она была определена выше.

Термин "(3-8C)циклоалкил" означает циклоалкильную группу, имеющую 3-8 атомов углерода и представляющую собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил. При этом предпочтительными циклоалкильными группами являются циклопентил и циклогексил.

Термин "галоген" означает фтор, хлор, бром или йод.

Термин "сложноэфирное производное" означает любое подходящее сложноэфирное производное, предпочтительно (1-4C)-алкиловые сложные эфиры, такие как метиловые, этиловые или трет-бутиловые сложные эфиры.

Термин "1- и 3-Tiq" означают 1,2,3,4- тетрагидроизохинолин-1- или 3-карбоновая кислота соответственно; термин "1- и 3-Piq" означает 1- и 3-карбоксипергидроизохинолин соответственно; Atc означает 2-аминотетралин-2-карбоновую кислоту; Aic означает аминоинданкарбоновую кислоту; Phe означает фенилаланин; Cha означает циклогексилаланин; Dpa означает дифенилаланин; Coa означает циклооктилаланин; Chg означает циклогексилглицин; Nle означает норлейцин; Asp означает аспаргиновую кислоту.

Термин "гидрофобная боковая цепь" означает (1-12C)алкил, необязательно замещенный одной или несколькими (3-8C) циклоалкильными группами или (6-14C)арильными группами (которые могут содержать гетероатом, например азот), например, такую боковую цепь как циклогексил, циклооктил, фенил, пиридинил, нафтил, тетрагидронафтил и т.п.; причем указанная гидрофобная боковая цепь может быть необязательно замещена такими заместителями как галоген, трифторметил, низший алкил (например, метил или этил), низший алкокси (например, метокси), фенилокси, бензилокси и т.п.

В вышеприведенных определениях термин "замещенный" означает: замещенный одним или несколькими заместителями. Примерами аминокислот, имеющих основную боковую цепь, являются, но не ограничиваются ими, аргинин и лизин, предпочтительно аргинин. Термин "аминокислоты, имеющие нейтральную боковую цепь" относится к таким аминокислотам, как метионинсульфон и т.п.

Примерами циклических аминокислот являются 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, пипеколиновая кислота, 1-амино-1-карбокси-(3-8C)циклоалкан (предпочтительно 4C, 5C или 6C), 4-пиперидинкарбоновая кислота, 4-тиазолидинкарбоновая кислота, 3,4-дегидропролин, азапролин, 2-октагидроиндолкарбоновая кислота и т.п. Предпочтительными являются 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, пипеколиновая кислота, 4-тиазолидинкарбоновая кислота, 3,4-дегидропролин и 2-октагидроиндолкарбоновая кислота. Термин "пролекарственный предшественник" означает соединение, в котором атом азота в пиперидиновой группе соединения формулы 1 является защищенным, например, гидрокси-группой, (1-6C)алкокси-группой или (1-6C)алкоксикарбонильной группой.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к способу получения соединения формулы I, предусматривающему присоединение соответствующим образом защищенных аминокислот или аналогов аминокислот, с последующим удалением защитных групп.

Соединения формулы 1 могут быть получены способом, обычно используемым для получения таких соединений. Модифицированные аминокислоты, имеющие пиперидиновую боковую цепь, вводят способом, аналогичным известным способам, обычно используемым для других аминокислот.

Для этой цели подходящие производные или пептид N-защищенных (и защищенных по боковой цепи в случае, если присутствуют реакционноспособные боковые цепи) - аминокислот активируют и присоединяют к соответствующим образом карбоксилзащищенной аминокислоте или ее пептидному производному либо в растворе, либо на твердом носителе. Защиту функциональных -аминогрупп обычно осуществляют с использованием уретановых функциональных групп, таких как неустойчивая к кислоте трет-бутоксикарбонильная группа (BOC), бензилоксикарбонильная (Z) группа и замещенные аналоги; либо неустойчивая к основанию 9-флуоренил-метоксикaрбонильная (Fmoc) группа. Группа Z может быть также удалена путем каталитического гидрирования. Другими подходящими аминозащитными группами являются Nps, Bmv, Врос, Msc и т.п. Хороший обзор аминозащитных групп приводится в работе The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, E. Gross and J.Meienhofer, Eds., (Academic Press, New York, 1981). Защита карбоксильных групп может быть осуществлена путем образования эфиров, например неустойчивых к основанию сложных эфиров, таких как метиловый или этиловый сложный эфир; неустойчивых к кислоте сложных эфиров, таких как трет-бутиловый сложный эфир, или гидрогенолитически неустойчивых сложных эфиров, таких как бензиловый сложный эфир. Защита пиперидиновой боковой цепи может быть осуществлена с использованием вышеуказанных групп. Активация карбоксильной группы соответствующим образом защищенных аминокислот или пептидов может быть осуществлена с использованием азида, смешанного ангидрида, активного сложного эфира или карбодиимида, в частности, путем добавления каталитических и подавляющих рацемизацию соединений, таких как 1-гидроксибензотриазол, N-гидроксисукцинимид, 3-гидрокси-4-окси-3,4-дигидро-1,2,3-бензотриазин, N-гидрокси-3- норборнен-2,3-дикарбоксамид. См., например, Peptides, Analysis, Synthesis, Biology (см. выше) и Pure and Applied Chem., 59(3), 331-344 (1987).

Соединения настоящего изобретения, которые могут существовать в форме свободного основания, могут быть выделены из реакционной смеси в виде фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемые соли могут быть также получены путем обработки свободного основания формулы I органической или неорганической кислотой, такой как хлористый водород, бромистый водород, йодистый водород, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, метансульфоновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота и аскорбиновая кислота.

Соединения настоящего изобретения имеют один или несколько хиральных атомов, и поэтому они могут быть получены в виде чистого энантиомера или смеси энантиомеров, или смеси, содержащей диастереомеры. Способы получения чистых энантиомеров хорошо известны специалистам, например кристаллизация солей, которые получают из оптически активных кислот и рацемической смеси; или хроматография с использованием хиральных колонок. В случае диастереомеров могут быть использованы колонки с прямой фазой или с обращенной фазой.

Соединения настоящего изобретения могут быть введены путем приема внутрь или парентерально, при этом предпочтительная суточная доза для человека составляет 0,001-100 мг на 1 кг веса тела, а более предпочтительно 0,01-10 мг на 1 кг веса тела. Соединения настоящего изобретения, смешанные с фармацевтически приемлемыми носителями, описанными, например, в известном руководстве Gennaro et al., Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed., Mack Publishing Company, 1990, см., в частности. Part 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture), могут быть спрессованы в твердые стандартные лекарственные формы, такие как драже или таблетки; либо они могут быть изготовлены в виде капсул или суппозиториев. С использованием фармацевтически приемлемых жидких носителей эти соединения могут быть также изготовлены в виде раствора, суспензии или эмульсии, например, для введения в качестве препарата для инъекций; либо в виде спрея, например, при использовании в качестве аэрозолей для введения через нос.

Для изготовления лекарственных форм, например таблеток, предусматривается использование стандартных добавок, таких как наполнители, красители, полимерные связующие и т.п. В основном может быть использована любая фармацевтически приемлемая добавка при условии, что она не будет оказывать неблагоприятного действия на функцию активного соединения. Подходящими носителями, которые могут быть введены в композиции, являются лактоза, крахмал, производные целлюлозы и т.п., или их смеси, используемые в соответствующих количествах.

Настоящее изобретение, кроме того, проиллюстрировано нижеследующими примерами.

Примеры
Термины -Ppa[COCO]-ОН, Ppa-ОМе и Ppa-(2-тиазолил) означают

где Y представляет COOH, OCH3 и 2-тиазолил соответственно. Azt = 2-азетидинкарбоновая кислота; Boc = трет-бутилоксикарбонил; Cbz = бензилоксикарбонил; TsOH = паратолуолсульфоновая кислота.

Пример 1
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
(a) H-D-Cha-OMe.HCl
К холодному (-20oC) и сухому метанолу (195 мл) по каплям добавляли тионилхлорид (28 мл). После добавления H-D-Cha-ОН.HCl (40 г), реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Смесь концентрировали в вакууме и выпаривали вместе с метанолом (3 раза). Остаток кристаллизовали из метанол/диэтиловый эфир и получали H-D-Cha-OMe.HCl в виде белого кристаллического порошка (40,9 г).

ТСХ: Rf 0,66, силикагель, н-бутанол/уксусная кислота/вода, 10/1/3, об/об/об.

(b) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-OMe
Трет-бутилбромацетат (36 г) добавляли к перемешанному раствору H-D-Cha-OMe. HCl (40,9 г) в 400 мл ацетонитрила. pH смеси доводили до 8,5 путем добавления N, N-диизопропилэтиламина. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и упаривали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане и раствор промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме. После хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат, 9/1, об/об, было получено 64 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-OMe.

ТСХ: Rf 0,25, силикагель, этилацетат/гептан, 1/1, об/об.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe
pH раствора N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-ОМе (64 г) и ди-т-бутилдикарбоната (40,3 г) доводили до 8,5 путем добавления N,N-диизопропилэтиламина. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме. К остатку добавляли дихлорметан и воду. Органический слой отделяли, промывали холодной 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% бикарбонатом натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия, и фильтрат упаривали с получением N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-OMe в виде аморфного твердого вещества с выходом 59,6 г.

ТСХ: Rf 0,50, силикагель, этилацетат/гептан, 1/1, об/об.

(d) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH
Раствор N- (т-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-OMe (59,6 г) в 900 мл диоксан/вода (9/1, об/об) обрабатывали достаточным количеством 6 н гидроксида натрия для поддержания pH = 12 в течение 6 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и получали 54 г N-(т- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH.

ТСХ: Rf 0,60; силикагель, дихлорметан/метанол, 9/1, об/об.

(е) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl
К холодному (0oC) раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (13,5 г) в N,N-диметилформамиде (150 мл) последовательно добавляли 1-гидроксибензотриазол (HOBT) (7,09 г), дициклогексилкарбодиимид (DCCl) (7,61 г), H-Pro-Obzl. HCl (9,31 г) и триэтиламин (6 мл). Смесь перемешивали при 0oC в течение 1 часа, а затем выдерживали при комнатной температуре в течение ночи. Эту смесь охлаждали до -20oC, а дициклогексилмочевину удаляли путем фильтрации. Фильтрат упаривали досуха. Остаток растворяли в этилацетате и последовательно промывали 5% бикарбонатом натрия, водой, 3% лимонной кислотой и насыщенным солевым раствором, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле, используя в качестве элюента гептан/этилацетат, 3/1, /об/об. Фракции, содержащие N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-ОВzl, объединяли и выпаривали. Выход составил 15 г.

ТСХ: Rf 0,70, силикагель, гептан/этилацетат, 1/1 об/об.

(f) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH
К раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Рго-OBzl (15 г) в метаноле (150 мл) добавляли 10% палладий на угле (750 мг). Смесь гидрировали при атмосферном давлении и при комнатной температуре в течение 1 часа. Палладиевый катализатор удаляли путем фильтрации, а растворитель удаляли путем выпаривания при пониженном давлении, в результате чего получили 11,2 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH.

ТСХ: Rf 0,65, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 213/20/6/11, об/об/об/об.

(g) Диэтил 2-ацетамидо-2-[(пиридин-4-ил)метил]-малонат
Порцию (46 г) металлического натрия добавляли к 3,5 л этанола и нагревали. К полученному раствору этоксида натрия добавляли диэтилацетамидомалонат (217 г) и 4-пиколилхлорида гидрохлорид (164 г). Реакционную смесь нагревали до 100oC в течение 4 часов, охлаждали, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане, фильтровали через диацель и силикагель и концентрировали в вакууме. Остаток обрабатывали 1 л диэтилового эфира, фильтровали и промывали диэтиловым эфиром. Выход: 142 г.

ТСХ: Rf 0,5 этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об, на силикагеле.

(h) Этил 2-ацетамидо-2-[(пиридин-4-ил)метил]-малонат
Раствор 142 г диэтил 2-ацетамидо-2-[(пиридин-4-ил)метил]-малоната, 46 г гидроксида калия в 2 л этанола и 800 мл воды перемешивали в течение 16 часов. Смесь подкисляли и концентрировали в вакууме. В результате совместного упаривания с метанолом и толуолом получали 187 г этил 2-ацетамидо-2-[(пиридин- 4-ил)метил]-малоната (содержащего хлорид калия).

ТСХ: Rf 0,95 на силикагеле; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об.

(i) Этил 2-N-ацетиламино-3-(пиридин-4-ил)пропаноат
Раствор 394 г этил 2-ацетамидо-2- [(пиридин-4-ил)метил]-малоната в 1,5 л N, N-диметилформамида нагревали с обратным холодильником в течение 1,5 часов и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в воде и pH доводили до 11,5. Смесь экстрагировали этилацетатом, сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Выход: 158,8 г.

ТСХ: Rf 0,35, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об, на силикагеле.

(j) Ac-Ppa-OEt
Раствор 39,5 г этил 2-N-ацетиламино-3- (пиридин-4-ил)пропаноата в 1 л этанола восстанавливали в атмосфере водорода с использованием 4 г 10% палладия на активированном угле в качестве катализатора. Через 18 часов катализатор удаляли путем фильтрации и фильтрат концентрировали досуха с получением 40 г нужного соединения.

(k) H-Ppa-OH
Раствор 81,5 г Ac-Ppa-OEt в 6 н хлористоводородной кислоте нагревали с обратным холодильником в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и получали 90 г H-Ppa-OH.HCl.

ТСХ: Rf 0,97, 1-бутанол/пиридин/уксусная кислота/вода, 8/3/1/4, об/об/об/об, на силикагеле.

(l) Cbz-Ppa(Boc)-ОН
Доводили pH раствора 90 г H-Ppa-OH, 51,23 г пентагидрата сульфата меди (II) и 166 г ди-т-бутилдиикарбоната в воде (1730 мл) и диоксане (1250 мл) до значения 9 путем добавления 2 н гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Осадок собирали и тщательно промывали водой. Осадок на фильтре растворяли в диоксане, а pH доводили до 12,5 путем добавления 4 н гидроксида натрия и добавляли 200 г бензилоксикарбонилоксисукцинимида. Смесь перемешивали в течение 16 часов. Осадок собирали и промывали диоксаном. Фильтрат концентрировали до небольшого объема и pH доводили до 2,5. Остаток разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха с получением 160 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,77; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об, на силикагеле.

(m) Cbz-Ppa(Boc)-OMe
К раствору 160 г Cbz-Ppa(Boc)-ОН в дихлорметан/метанол (9/1, об/об) (3 л) добавляли 120 г тетрафторбората 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), после чего pH доводили до 8,5 путем добавления триэтиламина. Полученную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Органический слой промывали 2 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и снова водой, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента дихлорметан/этилацетат, 9:1, об/об. Фракции, содержащие сложный метиловый эфир, объединяли, а растворитель удаляли в вакууме. Остаток кристаллизовали из диизопропиловый эфир/диэтиловый эфир и получали первый сбор 75 г нужного продукта. Маточный раствор хроматографировали в толуол/этилацетат, 8/2, об/об и получали 34 г Cbz-Ppa(Boc)-OMe.

ТСХ: Rf 0,77, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об, на силикагеле.

(n) 2-Ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-(1-т-бутилоксикарбонил(пиперидин-4-ил)бутанитрил
При -78oC 908 мл предварительно охлажденного гидрида диизобутилалюминия (1,0 М раствор в гексане) добавляли к перемешанному раствору 109 г Cbz-Ppa(Boc)-ОМе в дихлорметане (3 л) так, чтобы температура поддерживалась ниже -70oC. Раствор перемешивали в течение 1 часа при -70oC, а затем добавляли 1 л насыщенного раствора лимонной кислоты. Смесь выливали в два литра раствора лимонной кислоты и экстрагировали дихлорметаном. Объединенные экстракты промывали водой, 5% раствором бикарбоната натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат охлаждали до 0oC и последовательно добавляли 15 г хлорида бензилтриэтиламмония, 58 мл уксусного ангидрида и раствор 118 г цианида натрия в воде (1,5 л). Полученную смесь интенсивно перемешивали в течение 30 минут. Органический слой отделяли, дважды промывали водой, сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле, элюируя гексан/этилацетат, 6/4, об/об, в результате чего получали целевое соединение в виде твердого вещества: 98 г.

ТСХ: Rf 0,65, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об, на силикагеле.

(о) Cbz-Ppa[CHOHCO]-OMe
Перемешиваемую суспензию 98 г 2- ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-(1-т-бутилоксикарбонил(пиперидин-4-ил)бутанитрила в 3 л смеси диэтиловый эфир/метанол (9/1, об/об) обрабатывали газообразным хлористым водородом (260 г) при -20oC. Смесь перемешивали в течение 24 часов при 0-5oC. Затем смесь охлаждали до -20oC и добавляли 408 мл воды. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при -20oC и органический слой отделяли. pH водного слоя доводили до 8 путем добавления 25%-ного аммиака, а затем этот слой экстрагировали 1-бутанолом. Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха с получением 57 г Cbz-Ppa[CHOHCO]-OMe.

ТСХ: Rf 0,5 на двуокиси кремния, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об.

(р) Cbz-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe
pH раствора Cbz-Ppa[CHOHCO]-OMe (57,9 г) и 40 г ди-третбутилдикарбоната в 500 мл N,N-диметилформамида доводили до 8,5 путем добавления триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 45 минут при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате, а затем промывали 0,1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% бикарбонатом натрия и снова водой. Органический слой сушили сульфатом натрия и упаривали досуха. Остаток хроматографировали на силикагеле, элюируя гептан/этилацетат, 6/4, об/об, и получали 31 г масла.

(q) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe
Раствор 120 мг Cbz-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe, 0,27 мл 1 н хлористоводородной кислоты и 12 мг 10%-ного палладия на активированном угле в качестве катализатора в N,N-диметилформамиде (4 мл) гидрировали при атмосферном давлении. После того как реакция была завершена, катализатор удаляли, a pH этого раствора доводили до 8,5 путем добавления триэтиламина. Полученный раствор добавляли к перемешиваемому раствору 137 мг N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-ОН, 40 мг 1-гидроксибензотриазола и 61 мг 1,3-дициклогексилкарбодиимида в 10 мл N,N-диметилформамида. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме и к остатку добавляли дихлорметан. Осадок фильтровали и фильтрат промывали 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и снова водой. Органический слой сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 220 мг нужного соединения.

ТСХ: Rf 0,6 на силикагеле, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об.

(r) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Рра(Boc)[CHOHCO]-ОН
pH раствора 220 мг N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-Ppa(Boc) [CHOHCO]-OMe в 15 мл диоксан/вода (9/1, об/об) доводили до 12 путем добавления 1 н гидроксида натрия. Реакционную смесь перемешивали в течение полутора часов. pН доводили до 2,5 путем добавления 1 н хлористоводородной кислоты и смесь выливали в воду, а затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха. Выход: 210 мг целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,21 на силикагеле, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об.

(s) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[COCO]-OH
К раствору 210 мг (r) N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO] -OH в 20 мл дихлорметана добавляли 177 мг 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бенздиоксол-3(1H)-она (реактив Десс-Мартина). Смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре, выливали в раствор тиосульфата натрия (5% в воде) и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой, сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Выход: 340 мг.

ТСХ: Rf 0,4 на силикагеле, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об.

(t) HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
Раствор 340 мг N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-PPa(Boc)[COCO]-ОН в 20 мл 90% трифторуксусной кислоты перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, а остаток очищали на препаративной ВЭЖХ-колонке с LC-18-BD Supelcosil с использованием системы градиентного элюирования А: 20%; В: 80%; С 0% ---> А: 20%; В: 55%; C: 25% в течение 45 минут при скорости потока 20 мл/мин. (А: 0,5 М фосфатный буфер с pH 2,1; B: вода; С: ацетонитрил:вода, 3:2, об/об), в результате чего получали смесь диастереомеров, 53,7 мг.

Rt (ЖХ): 22,65 мин; А: 20%; В: 80%; С: 0% - А: 20%; B: 20%; С: 60% в течение 40 минут.

Пример 2
HOOC-СН2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-Рра[COCO]-ОН
(а) N-Циклопентил-Gly-ОМе.HCl
H-Gly-OMe. HCl (46,4 г) растворяли в 400 мл метанола, а затем добавляли циклопентанон (34 г) и цианоборогидрид натрия (14 г) и реакционную смесь оставляли на 16 часов при комнатной температуре для прохождения реакции. Реакционную смесь гасили 6 М хлористоводородной кислотой до тех пор, пока pH не становился равным 2, после чего перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Растворитель удаляли путем выпаривания при пониженном давлении, а остаток растворяли в воде и промывали диэтиловым эфиром. РН доводили до > 10 путем добавления 6 М раствора гидроксида натрия, после чего продукт экстрагировали дихлорметаном, промывали насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соединение было кристаллизовано из этилацетата в виде HCl-соли. Выход: 43,5 г
ТСХ: Rf 0,71; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 88/31/18/7, об/об/об/об.

(b) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-N-циклопентил-Gly-O
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N-циклопентил-Gly-OH получали способом, аналогичным описанному в Примере 1 для дипептидной части, с использованием TBTU в качестве активатора.

(с) HOOC-CH2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-Рра[COCO]-ОН
DCCl/HOBt-связывание между N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-N-циклопентил-Gly-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO] - OMe. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, в результате чего получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 29,72 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/ 60%С за 40 минут.

Пример 3
HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-OH
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH получали, как описано в Примере 1, исходя из H-D-Phe-OH.HCl.

DCCl/HOBt-связывание между N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO] -OMe. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, в результате чего получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 17,77 и 18,19 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С за 40 минут.

Пример 4
HOOC-CH2-м-Cl-D,L-Phe-Pro-Рра[COCO]-ОН
H-м-Cl-D, L-Phe-OH. HCl получали из 3-хлорбензилбромида способом, описанным в Примере 53. Затем сборку полностью защищенного трипептида осуществляли способами, аналогичными
описанным в Примере 1. Целевое соединение получали в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 22,24/23,07 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С за 40 минут.

Пример 5
(HOOC-CH2-п-Cl-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-OH
(a) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-OH
Способами, аналогичными описанным в Примере 1, H-п-Cl-D-Phe-OH.HCl (10 г) превращали в N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-OH. Выход: 16,7 г.

ТСХ: Rf 0,27; силикагель, этилацетат/метанол, 9/1, об/об.

(b) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-OSu (Su=сукцинимид)
Раствор N-(т-Бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-п-Cl-D-Phe-OH (14,67 г) в 250 мл ацетонитрила обрабатывали N-гидроксисукцинимидом (4,11 г) и гидрохлоридом 1-(3- диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (6,86 г) в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь выпаривали досуха и остаток растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали водой, сушили сульфатом натрия и концентрировали с получением 19,11 г активного сложного эфира, который использовали непосредственно в последующей стадии.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-Pro-OH
H-Pro-OH.HCl (10,79 г) растворяли в 100 мл N,N-диметилформамида и 100 мл воды. pН реакционной смеси доводили до 8 путем добавления 1 н раствора гидроксида натрия, после чего по каплям добавляли N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-п-Cl-D-Phe-OSu (19,11 г), растворенный в 120 мл N,N-диметилформамида. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре при pH ~ 8. Эту реакционную смесь охлаждали и доводили до pH=2 путем добавления 1н хлористоводородной кислоты. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме. После очистки на силикагеле с использованием градиентного элюирования этилацетат/метанол, 9/1 - 1/1, об/об, получали 7,04 г нужного дипептида.

ТСХ: Rf 0,24; силикагель, этилацетат/метанол, 8/2, об/об.

(d) HOOC-CH2-п-Cl-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-ОН
DCCl/HOBt- связывание между N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-п-Cl-D-Phe-N-циклопентил-Gly-ОН и H-Ppa(Boc)[СНОНСО]-OMe.HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1. Целевое соединение было получено в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 23,67 мин. 20%A/80%B - 20%A/20%B/ 60%C в течение 40 минут.

Пример 6
НООС-СН2-D-п-МеО-Phe-Pro-Ppa[СОСО]-ОН
Способом, аналогичным описанному в Примере 1, исходя из Н-п-МеО-D-Phe-OH, был получен целевой трипептид в виде диастереомерной смеси.

Rt (ЖХ): 19,18 мин. 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 7
HOOC-CH2-D,L-Coa-Pro-Ppa[COCO]-OH
(а) Циклооктилметилбромид
Циклооктилметанол (8,16 г) растворяли в 47% HBr-растворе (70 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 1 часа при 130oC. Реакционную смесь выливали в воду со льдом (500 мл) и добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия (500 мл). Водный раствор экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы промывали водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле, используя в качестве элюента толуол. Фракции, содержащие циклооктилметилбромид, объединяли и упаривали. Выход: 9,85 г.

ТСХ: Rf 0,95; силикагель, толуол.

(b) (R,S)-Этил-2-ацетиламино-2-циано-3-циклооктилпропионат
Трет-бутилат калия (6,85 г) и этилацетамидоцианоацетат (8,1 г) растворяли в диметилсульфоксиде (100 мл) при комнатной температуре. Циклооктилметилбромид растворяли в диметилсульфоксиде (25 мл) и по каплям добавляли к реакционной смеси. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 44 часов. После выливания в 500 мл воды осадок фильтровали и сушили, в результате чего получали (R, S)-этил-2-ацетиламино-2-циано-3-циклооктилпропионат (2,95 г).

ТСХ: Rf 0,50, силикагель, гептан/этилацетат, 3/7, об/об.

(с) H-D,L-Coa-OH.HCl
(R, S)-Этил-2-ацетиламино-2-циано-3- циклооктилпропионат (2,95 г) суспендировали в 100 мл 20%-ной хлористоводородной кислоты и нагревали с обратным холодильником в течение 22 часов. Реакционную смесь охлаждали до 5oC и образовавшийся осадок фильтровали, промывали диэтиловым эфиром и сушили. Выход: 2,69 г H-D,L-Coa-OH.HCl
ТСХ: Rf 0,27; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об.

HOOC-CH2-D, L-Coa-Pro-Ppa[COCO] -OH получали способом, аналогичным описанному в Примере 1. Целевое соединение представляло собой смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 15,19 мин; 20%А/60%В/20% А - 20%А/80%C в течение 30 минут.

Rt (ЖХ): 25,71 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 8
HOOC-CH2-D-Nle-Pro-Ppa[COCO]-OH
Целевой трипептид в виде смеси диастереомеров получали способом, описанным в Примере 1, исходя из H-D-Nle-OH.

Rt (ЖХ): 19,50 и 20,24 мин; 20%А/80%В - 20%А/50%В/30%C в течение 40 минут.

Пример 9
HOOC-CH2-D-Dpa-Pro-Ppa[COCO]-OH
Способом, аналогичным описанному в Примере 1, исходя из H-D-Dpa-OH, было получено целевое соединение, трипептид, в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 29,18 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 10
D-Hpl-Pro-Ppa-(2-тиазолил) (Hp1=2-гидрокси-3-фенилмолочная кислота)
(a) THP-D-Hpl-Pro-OH
Синтез THP-D-Hpl-Pro-OH, исходя из H-D-Cha-OH, описан в Примере 20.

(b) D-Hpl-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Реакцию связывания THP-D-Hpl-Pro-OH с H-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил) TFA с последующим снятием защиты и очисткой проводили способами, описанными в Примере 45, в результате чего получали D-Hpl-Pro-Ppa-(2-тиазолил) в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 23,42 и 24,36 мин; 20%А/60%В и 20%C - 100%С в течение 40 минут.

Пример 11
HOOC-CH2-п-Ме-D-Phe-Рго-Рра[COCO]-ОН
(a) Fmoc-п-Me-D-Phe-OMe
Fmoc-п-Me-D-Phe-OH (5 г) растворяли в дихлорметан/метанол, 9/1, об/об (50 мл). После добавления тетрафторбората 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (4,4 г) раствор доводили до pH 8 путем добавления триэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Смесь последовательно промывали холодным 1 н раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5% бикарбонатом натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и получали 5,6 г Fmoc-п-Me-D-Phe-OMe в виде масла.

ТСХ: Rf 0,55, силикагель, этилацетат/гептан, 6/4, об/об.

(b) Н-п-Ме-D-Phe-OMe
Fmoc-п-Me-D-Phe-OMe (5,6 г) растворяли в 35 мл N, N-диметилформамид/пиперидин (4/1) и перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Смесь упаривали и остаток растворяли в этилацетате и промывали 0,1 М хлористоводородной кислотой, pH объединенных водных слоев доводили до 9 путем добавления 1 М раствора гидроксида натрия. После экстракции дихлорметаном полученное масло хроматографировали на силикагеле, элюируя этилацетат/метанол, 95/5, об/об. Фракции, содержащие Н-п-Ме-D-Phe-OMe, объединяли и упаривали. Выход: 2,33 г.

ТСХ: Rf 0,10, силикагель, гептан/этилацетат, 3/2, об/об.

После этого проводили сборку полностью защищенного трипептида способами, аналогичными описанным в Примере 1. Целевое соединение было выделено в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 22,55 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 12.

Бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-S-Ppa[COCO]-ОН
NorLeu(цикло)-Gly означает структурный фрагмент формулы:

(a) 3-(Пиперидин-4-ил)пропановая кислота
Смесь 12,5 г 3-(4-пиридил)акриловой кислоты и 1,25 г 10% Pd/C в качестве катализатора в 1 л этанола и 83 мл 1 н хлористоводородной кислоты встряхивали в атмосфере водорода в течение 64 часов. Катализатор удаляли путем фильтрации и фильтрат упаривали досуха с получением 13 г нужного соединения.

ТСХ: Rf 0,7; силикагель; бутанол/пиридин/уксусная кислота/вода, 4/1/1/2, об/об/об/об.

(b) 3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропановая кислота
Суспензию 3-(пиперидин-4-ил)пропановой кислоты в 500 мл N,N-диметилформамида обрабатывали 30,9 г ди-т-бутилдикарбоната, pH реакционной смеси поддерживали 8,5 с использованием триэтиламина, а затем перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Смесь выливали в 65 мл охлажденного 2 н раствора гидроксида натрия и промывали этилацетатом. Водную фазу подкисляли до pH=2 путем добавления 2 н хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 37 г нужного соединения.

ТСХ: Rf 0,7, силикагель, дихлорметан/метанол, 9/1, об/об.

(с) (4S)-3-[3-[1-(т-Бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил] - 1-оксопропил]-4-(фенилметил)-2-оксазолидинон
Преобразование 27 г 3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропановой кислоты в 325 мл сухого тетрагидрофурана осуществляли путем обработки 13,7 мл пивалоилхлорида и 15,6 мл триэтиламина при -72oC. Смесь перемешивали в течение 1 часа при 0oC. К раствору 18,5 г 3-4- бензил-2-оксазолидинона в 325 мл сухого тетрагидрофурана при -72oC в атмосфере азота по каплям добавляли 75 мл 1,4 М раствора n-BuLi в гексане. Смесь перемешивали в течение 20 минут при -70oC. После добавления суспензии вышеуказанного смешанного ангидрида реакционную смесь перемешивали еще 20 минут при -70oC. Реакцию гасили путем выливания в воду и смесь экстрагировали эфиром. Объединенные органические слои промывали холодной 1 н хлористоводородной кислотой, 5% раствором бикарбоната натрия и водой. Раствор сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 47,5 г масла. После флэш-хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат (1:1, об/об) получали 28,2 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,7, гептан/этилацетат, 1:1, об/об, на двуокиси кремния.

(d) (3(2S), 4S)-3-[2-Азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил) пиперидин-4-ил]-1-оксо-пропил]-4-(фенилметил)-2-оксазолидино
К 110 мл сухого тетрагидрофурана, перемешанного при -78oC в атмосфере азота, добавляли 136 мл 0,5 М гексаметилдисилазида калия в толуоле. К полученному раствору через канюлю добавляли предварительно охлажденный при -78oC раствор 25 г (4S)-3-[3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-1-оксопропил] -4-(фенилметил)-2-оксазолилинона в 350 мл сухого тетрагидрофурана и перемешивание продолжали в течение 30 минут при -75oC в атмосфере азота. К вышеуказанному раствору енолята калия, перемешиваемому при -75oC, добавляли раствор 24 г трисилазида (лит. JCS Perkin Trans (1991), 1629) в 215 мл сухого тетрагидрофурана. Через 5 минут реакцию гасили путем добавления 17 мл уксусной кислоты. Смесь перемешивали в течение 20 минут при - 75oC и в течение 16 часов при комнатной температуре.

После флэш-хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат (7/3, об/об) и после обработки гептаном получали 19 г целевого соединения в виде твердого вещества.

ТСХ: Rf 0,6, на двуокиси кремния, дихлорметан/этилацетат, 9/1, об/об.

(е) (2S)-2-Азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил] -пропановая кислота
К раствору 19 г (3(2S), 4S)-3-[2-азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил] -1-оксо-пропил]-4-(фенилметил)-2-оксазолидинона в 600 мл тетрагидрофурана, 18 мл 30% перекиси водорода и 170 мл воды добавляли 3,7 г твердого гидроксида лития при 0oC в атмосфере азота. Смесь перемешивали в течение 30 минут при 0oC в атмосфере азота. Затем добавляли раствор 25,3 г сульфита натрия в 133 мл воды и 530 мл 5%-ного раствора бикарбоната натрия. Температуру повышали до комнатной и перемешивание продолжали в течение 30 минут. Затем растворитель удаляли в вакууме и остаток растворяли в воде и промывали этилацетатом. Водную фазу подкисляли 6 н хлористоводородной кислотой до pH 2 и экстрагировали этилацетатом. Экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме. После кристаллизации остатка из эфир/гептан получали 11,9 г кристаллического твердого вещества.

ТСХ: Rf 0,8, на двуокиси кремния, дихлорметан/метанол = 95/5, об/об.

(f) (2S)-N-Метил-N-метокси-2-азидо-3-[1-(т- бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-пропанамид
К раствору 5,7 г (2S)-2-азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил] -пропановой кислоты в 150 мл дихлорметана добавляли 2,1 г N,O-диметилгидроксиламина. HCl и 6,4 г TBTU. pH поддерживали при 8,5 с использованием триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, а затем промывали 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% бикарбонатом натрия и снова водой. Органический слой сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме с получением 7,4 г целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,6, на двуокиси кремния, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об.

(g) Метил (23)-2-азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-пропановая кислота
pH смеси (2S)-2-азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил]- пропановой кислоты (Примера 12e) и 6,94 г TBTU в 100 мл дихлорметан /метанол (9/1, об/об) поддерживали при 8,5 с использованием триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, а затем промывали 1н хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и снова водой. Органический слой сушили сульфатом натрия, фильтровали, упаривали в вакууме и получали 7,4 г целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,85, на двуокиси кремния, дихлорметан/метанол = 95/5, об/об.

(h) H-S-Ppa(Boc)-OMe
Раствор метил(2S)-2-азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)пиперидин-4-ил] -пропановой кислоты (7,4 г), 0,5 г Pd/C (10%) и 21,9 мл 1 н хлористоводородной кислоты в тетрагидрофуране (300 мл) гидрировали при атмосферном давлении. Катализатор отфильтровывали, а растворитель удаляли в вакууме и после обработки эфиром получали 6,8 г кристаллического твердого вещества.

ТСХ: Rf 0,85; этилацетат/пиридин /уксусная кислота/вода, 252/20/6/11, об/об/об/об.

(i) Cbz-S-Ppa(Boc)-ОМе
pH раствора 6,5 г H-S-Ppa(Boc)-ОМе и 5,6 г бензилоксикарбонилоксисукцинимида в 70 мл N, N-диметилформамида доводили до 8,5 с использованием триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 6 часов при комнатной температуре, выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5%-ным бикарбонатом натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 7,9 г целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,85, на двуокиси кремния, гептан/этилацетат, 1:1, об/об.

(j) Cbz-S-Ppa(Boc)-H
К раствору 7,5 г Cbz-S-Ppa(Boc)-OMe в 225 мл сухого дихлорметана при -75oC в атмосфере азота по каплям добавляли 68,1 мл 1 М раствора гидрида диизобутилалюминия в гексане, поддерживая при этом температуру ниже -70oC. Смесь перемешивали в течение одного часа при -75oC в атмосфере азота. Эту смесь выливали в раствор лимонной кислоты и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали водой, 5% раствором бикарбоната натрия и водой, а затем концентрировали в вакууме с получением 7,5 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,45, дихлорметан/метанол (95/5, об/об) на двуокиси кремния.

(k) (3S)-2-Ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-[1-т-бутилоксикарбонил(пиперидин-4-ил)]-бутанитрил
Cbz-S-Ppa(Boc)-H (7,5 г) (Примера 12 (j)) превращали в (3S)-2-ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-[1-т-бутилоксикарбонил(пиперидин-4-ил)] -бутанитрил способом, аналогичным описанному в Примере 1(n).

TCX: Rf 0,75, дихлорметан/метанол (95/5) (об/об) на двуокиси кремния.

(1) Cbz-S-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе
(3S)-2-Ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-[1-т-бутилоксикарбонил (пиперидин-4-ил)] -бутанитрил превращали в целевое соединение способом, описанным в Примере 1(o).

TCX: Rf 0,5, на двуокиси кремния, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об.

(m) H-S-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe.HCl
H-S-Ppa(Boc)[CHOHCO] -OMe.HCl получали способом гидрирования, описанным в Примере 1 (q)
(n) N-Вос-L--Амино-- капролактам
К перемешиваемому раствору L--амино--капролактама (10 г) в диоксан/вода (2: 1, об/об) (30 мл) добавляли 1 н раствор гидроксида натрия (7,8 мл), а затем ди-трет-бутил дикарбонат (18,8 г). Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате, промывали водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме. Неочищенный продукт растирали с гексаном, фильтровали и сушили в вакууме с получением N-Вос-L -- амино--капролактама (16 г).

TCX: Rf 0,85, на двуокиси кремния, этилацетат/гептан, 1/1, об/об.

(о) Boc-norLeu(цикло)-Gly-OMe
N-Boc-L--Аминo--кaпpoлaктaм (10 г) растворяли в дихлорметане (9100 мл). Затем при -20oC медленно добавляли 1М раствор бис(триметилсилил)амида в тетрагидрофуран/циклогексан (1: 1, об/об) (1 эквив.) и смесь перемешивали в течение 30 минут. После добавления метилбромацетата (4 мл) смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Для ускорения завершения реакции добавляли дополнительное количество бис(триметилсилил)амида в тетрагидрофуран/циклогексан (1/1, об/об). Смесь разбавляли дихлорметаном. Промывали 0,1 н раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5% водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: гептан/этилацетат=6:4, об/об) и получали 12 г Boc-norLeu(цикло)-Gly-OMe
ТСХ: Rf 0,55, этилацетат/гептан, 6/4, об/об на двуокиси кремния.

(р) Бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-OMe
Boc-norLeu(цикло)-Gly-OMe (3 г) растворяли в TFA/дихлорметан (1:1, об/об) (30 мл) и перемешивали в течение одного часа при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали в вакууме. Неочищенный амин растворяли в дихлорметане (25 мл) и медленно при 0oC добавляли раствор бензилсульфонилхлорида (2,25 г) в дихлорметане (10 мл). Затем добавляли триэтиламин для поддержания pH=8 на протяжении всей реакции. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, а затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате, промывали 5% раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: дихлорметан/этилацетат = 95:5, об/об) и получали бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-ОМе (3,9 г).

ТСХ: Rf 0,40, дихлорметан/этилацетат=9/1, об/об на двуокиси кремния.

(q) Бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-ОН
Раствор бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-ОМе (3,9 г) в 100 мл диоксан/вода (9:1) обрабатывали достаточным количеством 1 н гидроксида натрия для поддержания pH= 13 в течение 2 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и получали 3,6 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,60; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(r) Бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-S-Ppa[COCO]-ОН
DCCl/HOBt-связывание между бензил SO2-norLeu(цикло)-Gly-ОН и H-S-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе.HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1.

Rt (ЖХ): 27,41 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 13
1-Piq-Pro-Ppa[COCO]-ОН
N-(Cbz)-1-Piq-OH
N-(Cbz)-1-Piq-OH синтезировали способом, описанным в ЕР 0643073, в Примере 1.

ТСХ: Rf 0,85; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(a) N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OtBu
К холодному раствору (0oC) N-(Cbz)-1-Piq-OH (500 мг) в N,N-диметилформамиде (95 мл) последовательно добавляли DCCl (342 мг), НОВТ (319 мг), H-Pro-OtBu (270 мг) и триэтиламин (0,55 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при 0oC, а затем выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали до -20oC и DCU (1,3-дициклогексилмочевину) удаляли путем фильтрации. Фильтрат концентрировали в вакууме, а остаток растворяли в этилацетате. Этот раствор последовательно промывали 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия, 3%-ным водным раствором лимонной кислоты, водой и насыщенным солевым раствором. А затем сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: гептан/этилацетат, 4/1, об/об) и получали N-(Cbz)-1- Piq-Pro-OtBu (634 мг).

ТСХ: Rf 0,90; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(b) N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH
N-(Cbz)-l-Piq-Pro-OtBu (600 мг) перемешивали в смеси дихлорметана (1 мл), трифторуксусной кислоты (3 мл) и анизола (0,15 мл) в течение одного часа при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали в вакууме при низкой температуре и остаток растворяли в воде при pH = 9,5. Водную фазу промывали диэтиловым эфиром, а затем водный слой подкисляли до pH 2,5 путем добавления 2 М раствора хлористоводородной кислоты. Водный слой экстрагировали этилацетатом, а органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением N-(Cbz)-l-Piq-Pro-OH (588 мг).

ТСХ: Rf 0,54; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 60/3/1/2, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(c) 1-Piq-Pro-Ppa[COCO]-OH
DCCl/HOBt-связывание между N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH и H- Ppa(Boc)[CHOHCO] -ОМе.HCl, омыление, окисление Десс- Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1. Целевое соединение получали в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 19,8 и 20,31 мин.; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 14
H-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-ОН
Boc-D-Phe-Pro-OH получали способом, аналогичным описанному в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между Boc-D-Phe-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе.HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1 и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 16,24 и 16,90 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 15
3,3-Дифенилпропионил-Pro-Ppa[COCO]-ОН
3,3-Дифенилпропионил-Pro-OH получали способом, описанным в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между 3,3-дифенилпропионил-Pro-ОН и H-Ppa (Boc)[CHPHCO] -ОМе. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1 и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 36,60 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C за 40 минут.

Пример 16
H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
(a) Boc-D-Cha-OMe
Boc-D-Cha-ОН (20 г) растворяли в дихлорметан /метанол (9/1, об/об) (400 мл). После добавления тетрафторбората 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (22,7 г) раствор доводили до pH=8 путем добавления триэтиламина (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Смесь последовательно промывали холодным 1 н раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5%-ным бикарбонатом натрия и водой, а затем сушили сульфатом натрия. После упаривания фильтрата остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента этилацетат/гептан, 2/3. Фракции, содержащие Boc-D-Cha-OMe, объединяли и упаривали. Выход: 19,38 г.

ТСХ: Rf 0,90, силикагель, этилацетат/гептан, 3/1, об/об.

(b) Boc-(N-Me)-D-Cha-OMe
Boc-D-Cha-OMe (19,35 г) растворяли в 200 мл сухого N,N-диметилформамида в атмосфере азота. После добавления метилиодида (4,22 мл) смесь охлаждали до 0oC. Затем добавляли 2,71 г гидрида натрия (60% дисперсия в масле) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Смесь частично концентрировали, добавляли этилацетат и органический слой промывали 0,1 М хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали. Выход: 21,07 г.

ТСХ: Rf 0,55, силикагель, этилацетат/гептан, 3/7, об/об.

(с) H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH получали способом, описанным в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1. Целевое соединение выделяли в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 23,14 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 17
Н-(N-Me)-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-ОН
Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OH получали способом, описанным в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 16,26/16,90 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 18
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
Boc-D-Cha-Pro-OPac (OPac=фенациловый сложный эфир)
Boc-D-Cha-Pro-OPac получали способом, аналогичным описанному в Примере 1, с использованием Boc-D-Cha-OH и H-Pro-OPac.

ТСХ: Rf 0,5 на двуокиси кремния, дихлорметан/метанол, 95:5, об/об.

(а) ЭтилSO2-D-Cha-Рго-ОРас
Boc-D-Cha-Pro-OPac (3,8 г) растворяли в TFA/дихлорметан (1/1) (об/об) (25 мл) и перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали в вакууме. Неочищенный амин растворяли в дихлорметане (50 мл) и добавляли этансульфонилхлорид (0,8 мл) при -78oC. Затем добавляли триэтиламин для поддержания pH=8 на протяжении всей реакции. Смесь перемешивали в течение 3 часов при 0oC и добавляли 25 мл воды. После перемешивания в течение еще 30 минут при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в диэтиловом эфире, промывали 1 н раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором, после чего сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме. После растирания неочищенного вещества с метанолом получали этилSO2-D-Cha-Pro-OPac (3,0 г).

ТСХ: Rf 0,6; двуокись кремния; дихлорметан/метанол=95/5, об/об.

(b) ЭтилSO2-P-Cha-Pro-ОН
К раствору этилSO2-D-Cha-Pro-ОРас (10 г) в тетрагидрофуране (250 мл) добавляли 1 М раствор фторида тетрабутиламмония в тетрагидрофуране (84 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре и выливали в воду (1 л). Водный раствор экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои последовательно промывали 1 н раствором хлористоводородной кислоты и водой, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем кристаллизации из этилацетат/диизопропиловый эфир с получением этилSO2-D-Cha-Рrо-ОН (6,0 г).

ТСХ: Rf 0,2 на двуокиси кремния; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода=163/20/6/11, об/об/об/об.

(с) ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-D-Cha-Pro-ОН и H- Ppa(Boc)[CHOHCO] -OMe. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, с получением целевого соединения в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 35,90 мин.; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 19
N-Me-D-Cha-Azt-Ppa-(2-тиазолил)
(a) H-Azt-OBzl.HCl
N-Boc-Azt-OH (4,60 г) растворяли в дихлорметане (50 мл) и обрабатывали бензиловым спиртом (2,47 г), тетрафторборатом 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (7,40 г) и триэтиламином (6,3 мл), а затем перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли 1 н хлористоводородной кислотой, после чего органическую фазу отделяли и промывали водой, 5% бикарбонатом натрия и насыщенным солевым раствором. После фильтрации и упаривания в вакууме получали неочищенный продукт, который очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат =3/1, об/об, с получением N-Boc-Azt-OBzl (6,0 г). После удаления защитной группы Boc в 3 M растворе хлористоводородной кислоты в диоксане (60 мл) в течение 1 часа при комнатной температуре и после упаривания досуха был получен нужный продукт (5,26 г).

ТСХ: Rf 0,50; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об.

(b) Boc-(N-Me)-D-Cha-Azt-OH
1,5 г Boc-(N-Me)-D-Cha-OH (см. пример 58) и 1,5 г H-Azt-OBzl.HCl подвергали взаимодействию способами, описанными в Примере 1 для синтеза дипептидов. После реакции гидрогенолиза (см. Пример 1) бензилового сложного эфира получали 1,22 г Boc-(N- Me)-D-Cha-Azt-OH.

ТСХ: Rf 0,50; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода/ 63/20/6/11, об/об/об/об.

(с) N-Me-D-Cha-Azt-Ppa-(2-тиазолил)
После реакции связывания Boc-(N-Me)-D-Cha-Azt-OH (370 мг) с H-Ppa(Теос)-(2-тиазолил) TsOH (610 мг), как описано в Примере 48, и после очистки на силикагеле в дихлорметан/метанол (95:5, об/об) получали Boc-(N-Me)-D-Cha-Azt-Рра(Teoc)-(2-тиазолил) (684 мг). После удаления защитных групп (см. Пример 48) и после ВЭЖХ-очистки были получены два отдельных диастереомера.

Выход: 76 мг; Rt (ЖХ): 26,9 мин.; 20%А/80%В - 20%А/20%В и 60%C в течение 40 минут.

Выход: 76 мг; Rt (ЖХ): 30,3 мин.; 20%А/80%В - 20%А/20%В и 60%C в течение 40 минут.

Пример 20
H-D-Hpl-Pro-Ppa[COCO]-ОН
(a) H-D-Hpl-OMe
H-D-Cha-OH (1,0 г) растворяли в смеси 1 н хлористоводородной кислоты (4,8 мл), воды (19,4 мл) и уксусной кислоты (9,7 мл). При 0oC медленно добавляли раствор нитрита натрия (3,4 г) в воде (5,8 мл) и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После этого добавляли 4,8 мл 37% хлористоводородной кислоты и смесь перемешивали в течение 15 минут при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали, а остаток растворяли в эфир/ацетон. После фильтрации раствор концентрировали в вакууме и неочищенный продукт перемешивали в метаноле (25 мл) в течение 18 часов. pH был равен 1,5. Реакционную смесь упаривали досуха, а остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: толуол/метанол=97/3, об/об) с получением H-D-Hpl-OMe (612 мг).

ТСХ: Rf 0,9; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода = 163/20/6/11, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(b) THP-D-Hpl-OMe (THP=тетрагидропиран)
К перемешиваемому раствору H-D-Hpl-OMe (450 мг) в дихлорметане (2 мл) последовательно добавляли 3,4-дигидро-2Н-пиран (0,29 мл) и п-толуолсульфонат пиридиния (60 мг). Смесь перемешивали в течение б часов при комнатной температуре и разбавляли эфиром. Эту смесь промывали насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на двуокиси кремния (элюент: этилацетат/гептан, 1:4, об/об) с получением TPH-D-Hpl-OMe (498 мг).

ТСХ: Rf 0,64; этилацетат/гептан=1:2, об/об, на двуокиси кремния.

(с) THP-D-Hpl-OH
Раствор THP-D-Hpl-OMe (10,3 г) в диоксан/вода (9/1, об/об) (200 мл) при комнатной температуре обрабатывали достаточным количеством 1 н гидроксида натрия для поддержания pH=12 в течение 18 часов. После подкисления смесь выливали в воду (500 мл) и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и получали 6,6 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,78; двуокись кремния; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода = 163/20/6/11, об/об/об/об.

(d) THP-D-Hpl-Pro-OH
К раствору THP-D-Hpl-OH (5,87 г) в ацетонитриле (75 мл) последовательно добавляли EDCl (гидрохлорид 1-(3-диметил-аминопропил)-3-карбодиимида (4,84 г) и N-гидроксисукцинимид (2,9 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Смесь концентрировали в вакууме, а остаток растворяли в этилацетате. Этот раствор промывали водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в N,N-диметилформамиде (100 мл) и добавляли к раствору гидрохлорида пролина (6,99 г) в N,N-диметилформамид/вода, 1/1, об/об (200 мл), который был доведен до pH=8,5 путем добавления гидроксида натрия. После перемешивания в течение ночи реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в воде. Этот водный раствор доводили до pH=2,5 при 0oC, а затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои последовательно промывали водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: этилацетат/метанол=8/2 ---> 6/4, об/об) и получали THP-D-Hpl-Pro-OH (6,75 г)
TCX: Rf 0,52; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 163/20/6/11, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(е) H-D-Hpl-Pro-Ppa[COCO]-OH
DCCl/HOBt-связывание между THp-D-Hpl-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 31,05 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 21
3,3-Дифенилпропионил-Pro-Ppa[COCO]-ОМе
3,3-Дифенилпропионил-Pro-ОН получали способами, описанными в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между 3,3-дифенилпропионил-Pro-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO] -ОМе. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 21,7 мин.; 20%А/60%В/ 20%С - 20%А/80%C в течение 30 минут.

Пример 22
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-ОН описан в Примере 18. DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-D-Cha-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe.HCl, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 39,06 мин; 20%А/80%В -20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 23
HOOC-CH2-Cha-Pro-Ppa [COCO]-ОН
N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH описан в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OМe.HCl, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 25,75 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 24
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-OEt
ЭтилSO2-O-Cha-Pro-OH получали способами, описанными в Примере 18.

(a) Cbz-Ppa[CHOHCO]-OEt
Раствор Cbz-Ppa(Boc)[CHOHCO] -ОМе (1 г) в 50 мл 3 M хлористый водород/этанол при -20oC перемешивали в течение 4 часов, повышая при этом температуру до комнатной. Смесь упаривали в вакууме и получали 0,9 г целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,85; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(b) Cbz-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OEt
pH раствора 0,9 г Cbz-Ppa[CHOHCO]-OEt и 0,55 г ди-т-бутилдикарбоната в 10 мл N,N-диметилформамида доводили до pH 8,5 путем добавления триэтиламина. Полученную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали 1 М хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и водой, а затем сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 0,99 г целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,60; силикагель; гептан/этилацетат (1/1, об/об).

с) ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-OEt
Cbz-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OEt гидрировали способом, описанным в Примере 2(q) и получали H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OEt.HCl.

DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-O-Cha-Pro-OH и H-Ppa (Boc)[CHOHCO] -OEt. HCl, омыление, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, в результате чего получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 41,58 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 25
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-OEt
N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-ОН описан в Примере 1. DCCl/HOBt-связывание между N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Рго-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OEt.HCl, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 28,20 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 26
ЭтилSO2-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-OEt
ЭтилSO2-D-Phe-Pro-ОН получали способами, описанными в Примере 18. DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-D-Phe-Pro-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OEt. HCl, окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 34,89 мин.; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 27
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa(Eoc)[COCO]-OEt
(Eoc=этоксикарбонил)
(a) ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[CHOHCO]-OEt
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) [CHOHCO]-OEt получали способом, описанным в Примере 24. Сложный гидроксиэтиловый эфир (200 мг) обрабатывали трифторуксусная кислота /дихлорметан (1/1) в течение 1 часа при комнатной температуре с получением 210 мг целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,85; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об.

(b) ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa(Eoc)[CHOHCO]-OEt
pH раствора 210 мг этилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[CHOHCO]-ОEt и 43,6 мкл этилхлорформиата в 10 мл N,N-диметилформамида доводили до pH 8,5 путем добавления триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали 1 М хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 220 мг целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,50; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 463/20/6/11, об/об/об/об.

(с) ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa(Eoc)[COCO]-OEt
Окисление Десса-Мартина и очистку проводили способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 13,95 мин; 70%В/30%С - 30%В/70%C в течение 40 минут.

Пример 28
ЭтилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-S-Ppa-(2-тиазолил)
(а) ЭтилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-ОН
Boc-D-Cha-OH (2,65 г) подвергали взаимодействию с N-циклопентил-Gly-OMe. HCl (См. Пример 2), как описано в методе дипептидного синтеза в Примере 1, и после очистки на силикагеле получали N-Boc-D-Cha-N-циклопентил-Gly-OMe (3,5 г). После удаления защитной группы Boc в TFA/дихлорметан (1/1, об/об) (38 мл) и после реакции этилсульфонирования, как описано в Примере 18, был получен этилSO2-D-Cha-N-циклопентил-
Gly-OMe (1,4 г). Гидролиз сложного метилового эфира осуществляли способами, описанными в Примере 2, и получали этилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-ОН.

ТСХ: Rf 0,2; силикагель; дихлорметан/метанол=9/1, об/об.

(b) (2S)-2-Азидо-3-(пиперидин-4-ил)-пропановая кислота
Раствор 3,7 г (2S)-2-азидо-3-[1-(т-бутилоксикарбонил)-пиперидин-4-ил]-пропановой кислоты (Примера 12(е)) обрабатывали 30 мл 3 M хлористого водорода в этилацетате. Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, упаривали в вакууме и получали 3,0 г кристаллического твердого вещества.

ТСХ: Rf 0,35 на двуокиси кремния; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода = 63/20/6/11, об/об/об/об.

(с) (2S)-2-Азидо-3-[1-[(2-триметилсилил) этоксикарбонил]пиперидин-4-ил] -пропановая кислота
pH смеси 3,0 г (2S)-2-азидо-3-(пиперидин-4-ил)-пропановой кислоты и 1-[2-(триметилсилил) этоксикарбонилокси] пирролидин-2,5-диона (TeocOSu, ссылка: Synthesis 1987, 346) доводили до 8,5 с использованием триэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали 1 н хлористоводородной кислотой, 5% бикарбонатом натрия и водой, а затем сушили сульфатом натрия. В результате упаривания в вакууме получали 4,93 г нужного соединения в виде масла.

TCX: Rf 0,85, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об, на двуокиси кремния.

(d) (2S)-N-Meтил-N-мeтoкcи-2-aзидo-3-[1-[(2-триметилсилил)этоксикарбонил]пиперидин-4-ил]-пропанамид
(2S)-N-Метил-N-метокси-2-азидо-3-[1-[(2-триметилсилил)- этоксикарбонил] пиперидин-4-ил] -пропанамид получали способом, описанным в Примере 12(f), с использованием (2S)-2-Азидо-3-[1-[(2-триметилсилил) этоксикарбонил] пиперидин-4-ил]-пропановой кислоты.

TCX: Rf 0,85: силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(е) H-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe
Водород пропускали через смесь 4,9 г (2S)-N-Метил-N-метокси-2-азидо-3-[1-[(2-триметилсилил)этоксикарбонил] -пиперидин-4-ил] -пропанамида и 0,5 г Pd/C (10%) в 100 мл тетрагидрофурана и 13,3 мл 1 н хлористоводородной кислоты до тех пор, пока весь исходный продукт не был израсходован. Катализатор отфильтровали и растворитель удаляли в вакууме с получением 5,7 г нужного соединения.

TCX: Rf 0,9, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода = 63/20/6/11, (об/об/об/об) на двуокиси кремния.

(f) Boc-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe
pH раствора 4,7 г H-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe и 2,8 г ди-т-бутилдикарбоната доводили до pH = 8,5 с использованием триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5%-ным бикарбонатом натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 5,2 г целевого соединения в виде масла.

ТСХ: Rf 0,85, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода = 63/20/6/11, (об/об/об/об) на двуокиси кремния.

Хиральная ВЭЖХ на колонке Chiralpack Chir 11 250х4,6 в гексан/этанол (9/1, об/об) давала 91%-ный энантиомерный избыток.

(g) Вос-3-Рра(Teoc)-(2-тиазолил)
К раствору 31,7 мл 1,05 М n-BuLi в эфире при -78oC в атмосфере азота добавляли 5,46 мл 2-бромтиазола. Полученный предварительно охлажденный желтый раствор (2,5 экв.) через канюлю добавляли к раствору Boc-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe в 46 мл сухого тетрагидрофурана при -78oC в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при -78oC в атмосфере азота, выливали в 5% бикарбонат натрия и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 5,0 г маслянистого остатка. После флэш-хроматографии в гептан/этилацетат (7/3, об/об) на двуокиси кремния было получено 1,7 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,75, гептан/этилацетат, 7/3, об/об, на двуокиси кремния.

[]D = +31,9o (с=0,45 в CHCl3)
(h) Н-3-Рра(Teoc)-(2-тиазолил).TsOH
К раствору 1,54 г Вос-3-Рра(Teoc)-(2-тиазолила) в 14,2 мл сухого эфира добавляли раствор 0,96 г моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты в 2,8 мл сухого этанола. Раствор выдерживали в течение 1 часа при 30oC и эфир удаляли. Полученное твердое вещество промывали сухим эфиром и получали 1,5 г целевого соединения в виде твердого вещества.

ТСХ: Rf 0,85, дихлорметан/метанол =9:1, об/об.

(i) ЭтилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-3-Ppa-(2-тиазолил)
Связывание этилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-ОН (395 мг) с H-S-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил). TsOH осуществляли методами, описанными в Примере 48, и получали 400 мг полностью защищенного трипептида. Группу Teoc удаляли (см. Пример 48) и получали 300 мг неочищенного этилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-S-Ppa-(2-тиазолила). TFA. Эту соль (150 мг) очищали с помощью ВЭЖХ и получали 112 мг целевого соединения.

Rt (ЖХ): 32,06 мин; 20%А, 60%В и 20%С - 100%C в течение 40 минут.

Пример 29
ЭтилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-S-Ppa(Eoc)-(2-тиазолил)
ЭтилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-S-Ppa-(2-тиазолил). TFA (150 мг) (Пример 28) растворяли в N,N-диметилформамиде (10 мл), обрабатывали этилхлорформиатом (38 мкл) при pH около 8,5 (с использованием триэтиламина). А затем перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл), а затем промывали 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% бикарбонатом натрия и снова водой. Органическую фазу сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали досуха с получением этилSO2-D-Cha-N-циклопентил-Gly-S-Ppa(Eoc)-(2-тиазолила).

TCX: Rf 0,45; двуокись кремния; дихлорметан/метанол, 9/1, об/об.

Пример 30
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-NH2
(а) N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OH
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-OH описан в Примере 1.

DCCl/HOBt-связывание между N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO] -ОМе. HCl и омыление осуществляли способом, описанным в Примере 1.

TCX: Rf 0,80: силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(b) N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro- Ppa (Boc)[CHOHCO]-NH2
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OH растворяли в N, N-диметилформамиде (12 мл). Раствор охлаждали в бане из льда и воды. А затем добавляли 91,3 мг HOBT, 91,3 мкл N-метилморфолина, 50,5 мг хлорида аммония и 102 мг EDCl. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Смесь выливали в 1 М хлористоводородную кислоту и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали водой, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и водой, а затем сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме с получением 400 мг целевого соединения.

TCX: Rf 0,25: силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(с) HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-NH2
Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку проводили способом, описанным в Примере 1. Выход: 94,2 мг целевого соединения в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 22,97 мин;20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 31
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-NHMe
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO] -NHMe получали способом, описанным в Примере 30, с использованием метиламина. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку проводили способом, описанным в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 24,22 и 24,99 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 32
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-(1-азетидин)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO]-(1-азетидин) получали способом, описанным в Примере 30, с использованием гидрохлорида азетидина. Окисление Десс-Мартина, снятие зашиты и очистку осуществляли способом, описанным в Примере 1, и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 28,05 и 28,34 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 33
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-(NH-(CH2)2-фенил:
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO] -(NH-(CH2)2-фенил) получали способом, описанным в Примере 30, с использованием 2-(фенил)этиламина. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способом, описанным в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 38,82 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 34
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-(NH-CH2фенил)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)[CHOHCO] -(NH-CH2фенил) получали способом, описанным в Примере 30, с использованием 2-(фенил)этиламина. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способом, описанным в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 36,46 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 4 0 минут.

Пример 35
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-NH2
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-ОН описан в Примере 18. DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-D-Cha-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO] -OMe. HCl, омыление и реакцию взаимодействия EDCl с хлоридом аммония осуществляли способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали смесь диастереомеров.

Rt (ЖХ): 36,70 мин; 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 36
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-(NH-СН2фенил)
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-OH получали, как описано в Примере 18. DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-D-Cha-Pro-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе.HCl, омыление и реакцию взаимодействия EDCl с бензиламином осуществляли способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, с получением целевого соединения в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 28,76 и 29,1 мин, 20%А/60%B/20%С - 20%А/80%С в течение 30 минут.

Пример 37
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-NМe2
ЭтилSO2-D-Cha-Pro-OH получали, как описано в Примере 18. DCCl/HOBt-связывание между этилSO2-D-Cha-Pro-ОН и H- Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе.HCl, омыление и реакцию взаимодействия EDCl с диметиламином осуществляли способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде двух диастереомеров.

А: Rt (ЖХ): 41,96 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

В: Rt (ЖХ): 43,49 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 38
ЭтилSO2-D-Phe-Pro-PPa(COCO]-NH2
ЭтилSO2-D-Phe-Pro-ОН получали способами, аналогичными описанным в Примере 18. DCCl/HOBt-связывание между этилSO2- D-Phe-Pro-OH и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-ОМе.HCl, омыление и реакцию взаимодействия EDCl с хлоридом аммония проводили способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку проводили способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 28,81 и 29,25 мин, 20%А/80%В -20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 39
HOOC-CH2-п-Cl-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-NH2
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-Pro-OH получали, как описано в Примере 5. DCCl/HOBt-связывание между N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-п-Cl-D-Phe-Pro-ОН и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe.HCl, омыление и реакцию взаимодействия EDCl и хлорида аммония проводили способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку осуществляли способами, описанными в Примере 1, и получали целевое соединение в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 23,35 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 40
HOOC-CH2-п-Cl-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-(NH-CH2фенил)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-Pro-OH получали, как описано в Примере 5. DCCl/HOBt-связывание между N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-п-Cl-D-Phe-Pro-ОН и H- Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe.HCl, омыление и реакцию взаимодействия EDCl с бензиламином проводили способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку проводили способами, описанными в Примере 1, и получали два диастереомера.

A: Rt (ЖХ): 19,29 мин, 20%А/60%В/20%С - 20%А/80%С в течение 30 минут.

В: Rt (ЖХ): 37,61 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 41
[1-Оксо-2-[3-(фенилметилсульфониламино)-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил] этил] -Ppa[COCO]-(NH-CH2фенил)
(а) [3-(Фенилметилсульфониламино)-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил]-уксусная кислота
(3-Амино-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил)-уксусной кислоты этиловый эфир описан в J. Med. Chem. , 1996, 37, 3090-3099. Последующую реакцию сульфонилирования и омыления проводили способом, описанным в Примере 12.

ТСХ: Rf 0,4, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота /вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(b) БензилSO2-3-NH2-1-карбоксиметилпиридин-2-он-Рра[COCO]-(NH-CH2фенил)
Связывание между бензилSO2-3-NH2-1-карбоксиметилпиридин-2-оном и H-Ppa(Boc)[CHOHCO]-OMe.HCl (см. Пример 1), омыление, амидное связывание, окисление Десс-Мартина, деблокирование и очистку проводили способами, описанными в Примере 34, и получали два диастереомера А и В.

A: Rt (ЖХ): 21,6 мин, 20%А/60%В и 20%С - 100%С в течение 40 минут.

В: Rt (ЖХ): 22,8 мин, 20%А/60%В и 20%С - 100%С в течение 40 минут.

Пример 42
БензилSO2-norLeu(цикло)Gly-S-Ppa[COCO]- (NH-CH2фенил)
БензилSO2-norLeu(цикло)Gly-OH получали способами, аналогичными описанным в Примере 12. DCCl/HOBt-связывание между бензилSO2-norLey(цикло)Gly-ОН и H-S-Ppa(Boc)(CHOHCO] -OMe. HCl (Пример 12(m)), омыление и реакцию взаимодействия EDCl с бензиламином проводили способами, описанными в Примере 30. Окисление Десс-Мартина, снятие защиты и очистку проводили способами, описанными в Примере 1.

Rt (ЖХ): 23,46 мин, 20%А/60%В/20%С - 20%А/80%С в течение 30 минут.

Пример 43
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-бензотиазолил)
(a) Boc-Ppa(Cbz)-OMe
Boc-Ppa(Cbz)-OMe получали из Boc-Ppa(Cbz)-OH (примера 45) способом, аналогичным описанному в Примере (m).

(b) Boc-Ppa(Cbz)-(2-бензотиазолил)
К холодному (-30oC) и перемешанному раствору n-BuLi в гексане (3,9 мл, 1,3 М) по каплям добавляли раствор бензотиазола (675 мг) в тетрагидрофуране (25 мл). Раствор перемешивали в течение 15 минут при -30oC, а затем медленно добавляли к раствору Boc-Ppa(Cbz)-OMe (1,0 г) в сухом тетрагидрофуране (25 мл) при - 40oC. Эту смесь перемешивали в течение 2 часов при -20oC, а затем добавляли 5%-ный водный раствор бикарбоната натрия. Смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и слои отделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали с получением 1,83 г масла. Остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: гептан/этилацетат= 1:2, об/об) и получали целевое соединение (230 мг).

ТСХ: Rf 0,35, силикагель; гептан/этилацетат=1/2, об/об.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил) (Boc)-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-бензотиазолил)
Деблокирование Boc-Ppa(Cbz)-(2-бензотиазола) и связывание с N-(т-бутилоксикарбонилметил)(Boc)-D-Cha-Pro-OH осуществляли способом, описанным в Примере 45. После очистки посредством хроматографии на силикагеле с использованием градиентного элюирования гептан/этилацетат (1/1, об/об) ---> гептан/этилацетат (1/2, об/об) получали 200 мг целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,5, силикагель; гептан/этилацетат=1/2, об/об.

(d) HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-бензотиазолил)
К смеси 6 мл трифторуксусной кислоты и 0,6 мл тиоанизола добавляли при комнатной температуре 0,45 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)(Boc)-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-бензотиазолила). Через 4 часа реакционную смесь концентрировали, а остаток растворяли в воде. Водную фазу промывали диэтиловым эфиром и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на препаративной ВЭЖХ-колонке C18, 15 мкм, Deltapack, 100A с использованием системы градиентного элюирования 20% А/80% В - 20% А/35% В/45% С в течение 45 минут при скорости потока 50 мл/мин и получали целевое соединение в виде двух диастереомеров.

Выход: 197 мг, Rt (ЖХ): 38,70 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Выход: 151 мг, Rt (ЖХ): 41,75 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 44
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-оксазолил)
(а) 1-[[2-(Триметилсилил)этокси] карбонил] -4-[2-(т-бутилоксикарбониламино)-3-гидрокси-3-(оксазол-2-ил)пропил]пиперидин
К раствору 3,03 г Boc-Ppa(Teoc)N(Me)OMe (примера 48) в 50 мл дихлорметана при -78oC в атмосфере азота добавляли 20 мл 1 М раствора гидрида диизобутилалюминия в гексане. Через один час охлаждающую баню удаляли, а затем сразу добавляли 100 мл 0,25 М хлористоводородной кислоты и дополнительное количество дихлорметана и через 5 минут полученную суспензию фильтровали. К фильтрату добавляли насыщенный солевой раствор, после чего органический слой отделяли, сушили (сульфатом натрия) и концентрировали с получением 2,36 г Boc- Ppa(Teoc)-H в виде масла. Этот альдегид (2,36 г) и 1,86 г 2-(триметилсилил) оксазола (Edwards, P. D., Wolanin, D.J., Andisik D.W. and Davis W., J.Med.Chem., 38, 76 (1995)) смешивали и нагревали при 50oC в течение 3 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и через три дня эту реакционную смесь концентрировали. Остаток растворяли в 10 мл тетрагидрофурана и 1 мл 1 н хлористоводородной кислоты. После выдерживания в течение 1 часа при комнатной температуре к раствору добавляли этилацетат и насыщенный солевой раствор, а органический слой отделяли. Водный слой три раза экстрагировали этилацетатом, а объединенные органические слои сушили (сульфтом натрия) и концентрировали. Реакция гидролиза не была завершена, и остаток снова растворяли в 10 мл тетрагидрофурана и 1 мл 1 н хлористоводородной кислоты. После выдерживания в течение 1 часа при комнатной температуре добавляли этилацетат и насыщенный солевой раствор, а затем органический слой отделяли. Водный слой три раза экстрагировали этилацетатом и объединенные органические слои сушили (сульфатом натрия) и концентрировали. После очистки с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/гептан, 3/2, об/об) получали 0,70 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,2, силикагель; этилацетат/гептан, 1/1, об/об.

(b) Boc-Ppa(Теос)-(2-оксазолил)
К раствору 0,70 г 1-[[2-(триметилсилил)этокси]карбонил]-4-[2-(т-бутилоксикарбониламино)-3-гидрокси-3-(оксазол-2-ил)пропил] пиперидина в 10 мл дихлорметана добавляли 0,6 г реактива Десс-Мартина. После перемешивания в течение одного часа при комнатной температуре добавляли 50 мл 5%-ного водного раствора тиосульфата натрия и смесь перемешивали в течение 45 минут при комнатной температуре. Органический слой отделяли, промывали водой, 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали. После очистки с помощью хроматографии на силикагеле (элюент: гептан/этилацетат=3/2, об/об) получали 455 мг целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,5, силикагель; гептан/этилацетат = 1/1, об/об.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Рра(Teoc)-(2-оксазолил)
К раствору 477 мг Boc-Ppa(Teoc)-(2-оксазолила) в 12 мл диэтилового эфира и 2 мл этанола добавляли 213 мг моногидрата пара-толуолсульфоновой кислоты и эфир удаляли при пониженном давлении при 30oC. Маслянистый остаток нагревали при 60oC в течение 20 минут, а затем этанол удаляли при пониженном давлении и остаток сушили в вакууме с получением 0,5 г H-Ppa(Teoc)-(2-оксазолил). TsOH. К раствору 0,29 г N-(бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-ОН (описанного в Примере 1) в 10 мл N,N-диметилформамида в атмосфере азота при -20oC добавляли 0,078 мл изобутилхлорформиата и 0,208 мл N,N-диизопропилэтиламина. Через 30 минут добавляли раствор 0,25 г H-Ppa(Teoc)-(2-оксазолил). TsOH в N,N-диметилформамиде и 0,050 мл N,N-диизопропилэтиламина и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры. Через два часа реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате, промывали 5%-ным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. А затем сушили (сульфатом натрия) и концентрировали. После очистки с помощью хроматографии на силикагеле с использованием градиентного элюирования гептан/этилацетат (1/1, об/об) ---> гептан/этилацетат (1/2, об/об) получали 200 мг целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,5, силикагель; гептан/этилацетат = 1:2, об/об.

(d) HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-оксазолил)
К раствору 0,20 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)(Boc)-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-оксазолил) в 2 мл дихлорметана добавляли 2 мл трифторуксусной кислоты и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 4 часа реакционную смесь концентрировали и очищали на препаративной ВЭЖХ-колонке с C18 15 мкм 100A Deltapack с использованием системы градиентного элюирования 20% А/80%В/0%С - 20% А/51%В/29%С в течение 45 минут при скорости потока 20 мл/мин, с получением целевого соединения в виде двух диастереомеров.

Выход: 49 мг. Rt (ЖХ): 27,83 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Выход: 46 мг. Rt (ЖХ): 30,04 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 45
HOOC-СН2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
(a) Boc-Ppa(Cbz)-OH
pH раствора 70 г H-Ppa-OH, 39,85 г пентагидрата сульфата меди (II) и 147 г бензилоксикарбонилоксисукцинимида доводили до 9 с использованием 2 н гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Осадок собирали и тщательно промывали водой. Осадок на фильтре растворяли в диоксане, а pH доводили до 12,5 с использованием 4 н гидроксида натрия, после чего добавляли 129 г ди-трет-бутилдикарбоната. Смесь перемешивали в течение 16 часов. Осадок собирали и промывали диоксаном. Фильтрат концентрировали до небольшого объема, а pH доводили до 2,5. Остаток разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха с получением 100 г масла.

ТСХ: Rf 0,77, дихлорметан/метанол (9/1, об/об) на силикагеле.

(b) Boc-Ppa(Cbz)-N(Me)(OMe)
К раствору 22,5 г Boc-Ppa(Cbz)-OH в 500 мл дихлорметана добавляли 7,54 г гидрохлорида N, O-диметилгидроксиламина и 24,75 г TBTU. pH доводили до 8,5 путем добавления триэтиламина. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем промывали 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и снова водой, после чего сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме, в результате чего получали 15,4 г белого твердого продукта после кристаллизации из диизопропилового эфира.

TCX: Rf 0,5, дихлорметан/этилацетат = 8/2, об/об, на двуокиси кремния.

(с) Boc-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил)
К холодному (-78oC) перемешанному раствору n-BuLi (0,11 моль) в диэтиловом эфире (100 мл) по каплям добавляли раствор 2-бромтиазола (18,2 г, 0,11 моль) в диэтиловом эфире (100 мл). После перемешивания раствора при -78oC в течение 30 минут к нему медленно добавляли раствор Boc-Ppa(Cbz)-N(Me) (OМe) (15 г, 0,035 моль) в сухом тетрагидрофуране (300 мл). Смесь перемешивали при -78oC в течение одного часа, а затем добавляли 5%-ный водный раствор бикарбоната натрия. Смесь нагревали до комнатной температуры и слои разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали с получением 15,1 г масла. Остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: дихлорметан/метанол, 99/1, об/об) и получали 3,2 г целевого соединения.

TCX: Rf 0,45, силикагель, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об.

(d) H-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил).TFA
N-Boc-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил) (500 мг) растворяли в 10 мл трифторуксусная кислота/дихлорметан (1:1, об/об) и перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Неочищенный амин выделяли в виде масла с количественным выходом после удаления растворителя путем выпаривания и использовали непосредственно для получения N-(т- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-тиазолила).

ТСХ: Rf 0,4, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(е) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил)
Изобутилхлорформиат (130 мкл) добавляли к перемешанному раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Рrо-ОН (490 мг) и N,N-диизопропилэтиламина (170 мкл) в сухом N,N-диметилформамиде (12 мл) при -15oC в атмосфере азота. Через 15 минут к холодному раствору смешанного ангидрида по каплям добавляли H-Ppa (Cbz)-(2-тиазолил).TFA, растворенный в сухом N,N-диметилформамиде (10 мл), поддерживая при этом pH=8,5 путем добавления N,N-диизопропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 60 минут при -15oC. Реакционную смесь упаривали досуха. Остаток растворяли в этилацетате, последовательно промывали 2%-ным водным раствором лимонной кислоты, водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремния (элюент: дихлорметан/метанол, 99/1, об/об) с получением 470 мг N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Cbz)-(2-тиазолила).

ТСХ: Rf 0,65, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5, об/об.

(f) HOOC-CH2-D-Cha-Рrо-Ppa-(2-тиазолил)
Раствор 470 мг N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-тиазолила) в 5 мл трифторуксусной кислоты и 0,5 мл тиоанизола перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, а остаток очищали на препаративной ОФ-ВЭЖХ-колонке с С 18 Delta-Pak с использованием системы градиентного элюирования А: 20%, В: 70%, С: 10% - А: 20%, В: 20%, С: 60% в течение 40 минут при скорости потока 80 мл/мин.

(А: 0,5 М фосфатный буфер, pH=2,1; B: вода; С: ацетонитрил:вода, 3:2, об/об).

Выход: 177 мг. Rf (ЖХ): 33,57 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 46
HOOC-CH2-п-MeO-D-Рhe-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Синтез N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-MeO-D-Phe-Pro-OH описан в Примере 6. Реакцию взаимодействия с H-Ppa(Cbz)-(2-тиазолилом) (135 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Пример 45, и получали два отдельных диастереомера.

Выход: 37 мг. Rt: 27,17 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 47 мг. Rt: 30,15 мин, 20%А/80%В/0% С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 47
HOOC-CH2-п-Cl-D-Phe-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Синтез N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-п-Cl-D-Phe-Pro-ОН описан в Примере 5. Реакцию взаимодействия с H-Ppa(Cbz)- (2-тиазолилом) (322 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Пример 45, и получали два отдельных диастереомера.

Выход: 73 мг. Rt: 31,07 мин, 20%А/60%В/20%С - 20%А/0%В/80%C в течение 30 минут.

Выход: 94 мг. Rt: 18,21 мин, 20%А/80%В/20%С - 20%А/0%В/80%C в течение 30 минут.

Пример 48
HOOC-CH2-D-Nle-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Синтез N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Nie-Pro-OH описан в Примере 8.

(a) Boc-Ppa-N(Me)OMe
К раствору Boc-Ppa(Cbz)-N(Me)OMe (Пример 45b) (820 мг) в N,N-диметилформамиде (25 мл) добавляли 2 н хлористоводородную кислоту (0,915 мл) и 10% палладия-на-угле (100 мг), а затем смесь гидрировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали через диацел, промывали N, N-диметилформамидом и нейтрализовали триэтиламином (0,15 мл). Продукт был использован неочищенным в синтезе Boc-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe.

(b) Boc-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe
К неочищенному раствору Boc-Ppa-N(Me)OMe последовательно добавляли 1-[2-(триметилсилил)этоксикарбонилокси] пирролидин-2,5-дион (TeocOSu, ссылка: Synthesis 1987, 346) (567 мг) и триэтиламин (0,350 мл), а затем смесь перемешивали в течение 4,5 часа при комнатной температуре в атмосфере азота. Раствор поддерживали при pH= 8 с использованием триэтиламина. Растворитель удаляли путем выпаривания при пониженном давлении, а затем добавляли дихлорметан и раствор промывали 0,1 н хлористоводородной кислотой (100 мл), водой, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и водой, после чего сушили сульфатом магния и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат, 8/2, об/об. Выход: 784 мг.

ТСХ: Rf 0,37, силикагель, гептан/этилацетат=1/1, об/об.

(с) Boc-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил)
К холодному (-70oC) раствору н-бутиллития в диэтиловом эфире (68,4 мл, 1,07 моль/л) в атмосфере азота медленно добавляли раствор 2-бромтиазола (6,59 мл) в диэтиловом эфире (50 мл) и смесь перемешивали в течение 30 минут при -70oC. Этот раствор тиазолида лития очень медленно добавляли к холодному (-70oC) раствору Boc-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe (16,8 г) в сухом тетрагидрофуране (150 мл), а затем перемешивали в течение 1 часа при -70oC в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли 0,2 н хлористоводородной кислотой (200 мл), экстрагировали три раза дихлорметаном, а органические слои промывали водой, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и снова водой, после чего сушили сульфатом магния и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат, 8/2, об/об. Выход: 11,35 г.

ТСХ: Rf 0,68, силикагель, гептан/этилацетат=1:1, об/об.

(d) H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил).TsOH
К раствору Boc-Ppa(Teoc)-(2-тиазолила) (2,5 г) в диэтиловом эфире (100 мл) добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (1,2 г). Реакционную смесь медленно упаривали при 30oC при 200 мбар и в течение 1,5 часа при 15 мбар. Выход: 3,03 г.

(е) HOOC-CHz-D-Nle-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Связывание N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Nle-Pro-ОН с H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил).TsOH (307 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Примере 45, и получали два отдельных диастереомера.

Выход: 96 мг. Rt: 23,45 мин, 20%А/80%В/0% С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 99,6 мг. Rt: 26,60 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 49
HOOC-CH2-м-Cl-D,L-Phe-Pro-Рра-(2-тиазолил)
Синтез N-(т-Бутилоксикрабонилметил)-N-BOC-м-Cl-D, L-Phe-Pro-OH описан в Пример 4. Связывание с H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил).TsOH (325 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Примере 48, и получали четыре отдельных диастереомера.

Выход: 80 мг. Rt: 28,68 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 40 мг. Rt: 31,02 мин, 20/А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 72 мг. Rt: 32,62 мин, 20%А/80%В/60% C - 20%А/20%В/60% C в течение 40 минут.

Выход: 52 мг. Rt: 34,22 мин, 20%A/80%B,/ 0% С - 20%А/20%В/60% C в течение 40 минут.

Пример 50
HOOC-CH2-D-Dpa-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
(a) Boc-D-Dpa-Pro-OBzl
Boc-D-Dpa-Pro-OBzl получали в результате реакции Boc-D-Dpa-OH (4,77 г) с H-Pro-OBzl (3,8 г) в соответствии с условиями реакции взаимодействия, описанной в Примере 1. Выход: 8,4 г.

ТСХ: Rf 0,95, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 560/31/18/7, об/об/об/об.

(b) Boc-D-Dpa-Pro-OH
Boc-D-Dpa-Pro-OH получали путем реакции каталитического гидрирования Boc-D-Dpa-Pro-OBzl (7 г) способом, описанным в Примере 1. Выход: 5,5 г.

ТСХ: Rf 0,59, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 520/31/18/7, об/об/об/об.

(с) Boc-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил)
Реакцию взаимодействия Boc-D-Dpa-Pro-OH (500 мг) с H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил). TsOH (573 мг) проводили способом, описанным в Примере 48. Выход: 712 мг.

ТСХ: Rf 0,44; силикагель, гептан/этилацетат=4:6, об/об.

(d) N-(т-бутилоксикарбонилметил)-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил
Boc-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил) (712 мг) обрабатывали пара-толуолсульфоновой кислотой способом, описанным в Примере 48 и получали H-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил) (761 мг). N-(т-бутилоксикарбонилметил)-D-Dpa-Pro- Ppa(Teoc)-(2-тиазолил) получали путем реакции алкилирования H-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолила) (761 мг) с трет-бутилбромацетатом (0,138 мл) способом, описанным в Примере 1. Выход: 674 мг.

ТСХ: Rf 0,54; силикагель, гептан/этилацетат=3:7, об/об.

(е) HOOC-CH2-D-Dpa-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Последующее снятие защиты и очистку проводили способом, описанным в Примере 48, и получали два отдельных диастереомера.

Выход: 64 мг. Rt: 35,16 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 96 мг. Rt: 36,80 мин, 20%А/80%В/0%C - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 51
HOOC-CH2-D-Cha-Ohi-Ppa-(2-тиазолил)
(а) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Воc-D-Cha-ОН
N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH получали способом, описанным в Примере 45.

(b) H-Ohi-OMe.HCl
К раствору (-15oC) сухого метанола (10 мл) по каплям добавляли 0,43 мл (0,7 г) тионилхлорида. Смесь перемешивали в течение 20 минут при -10oC, после чего добавляли октагидроиндолин-2-карбоновую кислоту (H-Ohi-OH) (0,5 г) и раствор нагревали с обратным холодильником в течение 3 часов. Смесь концентрировали и упаривали вместе с метанолом в вакууме, в результате чего было получено 665 мг H-Ohi-OMe.HCl
TCX: Rf 0,68; силикагель; бутанол/пиридин/уксусная кислота/вода=4/1/1/2, об/об/об/об.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OMe
К холодному (0oC) раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (1,2 г) в дихлорметане (40 мл) добавляли 1-гидроксибензотриазол (460 мг) и дициклогексилкарбодиимид (700 мг) и смесь перемешивали в течение 20 минут при 0oC. К этой реакционной смеси добавляли H-Ohi-OMe.HCl (665 мг) и N,N-диизопропилэтиламин (0,075 мл). Смесь перемешивали при 0oC в течение 1 часа, а затем выдерживали при комнатной температуре в течение 7 дней, поддерживая при этом pH=7 путем добавления N,N-диизопропилэтиламина. Смесь охлаждали до -20oC и дициклогексилмочевину удаляли путем фильтрации. Фильтрат упаривали досуха. Остаток растворяли в этилацетате и промывали 1 н хлористоводородной кислотой, насыщенным бикарбонатом натрия и насыщенным солевым раствором. После чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат=3:1, об/об. Выход: 1,07 г.

TCX: Rf 0,41; силикагель, гептан/этилацетат=3:1, об/об.

(d) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OH
К раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Ohi-OMe (1,05 г) в диоксан/вода, 2/1, об/об (30 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,32 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6,5 часа. Диоксан удаляли путем выпаривания при пониженном, давлении. А затем добавляли этилацетат, pH доводили до 1,5 с использованием хлористоводородной кислоты, а водный слой три раза экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат (1:2, об/об). Фракции, содержащие N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OH объединяли и выпаривали. Выход: 500 мг.

ТСХ: Rf 0,25; силикагель, гептан/этилацетат, 1/2, об/об.

(е) HOOC-СH2-D-Cha-Ohi-Ppa(2-тиазолил)
Реакцию взаимодействия N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OH и H-Ppa(Teoc)-(2- тиазолил).TsOH (428 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Примере 48 и получали два отдельных диастереомера.

Выход: 85 мг. Rt: 37,72 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 127 мг. Rt: 42,46 мин, 20/А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 52
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-(4-цис-этил)-Ppa-(2-тиазолил)
(а) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-(4-цис-этил)-OE
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH получали, как описано в Примере 45. К холодному (0oC) раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (3,7 г) в дихлорметане (15 мл) добавляли 1-гидроксибензотриазол (1/43 г), дициклогексилкарбодиимид (2,18 мл) и смесь перемешивали в течение 15 минут при 0oC. К этой реакционной смеси добавляли H-Pro(4-цис-этил)-OEt. HCl (1,99 г), который был получен способом, описанным в WO 95/23608, и N, N-диизопропилэтиламин (0,150 мл). Смесь перемешивали при 0oC в течение 1 часа, а затем выдерживали при комнатной температуре в течение 2 часов, поддерживая при этом pH=7 путем добавления N,N-диизопропилэтиламина. Смесь охлаждали до - 20oC и дициклогексилмочевину удаляли путем фильтрации. Фильтрат упаривали досуха. Остаток растворяли в этилацетате и промывали 1 н хлористоводородной кислотой, насыщенным бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием гептан/этилацетат (3/1, об/об) в качестве элюента. Фракции, содержащие N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro(4-цис-этил)-OEt, собирали и упаривали. Выход 3,87 г.

ТСХ: Rf 0,46; силикагель, гептан/этилацетат=3/1, об/об.

(b) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-цис-этил)-ОН
К раствору N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-цис-этил)-OEt (3,85 г) в диоксан/вода (9/1, об/об) (50 мл) добавляли 1 н гидроксид натрия (7,5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 60 часов добавляли 70 мг моногидрата гидроксида лития в 10 мл воды и эту смесь перемешивали еще 12 часов. Реакционную смесь разбавляли 100 мл воды, pH доводили до 1,5 с использованием хлористоводородной кислоты, а водный слой трижды экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат (1:2, об/об). Фракции, содержащие N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-цис-этил)-ОН, собирали и упаривали. Выход: 1,39 г.

ТСХ: Rf 0,79; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 126/20/11/6, об/об/об/об.

(с) HOOC-CH2-D-Cha-Pro-(4-цис-этил)-Ppa-(2-тиазолил)
Реакцию взаимодействия N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro(4-цис-этил)-ОН и H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил).TsOH (325 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Примере 48, в результате чего получали два отдельных диастереомера.

Выход: 77,5 мг. Rt: 36,61 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 104 мг. Rt: 40,05 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 53
HOOC-CH2-D-Coa-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
(а) Диэтил-2-ацетиламино-2-(циклооктилметил)-малонат
К холодной (0oC) суспензии гидрида натрия (5,36 г) в диоксане (100 мл) по каплям (очень медленно) добавляли сухой этанол (134 мл) и смесь перемешивали в течение полутора часов при 0oC в атмосфере азота. Полученный раствор этилата натрия по каплям добавляли к раствору циклооктилметилбромида (Пример 7 (а)), (27,49 г), иодида натрия (2,0 г) и диэтилацетиламиномалоната (29,10 г) в диоксан(200 мл)/этанол(20 мл), а затем раствор интенсивно перемешивали в течение 165 часов при 80oC. Растворитель удаляли путем выпаривания при пониженном давлении, после чего добавляли этилацетат, а затем промывали водой, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором, сушили сульфатом магния и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат (7/3, об/об). Фракции, содержащие нужное соединение, собирали и упаривали. Выход: 19,60 г. ТСХ: Rf 0,53; силикагель, гептан/этилацетат= 7/3, об/об.

(b) H-D,L-Coa-OH
Аминокислоту H-Coa-OH получали путем нагревания с обратным холодильником раствора диэтил 2-ацетиламино-2-(циклооктилметил)-малоната (19,60 г) в 4 н хлористоводородная кислота/уксусная кислота (2:1, об/об) (450 мл) в течение 75 часов. После охлаждения кристаллы собирали путем фильтрации и промывали диэтиловым эфиром. Выход: 9,83 г.

ТСХ: Rf 0,59; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота /вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D,L-Coa-Pro-OBzl
Синтез N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-Соа-Рго-OBzl осуществляли способами, описанными в Примере 1.

(d) HOOC-CH2-D-Coa-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-Coa-Pro-H получали путем реакции гидрирования N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-Coa-Pro-OBzl (19,61 г) способом, описанным в Примере 1. Полученное масло обрабатывали диэтиловым эфиром, после чего оба диастереомера N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-Coa-Pro-OH выделяли путем фильтрации. Фильтрат упаривали при пониженном давлении (выход 9,34 г) и это соединение использовали для связывания с H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил). TsOH (400 мг) с последующим снятием защиты и очисткой, как описано в Примере 48, в результате чего было получено два отдельных диастереомера.

Выход: 137 мг. Rt: 36,10 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 139 мг. Rt: 38,94 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 54
HOOC-CH2-D-Cha-Azt-Ppa-(2-тиазолил)
(а) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH получали способом, описанным в Примере 1.

(b) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Azt-OH
Изобутилхлорформиат (0,71 мл) по каплям добавляли к охлажденному (от -15oC до -20oC) раствору N-(т- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (1,90 г) и N-метилморфолина (0,6 мл) в 15 мл дихлорметана. Через 45 минут добавляли H-Azt-OH (0,50 г). Через один час органическую фазу экстрагировали водой, а органический слой сушили сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли под давлением. Выход: 2,3 г целевого соединения в виде почти бесцветного масла.

FAB-MC: m/e=469 (М+H+)
(с) HOOC-CH2-D-Cha-Azt-Ppa-(2-тиазолил)
Связывание с H-Ppa(Teoc)-(2-тиазолилом) (428 мг) с последующим снятием защиты и очисткой проводили способом, описанным в Примере 48, и получали два отдельных диастереомера.

Выход: 72 мг. Rt: 28,10 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Выход: 88 мг. Rt: 31,46 мин, 20%А/80%В/0%С - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 55
HOOC-(CH2)2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
(a) N-(2-(т-Бутилоксикарбонил)этил)-D-Cha-OMe
К суспензии 7,11 г D-Cha-OMe.HCl в 25 мл ацетонитрила добавляли 2,6 мл N, N-диизопропилэтиламина и 25 мл трет-бутилакрилата. Эту реакционную смесь нагревали при 40oC и поддерживали при pH=8 (тест на пятно проведен на влажной индикаторной бумаге для определения pH) с использованием N,N-диизопропилэтиламина. Через одну неделю реакционную смесь концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате, промывали водой и насыщенным солевым раствором, а затем сушили (сульфатом натрия) и концентрировали с получением 11,78 г целевого соединения, которое использовали без дополнительной очистки.

ТСХ: Rf 0,7, силикагель, этилацетат/гептан=1:1, об/об.

(b) N-(2-(т-Бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-OMe
Способом, описанным для N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe (Пример 1), N-(2-(т-бутилоксикарбонил) этил)-D-Cha-OMe (11,78 г) преобразовывали в N-(2-т-бутилоксикарбонил) этил)-N-Boc-D-Cha-OMe (8,78 г)
ТСХ: Rf 0,7, силикагель, этилацетат/гептан=1:2, об/об.

(с) N-(2-(т-Бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-ОН
Способом, аналогичным описанному для N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-ОН (Примера 1), N-(2-(т-бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-OMe (10,0 г) подвергали реакции омыления и получали N-(2-(т-бутилоксикарбонил) этил)-N-Boc-D-Cha-OH (4,31 г)
ТСХ: Rf 0,1, силикагель, этилацетат/гептан=1/5, об/об.

(d) N-(2-(т-Бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl
Способом, аналогичным описанному для N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl (Примера 1), N-(2-(т-бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-OH (3,14 г) подвергали взаимодействию с Pro-OBzl.HCl, в результате чего получали N-(2-(т-бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl (4,36 г).

ТСХ: Rf 0,5, силикагель, этилацетат/гептан=1/2, об/об.

(е) N-(2-(т-Бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH
Способом, аналогичным описанному для N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH (Примера 1), N-(2-(т-бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl (4,33 г) подвергали реакции гидрирования, в результате чего получали N- (2-(т-бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH (3,96 г)
ТСХ: Rf 0,15, силикагель, этилацетат.

(f) N-(2-(т-Бутилоксикарбонил)этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Рра(Teoc) -(2)-тиазолил)
Способом, аналогичным описанному для N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-оксазолила) (Примера 44), N-(2-(т-бутилоксикарбонил) этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH (342 мг) подвергали реакции взаимодействия с H- Ppa(Teoc)-(2-тиазолил). TsOH (описанным в Примере 48), в результате чего получали N-(2-(т-бутилоксикарбонил) этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил) (468 мг).

ТСХ: Rf 0,25, силикагель, этилацетат/гептан=1/1, об/об.

(g) HOOC-CH2CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Способом, аналогичным описанному для HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Рра-(2-оксазолила) (Пример 44), N-(2-(т-бутилоксикарбонил) этил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Teoc)-(2-тиазолил) (468 мг) подвергали реакции деблокирования и получали N-НООС-CH2CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил) в виде двух диастереомеров.

Выход: 123 мг. Rt (ЖХ): 30,2 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Выход: 138 мг. Rt (ЖХ): 33,6 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 56
HOOC-CH2-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
(a) Boc-D-Cha-OMe
Boc-D-Cha-OH (20 г) растворяли в дихлорметан/метанол (9/1, об/об) (400 мл). Затем добавляли тетрафторборат 2-(1Н- бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (22,7 г) и раствор доводили до pH=8 путем добавления триэтиламина (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Смесь последовательно промывали холодным 1 н раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5%-ным бикарбонатом натрия и водой, после чего сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента этилацетат/гептан = 2/3, об/об. Фракции, содержащие Boc-D-Cha-OMe, собирали и упаривали. Выход: 19,38 г.

ТСХ: Rf 0,90, силикагель, этилацетат/гептан, 3/1, об/об.

(b) Boc-(N-Me)-D-Cha-OMe
Boc-D-Cha-OMe (19,35 г) растворяли в 200 мл сухого N,N-диметилформамида в атмосфере азота. После добавления метилиодида (4,22 мл) смесь охлаждали до 0oC. Затем добавляли 2,71 г гидрида натрия (60% дисперсия в масле) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Эту смесь частично концентрировали, добавляли этилацетат и органический слой промывали 0,1 М хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали. Выход: 21,07 г.

ТСХ: Rf 0,55, силикагель, этилацетат/гептан, 3/7, об/об.

(с) Boc-(N-Me)-D-Cha-OH
Раствор Boc-(N-Me)-D-Cha-OMe (20 г) в 400 мл диоксан/вода (9/1, об/об) обрабатывали достаточным количеством 2 М раствора гидроксида натрия для поддержания pH= 12 в течение 16 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и получали 21,2 г Boc-(N-Me)-D-Cha-OH.

ТСХ: Rf 0,75; силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(d) Boc-(N-Me)-D-Cha-OBzl
Boc-(N-Me)-D-Cha-OH (2 г) растворяли в дихлорметане (20 мл). Затем добавляли бензиловый спирт (0,76 г) и тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (2,24 г), после чего раствор доводили до pH=8 путем добавления триэтиламина (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение одного часа при комнатной температуре. Смесь последовательно промывали холодным 1 н раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5%-ным бикарбонатом натрия и снова водой, после чего сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали, а остаток хроматографировали на силикагеле с использованием этилацетат/гептан (1: 3, об/об) в качестве элюента. Фракции, содержащие (N-Me)-Boc-D-Cha-OBzl, собирали и упаривали. Выход: 1,56 г.

ТСХ: Rf 0,75, силикагель, этилацетат/гептан=3/1, об/об.

(е) H-(N-Me)-D-Cha-OBzl
Boc-(N-Me)-D-Cha-OBzl (1,56 г) обрабатывали 50% трифторуксусная кислота/дихлорметан (20 мл) в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали досуха и получали 1,6 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,50, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(f) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-(N-Me)-D-Cha-OBzl
К перемешанному раствору H-(N-Me)-D-Cha-OBzl (1,6 г) в 40 мл ацетонитрила добавляли т-бутилбромацетат (0,81 г). Затем добавляй иодид тетрабутиламмония (150 мг) и pH смеси доводили до 8,5 путем добавления N,N-диизопропилэтиламина. Полученную смесь перемешивали в течение 16 часов при 50oC и упаривали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате и раствор промывали 5%-ным раствором бикарбоната натрия и водой, а затем сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме. После хроматографии на силикагеле (элюент: гептан/этилацетат= 4/1, об/об) получали 1,11 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)-(N-Me)-D-Cha-OBzl.

ТСХ: Rf 0,95, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода = 63/20/6/11, об/об/об/об.

(g) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-(N-Me)-D-Cha-OH
К раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-(N-Me)-D-Cha-OBzl (1,11 г) в метаноле (20 мл) добавляли 10%-ный палладий-на-угле (100 мг) и 1,43 мл 2 M хлористоводородной кислоты. Реакционную смесь гидрировали при атмосферном давлении и при комнатной температуре в течение 1 часа. Палладиевый катализатор удаляли путем фильтрации, а растворитель удаляли путем выпаривания при пониженном давлении с получением 970 мг N-(т-бутилоксикарбонилметил)-(N-Me)-D-Cha-OH.

ТСХ: Rf 0,75, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 163/20/6/11, об/об/об/об.

(h) HOOC-CH2-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH получали способом, описанным в Примере 1. Связывание с использованием смешанного ангидрида, снятие защиты и очистку проводили способом, описанным в Примере 48. Выход: два диастереомера, оба по 79 мг.

A: Rt (ЖХ): 30,87 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

В: Rt (ЖХ): 34,58 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 57
EtOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-тиазолил) получали способом, описанным в Примере 48. Снятие защиты осуществляли с использованием 3 M хлористый водород/этанол. После очистки получали два диастереомера: 37 мг и 44 мг.

А: Rt (ЖХ): 35,24 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

В: Rt (ЖХ): 38,12 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%С в течение 40 минут.

Пример 58
H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH
Синтез Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH описан в Примере 16.

N-Me-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Способами, описанными в Примере 45, Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH (400 мг) подвергали связыванию с H-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил).TFA Полученный трипептид обрабатывали в смеси TFA и тиоанизола (см. Пример 45) и очищали с помощью ВЭЖХ с получением целевого соединения (218 мг) в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 31,96 мин, 20%А/80%В - 20%А/20%В/60%C в течение 40 минут.

Пример 59
ЭтилSO2-D-Sha-Pro-Рра(2-тиазолил)
(а) ЭтилSO2>-D-Cha-Pro-ОН
Синтез этилSO2-D-Сha-Pro-ОН описан в Примере 18.

b) ЭтилSO2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Связывание этилSO2-D-Cha-Pro-OH (300 мг) с H-Ppa(Cbz)-(2-тиазолилом) осуществляли способом, описанным в Примере 45, получая после очистки этилSO2-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил) (560 мг). Сниятие защиты и очистку осуществляли по способу Примера 45, получая этилSO2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил) (190 мт) в виде смеси диастереомеров.

Rt (ЖХ): 26,67 и 28,20 мин, 20%А/60%В и 20%С - 100%С в течение 40 минут.

Пример 60
ЭтилSO2-D-Phe-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
Связывание этилSO2-D-Phe-Pro-OH (Примера 26) с H- Ppa(Teoc)-(2-тиазолил). TsOH (Пример 47) осуществляли способами, описанными в примере 48, и получали полностью защищенный трипептид. После снятия защиты (см. Пример 48), два диастереомера могут быть разделены с помощью ВЭЖХ. Выход: два диастереомера.

80 мг: Rt (ЖХ): 39,87 мин, 20%А, 80%В - 20%А, 20%В и 60%С в течение 40 минут.

69 мг: Rt (ЖХ): 42,45 мин, 20%А, 80%В - 20%А, 20%В и 60%С в течение 40 минут.

Пример 61
БензилSO2-noeLeu(цикло)-Gly-Ppa-(2-тиазолил)
235 мг БензилSO2-noeLeu(цикло)-Gly-OH (см. Пример 12) подвергали связыванию с H-Ppa(Cbz)-(2-тиазолил).TFA при тех же условиях, что описаны в Примере 45. После удаления защитной группы у полученного трипептида (пример 45) и после проведения ВЭЖХ-очистки были получены два отдельных диастереомера.

Выход: 99 мг. Rtt (ЖХ): 37,99 мин, 20%А, 80%В - 20%А, 20%В и 60%С в течение 40 минут.

Выход: 86 мг. Rt (ЖХ): 38,68 мин, 20%А, 80%В - 20%А, 20%В и 60%С в течение 40 минут.

Пример 62
Твердофазный синтез соединений формулы HOOC-CH2-D-Cha-X-Рра-(2-тиазолил) (Таблица 62)
(а) Teoc-Ppa(Boc)-ОН
К раствору 18,4 г H-Ppa-OH и 6,8 г пентагидрата сульфата меди (2) в воде (312 мл) и диоксане (234 мл) добавляли 33,9 г ди-т-бутилдикарбоната, доводя до pH=9 путем добавления 4 н гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Осадок собирали и промывали водой, осадочный слой на фильтре суспендировали в диоксане и pH доводили до 12,5 путем добавления 4 н гидроксида натрия. Затем добавляли 24 мл 2-триметилсилилэтилоксикарбонилхлорида двумя порциями с интервалом в 0,5 часа. Смесь перемешивали в течение 16 часов. Осадок фильтровали и промывали диоксаном. Фильтрат концентрировали до небольшого объема и pH доводили до 2,5. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха с получением 24,9 г масла.

ТСХ: Rf 0,79, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(b) Teoc-Ppa(Boc)-N(Me)OMe
К раствору 29,8 г Teoc-Ppa(Boc)OН и 7,54 г гидрохлорида N,O-диметилгидроксиламина в 370 мл дихлорметана добавляли 23 г тетрафторбората O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония и 20,2 мл триэтиламина и смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь экстрагировали водой и водным 0,9 М бикарбонатом натрия, а затем сушили сульфатом магния и концентрировали. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием 0--->5% метанола в дихлорметане, в результате чего получали 32,2 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,42; силикагель, толуол/ацетон=3/1, об/об.

(с) Teoc-Ppa(Boc)-(2-тиазолил)
70 мл н-Бутиллития (0,72 М в диэтиловом эфире) по каплям добавляли к охлажденному (-78oC) раствору 4,55 мл только что подвергнутого дистилляции 2-бромтиазола в 40 мл диэтилового эфира. Реакционную смесь перемешивали еще 15 минут, а затем медленно добавляли 7,2 г Teoc-Ppa(Boc)-N(Me)OMe, растворенного в 40 мл тетрагидрофурана. После перемешивания в течение 30 минут реакционную смесь выливали в водный раствор бикарбоната натрия (200 мл). Эфирный слой отделяли, а водный экстрагировали эфиром. Объединенные эфирные экстракты промывали водой, сушили сульфатом магния и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле и получали 6,43 г целевого соединения.

ТСХ: Rf 0,61; силикагель, толуол/ацетон=3/1, об/об.

(с) Teoc-Ppa-(2-тиазолил).TsOH
3,16 г п-толуолсульфоновой кислоты (1 H2O) добавляли к раствору 8 г Teoc-Ppa(Boc)-(2-тиазолила) в 116 мл диэтилового эфира. Полученную смесь медленно концентрировали на роторном испарителе при 30oC. Маслянистый остаток перемешивали еще 2 часа на роторном испарителе в вакууме, в результате чего было получено 9,2 г соли п-толуолсульфоновой кислоты.

ТСХ: Rf 0,6, силикагель; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода= 63/20/6/11, об/об/об/об.

(е) Иммобилизация Teoc-Ppa-(2-тиазолил).TsOH на гидроксиметилполистироле (Teoc-Ppa(С(О)OCH2Po1)-(2-тиазолил)
К суспензии 10,0 г гидроксиметилполистирола (HOCH2Рo1) -(0,97 мМ/г) и 12,9 г ди(N-сукцинимидил)карбоната в ацетонитриле (50 мл) и дихлорметане (50 мл) добавляли 7 мл триэтиламина. Полученную смесь встряхивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Смолу фильтровали и последовательно промывали дихлорметаном, 1-метил-2-пирролидиноном и снова дихлорметаном. Эту смолу суспендировали в ацетонитриле (50 мл) и дихлорметане (50 мл). Затем к суспензии добавляли 8,3 г Teoc-Ppa-(2-тиазолил).TsOH и 3,7 мл триэтиламина и полученную смесь встряхивали в течение 17 часов. Смолу собирали путем фильтрации, последовательно промывали дихлорметаном, 1-метил-2-пирролидиноном, дихлорметаном и диэтиловым эфиром, после чего сушили в вакууме и получали 13,3 г смолы.

(f) H-Ppa(С(О)OCH2Pol)-(2-тиазолил).HCl
1,5 мл смеси трифторуксусной кислоты и дихлорметана (1:1, об/об) добавляли к 50 мг Teoc-Ppa(С(О)OCH2Pol)-(2-тиазолила) и реакционную смесь встряхивали в течение 30 минут. Смолу фильтровали, а затем промывали дихлорметаном, 0,5 М HСl в диоксан-дихлорметан (1:7, об/об) и дихлорметаном.

(g) Boc-Phe-Ppa(C(О)OCH2Pol)-(2-тиазолил)
К раствору 40 мг Boc-Phe-OH и 20 мг 1-гидроксибензотриазола в 1-метил-2-пирролидоне (1 мл) добавляли 23 мкл N,N-диизопропилкарбодиимида. После перемешивания в течение 5 минут эту смесь добавляли в смолу. Затем добавляли 5 мкл 4-метилморфолина и полученную суспензию встряхивали в течение 2 часов, фильтровали, а затем промывали 1-метил-2-пирролидиноном, дихлорметаном и диэтиловым эфиром. Другие N-т-бутилокискарбониламинокарбоновые кислоты были присоединены аналогичным способом.

(h) H-Phe-Ppa(С(О)OCH2Po1)-(2-тиазолил).HCl
Удаление N-т-бутилоксикарбонильных групп у Boc-Phe-Ppa(С(О)OCH2Po1)-(2-тиазолила) осуществляли способом, аналогичным описанному выше для удаления группы Teoc у Teoc-Ppa(C(O)OCH2Po1)-(2-тиазолила)
(i) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Phe-Рра(С(О)OCH2Pol)-(2-тиазолил)
N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH присоединяли к H-Phe-Ppa(С(O)OCH2Po1)-(2-тиазолил). HСl способом, аналогичным описанному выше для присоединения Boc-Phe-OH к H-Ppa(С(O)OCH2Po1)-(2-тиазолилу).

(j) HOOC-CH2-D-Cha-Phe-Ppa-(2-тиазолил)
Смолу обрабатывали 1 мл смеси трифторуксусная кислота/тиоанизол (10/1, об/об) и встряхивали в течение 4 часов. Реакционную смесь фильтровали, а затем промывали трифторуксусной кислотой и толуолом. Объединенный фильтрат и промывки концентрировали. К остатку добавляли гептан и смесь подвергали интенсивному вихревому перемешиванию. Гептановый слой удаляли, а нерастворившийся маслянистый остаток промывали гептаном. После сушки в вакууме остаток снова растворяли в воде, фильтровали через фильтр 0,45 микрон и лиофилизовали. Неочищенный пептид очищали с помощью препаративной вытеснительной хроматографии (колонка: пептид Superdex HR 10/30; скорость потока: 0,75 мл/мин; элюент: вода/ацетонитрил= 4/1, об/об). После лиофилизации соответствующих фракций было получено 6,4 мг HOOC-CH2-D-Cha-Phe-Ppa-(2-тиазолила)
(k) HOOC-CH2-D-Cha-X-Ppa-(2-тиазолил) (Таблица 62)
Соединения формулы HOOC-CH2-D-Cha-Х-Ppa-(2-тиазолил) получали способами, аналогичному для получения HOOC-CH2-D-Cha-Phe-Рра-(2-тиазолила). Все соединения были охарактеризованы с помощью обращенно-фазовой жидкостной хроматографии на колонке с LC-18-DB Spelcosil при следующих условиях: скорость потока: 1,0 мл/мин, буфер А: 0,5 М фосфатно-калиевый буфер (pH 2,1); буфер В: вода; буфер D: ацетонитрил-вода (9:1). Градиент: 0 ---> 30 мин: 20% А/65% В/15% D ---> 20% А/25% В/55% D. УФ-детекция при 210 нм. В Таблице 62 время удерживания приведено в минутах.

Пример 63
С использованием способов настоящего изобретения могут быть получены следующие соединения
N-Me-D-Phe-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-ОН
HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
HOOC-CH2-D-Cha-(N-циклопентил)-Gly-Ppa-(2-тиазолил)
HOOC-CH2-D-Cha-Pec-Ppa[COCO]-ОН
HOOC-CH2-D-Cha-Pec-Ppa-(2-тиазолил)
HOOC-CH2-D-Cha-(N-циклогексил)-Gly-Ppa[COCO]-OH
HOOC-CH2-D-Cha-(N-циклогексил)-Gly-Ppa-(2-тиазолил)
HOOC-CH2-D-Cha-(N-циклопропил)-Gly-Ppa[COCO]-OH
HOOC-CH2-D-Cha-(N-циклопропил)-Gly-Ppa-(2-тиазолил)
N-Me-D-Phe-(N-циклопентил)-Gly-Ppa[COCO]-OH
N-Me-D-Phe-(N-циклопентил)-Gly-Ppa-(2-тиазолил)
2-Пропил-пентаноил-Asp(OMe)-Pro-Рра[COCO]-ОН
2-Пропил-пентаноил-Asp(OMe)-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
2-Пропил-пентаноил-Asp-Pro-Ppa[COCO]-OH
2-Пропил-пентаноил-Asp-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
1-Piq-(N-циклопентил)-Gly-Ppa[COCO]-OH
1-Piq-(N-циклопентил)-Gly-Ppa-(2-тиазолил)
Дифенилпропионил-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
N-Me-D-Nle-Pro-Ppa[COCO]-OH
N-Me-D-Nle-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
EtSO2-D-Phe-Pro-Ppa[COCO]-OH
EtSO2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-OH
EtSO2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
EtSO2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-оксазолил)
HOOC-CH2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-OH
HOOC-CH2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-тиазолил)
HOOC-CH2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-оксазолил).

Пример 64
Анализ на антитромботическую активность
Тромбин (Фактор IIа) представляет собой фактор, участвующий в каскаде реакций свертывания крови. Антитромбическую активность соединений настоящего изобретения оценивали путем спектрофотометрического измерения скорости гидролиза хромогенного субстрата s-2238, проявляющегося под действием тромбина. Этот анализ на антитромботическую активность, проводимый в буферной системе, использовали для оценки величины IC5 соединений настоящего изобретения.

Среда для испытаний: Буфер, содержащий трометамин-NaCl-полиэтиленгликоль 6000 (TNP). Известное соединение: 12581 (Kabi). Носитель: TNP-буфер. Солюбилизация может быть осуществлена с использованием диметилсульфоксида, метанола, этанола, ацетонитрила или трет-бутилового спирта, которые не оказывают неблагоприятного воздействия при концентрациях до 2,5% в конечной реакционной смеси.

Техника
Реагенты*: Трометамин-NaCl (TN)-буфер. Состав этого буфера: трометамин (Трис) - 6,057 (50 ммоль), NaCI - 5,844 г (100 ммоль), вода - до 1 л, pH раствора доводили до 7,4 при 37oC путем добавления HCl (10 ммоль/л). TNP-буфер: полиэтиленгликоль 6000 растворяли в TN-буфере с получением концентрации 3 г/л. Раствор S-2238: один сосуд S-2238 (25 мг; Kabi Diagnostica, Sweden) растворяли в 20 мл TN-буфера с получением концентрации 1,25 мг/мл (2 ммоль/л). Раствор тромбина: человеческий тромбин (16000 нКат/сосуд; Central Laboratorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam, The Netherlands) растворяли в TNP-буфере и получали маточный раствор с концентрацией 835 нКат/мл. Непосредственно перед использованием этот раствор разводили TNP-буфером с получением концентрации 3,34 нКат/мл.

-* Все используемые ингредиенты имели аналитическую чистоту.

- Для водных растворов использовали сверхчистую воду (качества Milli-Q).

Получение растворов испытуемых соединений и известного соединения
Испытуемое и известное соединения растворяли в сверхчистой воде Milli-Q с получением концентрации 10-2 моль/л. Каждую концентрацию серийно разводили носителем с получением концентраций 10-3, 10-4 и 10-5 моль/л. Эти разведения, включая маточный раствор, использовали в анализе (конечные концентрации реакционной смеси составляли 310-3; 10-3; 310-4; 10-4; 310-5; 10 -5; 310-6; и 10-6 моль/л соответственно).

Процедура
При комнатной температуре 0,075 мл и 0,025 мл растворов испытуемого или известного соединения или носителя альтернативно вносили пипеткой в лунки микропланшета, и эти растворы разводили 0,115 мл и 0,0165 мл TNP-буфера соответственно. Затем в каждую лунку добавляли 0,030 мл-аликвоту раствора S-2238 и планшет предварительно нагревали и предварительно инкубировали при встряхивании в инкубаторе (Amersham) в течение 10 минут при 37oC. После предварительного инкубирования инициировали гидролиз S-2238 путем добавления в каждую лунку 0,030 мл раствора тромбина. Затем планшет инкубировали (при встряхивании в течение 30 с) при 37oC. Через 1 минуту после начала инкубирования каждые 2 минуты в течение 90 минут измеряли оптическую плотность каждого образца при 405 нм с использованием кинетического микропланшет-ридера (Twinreader plus, Flow Laboratories).

Все данные собирали на персональном компьютере IBM с использованием LOTUS-MEASURE. Для каждой концентрации соединения (выраженной в моль/л реакционной смеси) и для каждого "контроля" строили кривую зависимости оптической плотности от времени реакции (в мин).

Оценка результатов: Исходя из построенной аналитической кривой, для каждой конечной концентрации вычисляли максимальную оптическую плотность. Величины IC50 (конечная концентрация в мкмоль/л, вызывающая 50%-ное ингибирование максимальной оптической плотности контроля) вычисляли с использованием анализа по методу логарифмической трансформации Гафнера (Hafner et al., Arzneim.-Forsch/Drug Res. 1977; 27(11): 1871-3).

Величины IC50 для соединений настоящего изобретения приведены в следующей таблице A.


Формула изобретения

1. Соединение формулы I

где A - H, необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил, R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R1SO2-, R2OOC-(chr2)m-, где R1 выбирают из (1-12C)алкила и (3-8C)циклоалкила, причем указанные группы могут быть замещены OH-группой, и из (7-15C)аралкила, а каждая группа R2 независимо представляет H или имеет те же значения, которые указаны для R1; m = 1, 2 или 3;
B представляет связь, аминокислоту формулы -NH-CH[(CH2)pC(O)OH]-C(O)-, где p = 0, 1, 2 или 3, -N(( 1-12C)алкил)-CH2-CO-, D-1-Piq либо B представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где указанная гидрофобная боковая цепь представляет (1-12C)алкил, необязательно замещенный одной или несколькими (3-8C)циклоалкильными группами или (6-14C)арильными группами, такими, как циклогексил, циклооктил, фенил, и где указанная гидрофобная боковая цепь может быть необязательно замещена такими заместителями, как галоген, низший алкил (например, метил или этил), низший алкокси (например, метокси), либо B представляет L- или D-аминокислоту, имеющую основную боковую цепь, причем указанная гидрофобная или основная аминокислота может быть необязательно замещена N-(1-6C)алкилом;
либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(O)-, где R3 и R4 независимо представляют R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R1-SO2-, а R5 представляет гидрофобную или основную боковую цепь;
X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, где указанная боковая цепь является (1-12C)алкилом, необязательно замещенным одной или несколькими (6-14C)арильными группами, (например, фенилом), либо X представляет треонин, либо X представляет циклическую аминокислоту, например 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, 4-пиперидинкарбоновую кислоту, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту, где указанная циклическая аминокислота необязательно замещена (1-6C)алкилом, либо X представляет -NR2-CH2-C(O)- или фрагмент

или

где n = 2, 3 или 4, а W представляет CH;
Y представляет -CO-NH-(1-6C)алкилен - C6H5, -COOR6, где R6 - H или (1-6C)алкил, -CONR7R8, где R7 и R8 независимо - H или (1-6C)алкил либо R7 и R8, взятые вместе, представляют (3-6C)алкилен, либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола;
r = 0, 1, 2 или 3,
или его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п. 1, где X - L-аминокислота с гидрофобной боковой цепью, треонин или -NR2-CH2-C(O)-.

3. Соединение по п. 1, где A определен выше; B - связь, аминокислота формулы -NH-CH[(CH2)pC(O)OH]-C(O)-, где p = 0, 1, 2 или 3; -N((1-6C)алкил)-CH2-CO-, D-1-Piq или D-аминокислота, имеющая гидрофобную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещена N-(1-6C)алкилом, либо A и B, взятые вместе, представляют R3R4N-chr5-C(O)-, и X представляет циклическую аминокислоту, необязательно замещенную (1-6C)алкилом, или X представляет -NR2-CH2-C(O)- или фрагмент

или

4. Соединение по п.3, где A - H, 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил, R1, R1-SO2-, R2OOC-(chr2)m-, где R1 выбирают из (1-12C)алкила и (7-15C)аралкила; B - связь, D-l-Piq или D-аминокислота, имеющая гидрофобную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещена N-(1-6C)алкилом; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R3R4N-chr5-C(O)-.

5. Соединение по п.4, где A - H, R1-SO2- или R2OOC-(chr2)m-; B - связь, D-1-Piq или D-аминокислота, имеющая гидрофобную боковую цепь, либо A и B, взятые вместе, представляют R3R4N-chr5-C(O)-; Y - -CO-NH-(1-6C)алкилен-C6H5, -COOR6, где R6 - H или (1-3C)алкил, -CONR7R8, где R7 и R8 независимо представляют H или (1-3C)алкил либо R7 и R8, взятые вместе, представляют (3-5C)алкилен, либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

6. Соединение по п.5, где A - R2OOC-(chr2)m-; B - D-аминокислота, имеющая гидрофобную боковую цепь, либо A и B, взятые вместе, - остаток R3R4N-chr5-C(O)-, и X - 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, 2-октагидроиндолкарбоновая кислота или [N(3-8C)циклоалкил]-CH2-C(O)-.

7. Соединение по п.6, где A - HOOC-CH2-; B - D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, п-Cl-D-Phe, п-OМетил-D-Phe, п-OЭтил-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-OMe-D-Phe, D-Chq или A и B, взятые вместе, - R3R4N-chr5-C(O)-;
8. Соединение по п.7, где A - HOOC-CH2-; B - D-Cha; X - пролин или -[N(циклопентил)]-CH2-C(O)-.

9. Соединение по п.5, где A - R1-SO2-; B - связь, D-l-Piq или D-аминокислота, имеющая гидрофобную боковую цепь, или A и B, взятые вместе, - R3R4N-chr5-C(O)-, где по крайней мере один из R3 и R4 - R1-SO2-, а другой независимо - (1-12C)алкил или R1-SO2-; X - 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, 2-октагидроиндолкарбоновая кислота, -[N(3-8C)циклоалкил]-CH2-C(O)- или фрагмент

или

10. Соединение по п.9, где A - этил -SO2- или бензил -SO2-; B - связь D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, п-Cl-D-Phe, п-OМетил-D-Phe, п-OЭтил-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-OMe-D-Phe, D-Chq или A и B, взятые вместе, - остаток 3R4N-chr5-C(O)-, где по крайней мере один из R3 и R4 - этил-SO2 или бензил - SO2-, а другой независимо - (1-12C)алкил или R1-SO2, а R5 - (3-8C)циклоалкил, (3-8C)циклоалкил(1-4C)алкил, фенил, бензил, дифенилметинил, где указанные группы могут быть необязательно замещены хлором или (1-4C)алкокси.

11. Соединение по п.10, где A - этил-SO2-, B - D-Cha; X - пролин или -[(N(циклопентил)]CH2-C(O)-.

12. Соединение по любому из пп.1 - 11, где r = 1.

13. Соединение по любому из пп.1 - 12, используемое в терапии.

14. Соединение по любому из пп.1 - 12 для изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, опосредованных действием тромбина.

15. Фармацевтическая композиция, обладающая антитромбической активностью, содержащая соединение по любому из пп.1 - 12 и фармацевтически приемлемые добавки.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотиновым соединениям общей формулы где Q отсутствует или обозначает -NH-(CH2)5-CO-, R1 обозначает X-Arg-Gly-Asp-y, X - трипептид: Gly-Gly-Gly-, y - дипептид: -Ser-PrO или R1 обозначает A-Cys(R2)-B-U, R2 обозначает Н, Trt; А обозначает Asp или пептидный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из: Ala-Asp, Thr-Ala-Asp, Lys-Thr-Ala-Asp, Lys-Ala-Ala-Asp, Arg-Thr-Ala-Asp, Ser-Ala-Asp, Gln-Ser-Ala-Asp, Gly-Lys-Thr-Ala-Asp, Ile-Ser-Ala-Gly, Arg-Ser-Ala-Gly Gly-Lys-Thr-Cys (Trt)-Asp В отсцтствиет или обозначает Pro или N-метилированное производное Ala, причем, если R1 обозначает A-Cys(R2)-B-U, то лишь один из остатков А или В может отсутствовать, U обозначает ОН или NH2, или R1 обозначает цикло (Arg-Gly-Asp-Z), Z в боковой цепи связан с Q или, если Q отсутствует, с биотином, Z обозначает ди- или трипептидный остаток, причем аминокислоты, независимо друг от друга, выбирают из группы, состоящей из Ala, Val, Тyr, Trp, Phe, Cys, Lys, М, при этом указанные аминокислоты могут быть дериватизированы, а аминокислотные остатки связаны друг с другом пептидоподобно через N-амино- и -карбоксильные группы, причем М содержится всегда и обозначает: NH(R8) - CH(R3) - COOH, R3 = R6 - R4 где R4 = ОН, R6 = алкиленфенил с 7-14 C-атомами, R8 = H, алкил с 1-6 C-атомами, причем, если речь идет об остатках оптически активных аминокислот и аминокислотных производных, то включаются как D-, так L-формы; а также к их солям

Изобретение относится к бициклическим соединениям, полезным в качестве препаратов, нейтрализующих действие гликопротеина IIb/IIIa, для предотвращения тромбоза

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для коррекции показателей системы гемостаза

Изобретение относится к препарату, предназначенному для внутривенного введения

Изобретение относится к новым циклическим аминопроизводным общей формулы I, где R1 представляет фенильную группу, замещенную атомом галогена, 2 представляет C1 - C8 алифатическую ацильную группу или (C1 - C4 алкокси)карбонильную группу, R3 представляет 3 - 7-членную насыщенную циклическую аминогруппу, которая может образовывать конденсированное кольцо, где указанная циклическая аминогруппа замещена заместителем, выбранным из группы, включающей: меркаптогруппу, которая может быть незащищена или защищена группой, выбранной из ряда защитных групп, C1 - C4 алкильную группу, замещенную меркаптогруппой, которая может быть незащищена или защищена группой, выбранной из ряда защитных групп, причем ряд защитных групп для указанных меркаптогрупп включает C1 - C20 алканоильные группы, C3 - C20 алкеноильные группы и бензоильные группы, и указанная циклическая аминогруппа, кроме того, предпочтительно замещена группой формулы =CR4R5, где R4 представляет атом водорода, а R5 представляет атом водорода, C1 - C4 алкильную группу, карбоксигруппу, (C1 - C4-алкокси)карбонильную группу, карбамоильную группу или моно- или ди-(C1 - C4-алкил)карбамоильную группу

Изобретение относится к медицине

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам и композициям для лечения хирургических ран, ожогов, повреждений, эрозий, трофических язв, пролежней и т.п., особенно осложненных гнойно-воспалительными процессами

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, а именно к способам получения лекарственных средств на основе пептидов, нормализующих функции различных органов и тканей

Изобретение относится к ускорению реакции оксида азота в гетерогенных средах, в т.ч

Изобретение относится к медицине и касается способа оценки змеиного яда на присутствие или отсутствие агрегации тромбоцитов (PA1), основанного на специфическом связывании с рецептором очищенного и выделенного из змеиного яда РА1 и его укороченной нормы, способа выделения РА1 из змеиного яда и фармацевтической композиции на его основе

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается лекарственного средства для лечения вирусных инфекций, СПИДа и/или СПИД-ассоциированного комплекса
Изобретение относится к дерматологии и косметологии
© Патентный поиск, поиск патентов на полезные модели - PoleznayaModel.RU 2012-2024
Игромания Политика конфиденциальности Реклама на сайте Вход/Регистрация
Рейтинг@Mail.ru
Наверх