Штамм бактерий lactobacillus acidophilus var.coccoideus, используемый при промышленном производстве пробиотика для жвачных животных

 

Использование: микробиологическая промышленность, штамм, пробиотик для жвачных животных. Сущность изобретения: предложен штамм Lactobacillus acidophilus var. coccoidens М-86 ВКПМ В-4992, используемый на промышленном производстве пробиотика для жвачных животных. Штамм выделен из доминирующей микрофлоры желудочно-кишечного тракта здорового теленка способом получения накопительной культуры на среде MRS, Леонович, Перекоповой при температуре 28-30^oС. Культура выделена из моноколоний и идентифицирована по определителю Bergey. Штамм технологичен для получения пробиотика в промышленных условиях.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при промышленном производстве пробиотика для жвачных животных.

Известен штамм Lactobacillus acidophilus (авторское свидетельство SU 1491884 A1, ЦМПМ B-3324), используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры, выраженная палочкообразная форма клеток которого затрудняет проведение технологических операций получения сухой биомассы бактерий, так как культура быстро гибнет на стадии сепарирования.

Целью изобретения является штамм Lactobacillus acidophilus, используемый при промышленном производстве пробиотика для жвачных животных, обладающий высокими технологическими характеристиками.

Штамм выделен из доминирующей микрофлоры желудочно-кишечного тракта здорового теленка способом получения на среде MRS, Леононвич, Перекоповой. Штамм Lactobacillus acidophilus var.coccoideus M-86 депонирован, коллекционный номер B-4992, коллекция ВНИИгенетики.

Морфологические и культуральные свойства.

Клетки прямые с заостренными концами размером 0,8-1,15 мкм располагаются единично, попарно, цепочками из 4-8 клеток; спор не образуют. При выращивании штамма на агаризованной среде MRS (дрожжевой экстракт 0,5%; мясной экстракт 1,0%; пептон 1,0%; глюкоза 2%; лимоннокислый аммоний 0,2%; уксуснокислый натрий 0,5%; твин-80 0,1%; K₂HPO₄ 0,2%; MgSO₄-7H₂O 0,02%; MnSO₄ - 4H₂O 0,005%; агар 2%), а также на среде, содержащей ферментолизат кукурузной муки (2% по РВ), ферментолизат БВК (40-60 мг% по аминному азоту), агар 2% при pH 6,3-6,7, t = 381^oC, в течение 24-36 ч образуются колонии серого цвета, выпуклые, шероховатые или гладкие, с неровными краями диаметром до 1 мм. В жидких средах того же состава образуют однородный рост в виде равномерной мути или слабого аморфного осадка. Клетки неподвижны.

Физиолого-биохимические свойства штамма.

Факультативный анаэроб. Грамположительный, каталазонегативный, не разжижает желатин, не образует аммиак из аргинина, не восстанавливает 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид, не образует газ из глюкозы, не восстанавливает нитраты в нитриты, восстанавливает молоко с лакмусом и метиленовой синью, не гидрализует эскулин, сквашивает и слабо пептонизирует молоко, на среде с сахарозой слизь не образует, не растет на среде с 4% таурохолата Na и с 6,5% NaCl, не образует псевдокаталазу. Гомоферментативен. Сбраживает: маннозу, галактозу, мальтозу, глюкозу, мелибиозу, арабинозу, сахарозу, раффинозу, лактозу, фруктозу, не сбраживает рабиозу салицин, трегалозу, целлобиозу, амагдалин, мелицитозу, глицерин, дульцит, инулин, иноит, маннит, сорбит, сорбозу, рамнозу, ксилозу. Гидролизирует крахмал и декстрины.

Для нормального роста штамма необходимы субстраты со сложными органическими формами азота (гидролизаты белков, смеси аминокислот), а также витаминами и факторами роста.

Оптимальное температурное плато роста 37-47^oC, растет при 50^oC, не растет при 15^oC, выживает после прогревания при 63^oC в течение 30 минут. Оптимальное значение pH среды 6,3-6,7.

Генетические особенности штамма. Устойчив к антибиотикам, бензилпенициллину, канвмицину, неомицину, оксициллину, полимиксину.

Штамм выделен из доминирующей микрофлоры здорового теленка способом получения накопительной культуры на среде MRS, Леонович, Перекоповой при температуре 28-30^oC из 10 разведений путем высева на чашки Петри в двуслойный агар. Культура выделялась из моноколоний и индифицировалась по определителю Bergey.

Штамм хранят на агаризованной среде в холодильнике при температуре 8-10^oC в течение 1-2 месяцев или в виде лиофильно высушенной культуры в ампулах в течение 12 месяцев.

Биотехнологическая характеристика.

Способ, условия и состав среды для размножения штамма.

Посев на агаризованную среду следующего состава: ферментолизат дрожжей БВК - 2,0% по аминному азоту ферментолизат кукурузной муки - 2,0% по РВ кукурузный экстракт - 0,3% агар-агар - 2,0% вода водопроводная - до 100% pH - 6,5-6,8 Стерилизация среды при температуре 118-122^oC в течение 30 минут. Температура выращивания 37-47^oC в течение 24 часов.

Условия и состав среды для ферментации.

Выращивание ведут при температуре 37-47^oC в течение 10-12 часов на среде следующего состава: ферментолизат дрожжей БВК - 2,0% по аминному азоту ферментолизат кукурузной муки - 2,0% по РВ
кукурузный экстракт - 0,3%
вода водопроводная - до 100%
pH - 6,5-6,8
Стерилизация среды при 118-122^oC в течение 30 минут. Посевная доза 0,5-1%.

По окончании процесса ферментации культуральную жидкость сепарируют при комнатной температуре. Пасту высушивают на распылительной сушилке (t_входа = 120^oC, t_выхода = 54-58^oC).

Активность штамма и способ ее определения.

На среде для ферментации накапливает 11-13 г/л молочной кислоты, титр жизнеспособных клеток 1-2 млрд. кл/мл, -амилазная активность составляет 200 ед. АС/мл. Накопление молочной кислоты в культуральной жидкости определяют расчетным путем по количеству израсходованного титранта, титр жизнecпoсобныx клеток методом Пастера-Коха, -амилазную активность по ГОСТ 20264.0-74.

Штамм осуществляет гомоферментативное молочнокислое брожение, сбраживает крахмал и декстрины, термотолерантен, технологичен для получения препарата в промышленных условиях.

Штамм Lactobacillus acidophilus var.coccoideus M-86 рекомендуется для применения в ассоциативной композиции со штаммами Lactobacillus case, Streptococcus lactis в качестве компонента, обладающего высоким ферментативным потенциалом, способствующим усилению пищеварительных процессов в организме животных, усвоению питательных веществ корма и синтезу в желудочно-кишечном тракте витаминов группы "B" и молочной кислоты.

Пример. Полученную, как описано в биотехнологической характеристике, сухую биомассу бактерий штамма Lactobacillus acidophilus var.coccoideus M-86 смешивают с сухой биомассой штаммов бактерий Streptococcus lactis 3186 k 12 (ВКПМ В-4989), Lactobacillus case МБ (ВКПМ B-4486), полученной аналогично, в пропорции 1:1:1 по количеству жизнеспособных клеток. Полученный таким образом препарат (Руменолакт) используют в качестве биологически активной кормовой добавки (пробиотика) для молодняка жвачных животных (ТУ 9384-001-13162129-3).

Формула изобретения

Штамм бактерий Lactobacillus acidophilus var. coccoideus M-86 ВКПМ В-4992, используемый при промышленном производстве пробиотика для жвачных животных.