Нервно-мышечный блокатор, его получение, фармацевтический состав и способ обеспечения нервно-мышечной блокады у животных

 

Использование: изобретение относится к медицине. Сущность изобретения: физиологически приемлемая IR-цис,I'R-цис-2,2'- (3,11-диоксо-4,10-диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси- 2-метил-1-верартрил изохинолиновая соль, по существу свободная от других ее геометрических и оптических изомеров, и композиция, стимулирующая нервно-мышечную блокаду на ее основе. Было обнаружено, что по сравнению с известной смесью геометрических и оптических изомеров IR-цис, I'R-цис-изомер обладает преимущественной комбинацией фармакологических свойств и проявляет наименьшее вредное воздействие на автономную нервную систему. 5 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к изохинолиновому соединениюм и является нервно-мышечным блокатором.

Нервно-мышечные блокаторы находят широкое применение в хирургической анестезии с целью расслабления скелетных мышц для облегчения работы хирурга. Эти средства находят также широкое применение в отделениях интенсивной терапии больниц для обеспечения долгосрочного расслабления мышц пациентов, интубированных с целью осуществления контролируемой вентиляции пациента.

Бесилат атракурия, например, 2,2'/3,11-диоксо-4,10-диоксотридецилен/-бис-/1,2,3,4-тетрагидро- 6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилисохинолин дибесилат, является недеполяризующим нервно-мышечным блокатором, который впервые был применен в хирургии человека в декабре 1982 г. в Великобритании и годом позже в США. Соединение описано в описании изобретения к патентам Великобритании N 1579822 и США N 4179507. В настоящее время это средство находит широкое применение в хирургии и интенсивной терапии. Особенность средства является самопроизвольное разложение путем отделения Хоффмана при физиологических значениях pH и температуры и путем гидролиза сложных эфиров, происходящие независимо от печеночных и почечных функций. При использовании в хирургии бесилат атракурия применяется в виде смеси десяти оптических и геометрических изомеров. Геометрические и оптические изомеры бесилата атракурия перечисляются в "Eur J. Med. Chem-Chem. Ther. 1984-19 N 5, p. 441-450".

Нервно-мышечные блокаторы, такие как бесилат атракурия, действуют путем блокады рецептора ацетилхолина в нервно-мышечном соединении. Однако при этом они блокируют также холинергический перенос в вегетативной нервной системе, что ведет к нежелательным побочным воздействиям на сердечно-сосудистую систему. Так, например, парасимпатическая блокада ведет к тахкардии и повышению давления, в то время как блокада симпатического ганглия вызывает брадикардию и повышение давления. Нервно-мышечные блокаторы имеют также тенденцию к высвобождению гистамина, который может вызвать у некоторых пациентов опасные для жизни анафилактоидные реакции. Антигенная группа в средствах расслабления скелетной мышцы представлена четвертичным или третичным аммониевым соединением, которое придает также этим средствам свойства нервно-мышечного блокирования. В этом отношении атракурий является слабым выделителем гистамина и, как и относительно других нервно-мышечных блокаторов, о нем существуют отдельные сообщения от относимых к лекарству анафилактоидных реакциях.

Нами обнаружено, что соли атракурия, в которых составляющая атракурия имеет определенную геометрическую и оптическую изомерную конфигурацию, обладают особенно выгодным сочетанием фармакологических свойств, благодаря которому эти соли обладают особыми преимуществами как нервно-мышечные блокаторы.

Конкретной геометрической и оптической изомерной конфигурацией упомянутой выше составляющей атракурия является конфигурация 1R-цис, 1'R-цис. Соли атракурия, обладающие такой конфигурацией, могут быть названы как соли 1R-цис, 1'R-цис-2', 2'-3,11-диоксо-4,10-диоксотридецилен/-бис-/1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил- 1-вератрилизохинолин. Ниже такие соли будут упоминаться как соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис.

Согласно изобретению предлагается соль атракурия 1R-цис, 1'R- цис, в которой практически отсутствуют другие геометрические и оптические изомеры.

Соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис, являющиеся предметом изобретения, практически свободны от других геометрических и оптических изомеров, так что они обычно представляют собой примесь в размере менее чем 5% по массе, предпочтительно менее 2% по массе от общей массы соответствующей смеси. В частности, указанные соли 1R - цис, 1'R - цис, являющиеся предметом изобретения, в лучшем случае содержат а) менее чем 1% по массе соответствующих цис-транс-изомеров и/или менее 0,5% транс-транс-изомеров и/или б) обычно менее чем 5% по массе, предпочтительно менее 2% по массе соответствующих S-изомеров.

Для целей введения человеку, например для использования в хирургии или терапии, например при анестезии, соли атракурия 1R- цис, 1'R-цис, являющиеся предметом изобретения, должны включать физиологически приемлемый анион, причем предпочтительные анионы включают анионы галидов, т.е. хлоридов, бромидов или иодидов, сульфатов, фосфатов, кислого фосфата, ацетата, пропионата, сукцината, малеата и органосульфоната, например метансульфоната (месилат), бензолсульфоната (бесилат), р-толуолсульфоната (тосулат) и нафталинсульфоната, причем особенно предпочтительными являются анионы месилат и бесилат. Такие соли, содержащие физиологически приемлемый анион, будут упоминаться далее как физиологически приемлемые соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис.

При синтезе соответствующей физиологически приемлемой соли могут быть применены соли атракурия, включающие физиологически не приемлемый анион.

Что же касается особенно выгодного сочетания фармакологических свойств, упомянутых выше, то нами обнаружено в ходе опытов на животных, что соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис обладают значительно более высокой нервно-мышечной блокирующей способностью по сравнению с бесилатом атракурия в форме смеси геометрических и оптических изомеров при аналогичной длительности действия.

Соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис демонстрируют также более низкий уровень возможного отрицательного воздействия на вегетативную нервную систему, включая симпатическую блокаду и парасимпатическую блокаду и при меньшей вероятности получения сходных с вызываемым гистамином побочных воздействий на сердечно-сосудистую систему, возникающих при терапевтических дозах, что обеспечивает повышение безопасности пациента по сравнению с бесилатом атракурия в форме смеси геометрических и оптических изомеров.

Еще одним преимуществом солей атракурия 1R-цис, 1'R-цис, являющихся предметом изобретения, является то, что они обеспечивают более эффективную нервно-мышечную блокаду при формировании меньшего количества продуктов разложения по сравнению с упомянутой выше смесью изомеров бесилата атракурия. Это преимущество особенно важно при использовании в процессе длительных хирургических операций и при интенсивной терапии, предусматривающей большие дозы и/или длительные периоды лечения.

Кроме того, изобретение обеспечивает: а) физиологически приемлемые соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис согласно изобретению для использования в хирургии или медицинской терапии, например, для анестезии, в частности, для достижения нервно-мышечной блокады животного, например такого млекопитающего как человек; б) применение физиологически приемлемых солей атракурия 1R- цис, 1'R-цис согласно изобретению при производстве фармакологических составов для достижения нервно-мышечной блокады; в) способ достижения нервно-мышечной блокады животного, например млекопитающего, такого как человек, заключающийся во введении указанному животному достаточного для нервно-мышечной блокады количества физиологически приемлемой соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис согласно изобретению.

Физиологически приемлемые соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис, являющиеся предметом изобретения, применяются обычно в хирургии или медицинской терапии, например, для анестезии путем введения солей соответствующему субъекту, например человеку, подходящими путями и в достаточных дозах, чтобы добиться желательного уровня нервно-мышечной блокады. Обычно соли вводятся путем внутривенных или внутримышечных инъекций или, если необходимо, путем постоянного внутреннего вливания. Величина дозы вводимых солей будет меняться в зависимости от требуемой степени нервно-мышечной блокады, возврата и состояния пациента. Однако при введении внутривенным путем соли обычно применяются в дозе от 0,1 до 0,6 мг/кг, предпочтительно от 0,2 до 0,4 мк/кг. В случае введения вливания соли обычно применяются в дозе от 0,1 до 0,6 мг/кг/ч, предпочтительно от 0,2 до 0,4 мг/кг/ч.

Соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис, являющиеся предметом изобретения, обычно находят применение в хирургии или медицинской терапии в форме терапевтических составов, включающих такую соль вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Такие составы предпочтительно приспосабливаются к введению их путем инъекции или вливания, например, в форме раствора, эмульсии или суспензии соли в фармацевтически приемлемой водной или безводной жидкости, например стерильной воде, которая может дополнительно содержать, если требуется, один или несколько подходящих наполнителей, таких как антисептики, антиокислители, буферные соединения, сгустители или суспензаторы. В таких жидких составах соль обычно содержится в количестве от 5 до 15 мг/мл, предпочтительно от 5 до 10 мг/мл. Кроме того, соли могут быть представлены в форме лиофилизированных твердых материалов, предназначенных для разведения водой для инъекций, или растворами декстрозы или солей. Составы, являющиеся предметом изобретения, обычно представляются или разделенными на дозы, например, в форме ампул или одноразовых шприцов, или же в массовой форме, например в бутылках, из которых может быть извлечена нужная доза; все такие составы должны быть стерильными. В таких приготовленных заранее дозах может содержаться от 10 до 250 мг, предпочтительно от 25 до 50 мг соли, являющейся предметом изобретения, в форме раствора или лиофилизированного твердого материала.

Соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис, являющиеся предметом изобретения, могут быть приготовлены путем обработки соответствующей соли атракурия 1R, 1'R условиями или реактивами, обеспечивающими отделение изомера 1R-цис, 1'R-цис от соответствующих геометрических изомеров, воздействующих в указанной соли атракурия 1R, 1'R.

Отделение требуемой соли атракурия 1R-цис, 1'R-цис в соответствии с указанным процессом удобнее всего осуществляется с помощью хроматографии, в особенности высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), хотя может быть использована жидкостная противоточная хроматография или ионообменная хроматография. Особенно эффективное отделение нужной соли достигается путем ВЭЖХ с использованием колонны, заполненной двуокисью кремния или окисью алюминия, и подвижной фазы, состоящей из подходящей смеси растворителей, например, смеси хлорированного углеводорода, такого как хлористый метилен, или ацетонитрил; спирт, например, алифатический спирт с короткой цепью, такой как метиловый, этиловый спирт или пропанол; и сильная кислота, такая как бензолсульфокислота, метансульфокислота, р-толуолсульфокислота или фосфорная кислота. Обнаружено, что смесь хлористого метилена, метилового спирта и метансульфокислоты, предпочтительно в отношении 80:20:0,5, обладает особыми преимуществами, обеспечивая элюирование соли метансульфоната (месилата) из колонны. Аналогичным образом для элюирования соли безолсульфоната (бесилата) предпочитается смесь растворителей из хлористого метилена, метилового спирта и бензолсульфокислоты (4000:500:0,25). Элюированный раствор соли может быть затем промыт с целью удаления растворителей, таких как метиловый спирт и любая избыточная кислота, и отделен путем выпаривания от хлорированного углеводорода. Нужная соль может быть получена в твердом виде путем лиофилизации водного раствора или путем разделения в таком растворителе как эфир с последующим осаждением путем добавления неполярного растворителя, такого как петролейный эфир или циклогексан.

Применяемая в качестве исходного материала в описанном процессе соль атракурия 1R, 1'R может быть приготовлена из /R/-1,2,3,4-папаверина обычным образом, например способом, описанным в "Eur. J. Med. Chem-Chem. Ther. 1984-19, N 5, p. 441-450".

Пример 1. а) Диакрилат 1,5-пентаметилена.

1,5-Пентанедиол (15,6 г) нагревали в кипящем толуоле (500 мл) с 3-бромопропионовой кислотой (50,5 г) и следами р-толуолсульфокислоты в течение 4 ч. Охлажденный раствор толуола промыли затем водным раствором ацетата натрия и обработали триэтиламином (50 мл) с обратным стоком. Охлажденную смесь, полученную в результате реакции, тщательно промыли водой, чтобы удалить остатки триэтиламина и бромгидрата триэтиламина, после чего при пониженном давлении был выделен толуол.

Продукт, диакрилат 1,5-пентаметилена (24,0 г, выход 75%) был получен в виде палевой жидкости путем дистилляции в глубоком вакууме (т-ра кипения 90-95^oC 0,1 мм рт. ст.).

б) /R/-Тетрагидропапаверин.

Хлоргидрат //-тетрагидропапаверина (105 г) развели в воде, а раствор сделали щелочным с помощью слабого раствора нашатырного спирта. Осажденное ()-татрагидропапавериновое основание было растворено в толуоле, после чего отделенный растворитель подвергли выпариванию, чтобы получить основание в виде бледного желтого масла. Масло развели в метиловом спирте (1575 мл) и обработали N-ацетил-L-лейцином (47,5). Раствор обработали диэтиловым эфиром (274 мл), после чего постепенно произошла кристаллизация N-ацетил-L-лейцината (S)-тетрагидропапаверина (36,5 г). После того как кристаллы были отфильтрованы, маточную жидкость подвергли выпариванию до низкого объема, чтобы получить твердый материал (100 г), который был затем рекристаллизован из кипящего ацетона (50 объемов). В ходе охлаждения появились кристаллы (74 г, 83% (R)-диастереоизомера, 17% (S)-диастереоизомера), который отфильтровали. Твердый материал еще раз подвергли рекристаллизации из кипящего ацетона (50 объемов), получив 58,7 г N-ацетил-L-лецината (R)-тетрагидропапаверина, (97% (R)-изомера, 3% (S)-изомера).

в) (1R, 1'R)-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридекаметилен)-бис- (1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-1-вератрилизохинолин)-диоксалат.

N-Ацетил лецинат (R)-1,2,3,4-тетрагидропапаверина (58,7 г) развели водой и обработали нашатырным спиртом. Осажденное основание экстрагировали толуолом (600 мл) и после выпаривания растворителя получили его в виде масла (39,0 г). Основание (R)-1,2,3,4-тетрагидропапаверина нагревали с 1,5-пента-метилен диакрилатом (10,7 г) и ледяной уксусной кислотой (3,0 мл) при 70^oC в течение 4 ч. Полученную в результате реакции смесь развели в толуоле (400 мл) и перемешивали с силикагелем 60 (Мерк, для колончатой хроматографии, 70 - 230 меш), после чего подвергли фильтрации и выпариванию, получив желтое масло. Полученный продукт развели в ацетоне (600 мл), обработали щавелевой кислотой (9,3 г) и диоксилат (1R, 1'R)-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксотридекаметилен)-бис-(1,2,3,4- тетрагидро-6,7-диметокси-1-вератрилизохинолина) был осажден в виде белого твердого материала (54,2 г, выход 99%), т-ра плавления 125^oC, жидкостная хроматография разрешения 97,8%.

г) (1R, 1'R)-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридекаметилен)-бис- (1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолин/ бензосульфонат (1R, 1'R) ,бесилат атракурия.

(1R, 1'R)-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридекаметилен)-бис- (1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолин) диоксалат (54,0 г) развели в воде (1,6 л) и обработали карбонат натрия, чтобы довести значение pH до 7,0. Осажденное основание экстрагируют в толуол (600 мл) и растворитель затем подвергли выпариванию, чтобы получить очень вязкое желтое масло (42,7 г). Масло в течение ночи обработали метилбензолсульфонатом (75 мл) при температуре окружающей среды. Продукт (1R, 1'R)-2,2'-(3,11-диоксо- 4,10-диоксатридекаметилен)-бис-(1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2- метил-1-вератрилизохинолин) бензосульфонат был выделен путем разделения воды и толуола. Водную фазу подвергли далее промыванию двумя аликвотами толуола и затем подвергли лиофилизации. Продукт (49,7 г, выход 80%) был получен в форме бледного желтого твердого материала.

Продукт представляет собой смесь изомеров (1R, 1'R) бесилата атракурия, а именно 1R - цис, 1'R - цис, 1R-цис, 1'R-транс и 1R-транс, 1'R - транс соотношении 58:34:6 соответственно.

д) 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридекамети- лен)-бис-(1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолин) метансульфотан (1R-цис, 1'R-цис-месилат атрикурия).

Смесь изомеров (1R, 1'R) - бесилат атрикурия (10 г), полученную на стадии г), растворили в дихлорметане (50 мл) и закачали в колонку для хроматографии 500 х 50 мм, сжатую в осевом направлении и заполненную 520 г неоднородной окиси кремния крупностью 20-45 мкм, причем колонку элюировали смесью дихлорметана, метилового спирта и метансульфокислоты (80: 20:0,5). Были собраны фракции элюата колонки и фракции, содержащие требуемый изомер 1R-цис, 1'R-цис, были объединены и промыты 10%-ным рассолом. Раствор дихлорметана подвергли выпариванию до сухого состояния, остаточное масло развели в воде, а значение pH раствора довели до 4,0 с помощью метансульфокислоты. Водный раствор лиофилизировали с целью получения соединения, указанного в заголовке (5 г), в форме белого твердого материала, который был определен как практически свободный от других оптических и геометрических изомеров соединения, представляя собой конкретно смесь с менее чем 5% по массе таких изомеров, в особенности менее 3% по массе соответствующего 1R-цис, 1'S-транс изомера и менее чем 0,3% по массе соответствующего 1R-цис, 1'R-транс изомера.

Пример 2. 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатри- децилен)-бис-(1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-вератрилизохинолин) бензосульфонат (1R-цис, 1'R-цис-бесилат атракурия).

Повторены стадии а), б), в) и г) примера 1. Продукт, полученный на стадии г), или отделили, как было описано, или подвергли хроматографии, как описано ниже.

Смесь изомеров (1R, 1'R) бесилата атракурия (1,5 г изомеров, выделенных на стадии г) или 3,5 г смеси, полученной в ходе реакции на стадии г), развели в дихлорметане (10 мл) и закачали в колонку для хроматографии 300 х 25 мм, сжатую в осевом направлении и заполненную 80 г окиси кремния в форме шариков диаметром 10 мкм, причем колонку элюировали смесью дихлорметана, метилового спирта и бензолсульфоновой кислоты (4000:500:0,25). Были собраны фракции элюата колонки, и фракции, содержащие требуемый изомер 1R-цис, 1'R-цис, были объединены и промыты 10%-ным рассолом или водой. Раствор дихлорметана подвергли выпариванию до сухого состояния, остаточное бесцветное масло развели в воде, а значение pH раствора довели до 4,0 с помошью бензолсульфоновой кислоты. Водный раствор лиофилировали с целью получения соединения, указанного в заголовке (0,5 г), в форме белого твердого материала, который был определен как практически свободный от других оптических и геометрических изомеров соединения, смесь с менее чем 5% по массе таких изомеров, в частности, менее 3% по массе соответствующего 1R-цис, 1'S-транс изомера и менее чем 0,3% по массе соответствующего 1R-цис, 1'R-транс изомера. Продукт, анализ которого был выполнен с помощью ¹H ЯМР (CDCl₃), оказался следующим: дельта 1,52 (м, 7CH₂-тридека), 1,63 (м, 6CH₂-тридека, 8CH₂-тридека), 2,84/м, 1/2-4CH₂, 1/2-CH₂-веритрил/, 3,15/м, 1/2-4CH₂/, 3,22/c, N CH₃/, 3,26/м, 2CH₂-тридека, 12CH₂-тридека/, 3,34/c, OCH₃/, 3,47/м, 1/2-3CH₂, 1/2-CH₂-вератрил/, 3,58/с, OCH₃/, 3,73/2c, OCH₃/, 3,84/м, 1/2-3CH₂/, 3,95-4,24/м, 5CH₂-тридека, 9CH₂-тридека, 1CH₂-тридека, 13CH₂-тридека/, 4,86/дд, J=3, 8Hz, 1H/, 5,87/c, 3H/, 6,36/дд, J=8, 2Hz, 6H-вератрил/, 6,42/д, J= 2Hz, 2H-вератрил/, 6,48/с, 5H/, 6,59/д, J= 8Hz, 5H-вератрил/, 7,24/м, мета- и пара бесилат/, 7,78 (ортобесилат).

В следующих примерах иллюстрируется фармацевтические составы согласно изобретению, в которых "активным ингредиентом является соль бесилата атракурия 1R-цис, 1'R-цис согласно изобретению.

Пример 3. Раствор для инъекций в разовых дозах.

Активный ингредиент - 50 мг Бензолсульфоновая кислота до pH - 3-4 Вода для инъекций для приготовления - 5 мл Активный ингредиент разводят в воде для инъекций, а величину pH полученного раствора регулируют с помощью кислоты. Раствор стерилизуют фильтрованием и заливают в стерильные 5 мл ампулы.

Пример 4. Многодозовый раствор для инъекций.

Активный ингредиент - 100 мл Бензолсульфоновая кислота до pH - 3-4
Бензиловый спирт - 90 мг
Вода для инъекций для приготовления - 10 мл
Активный ингредиент разводят в воде для инъекций, а величину pH полученного раствора регулируют с помощью кислоты. Раствор стерилизуют фильтрованием и заливают в стерильные 10 мл ампулы.

Пример 5. Раствор для инъекций, высушенный при минусовой температуре.

Активный ингредиент - 50 мг
Бензолсульфоновая кислота до pH - 3-4
Маннит - 62,5 мг
Вода для инъекций для приготовления - 2,5 мл
Активный ингредиент и маннит растворяют в воде для инъекций, а величину pH полученного раствора регулируют с помощью кислоты. Раствор стерилизуют фильтрованием и заливают в стерилизованные флаконы, после чего высушивают при минусовой температуре.

Оценка 1R-цис, 1'R-цис сульфоната месилата атракурия (обозначенного ниже как соединение А) осуществлялась так, как описано ниже, в соответствии с обычной смесью геометрических и оптических изомеров (обозначаемых ниже как бесилат атракурия), чтобы определить нервно-мышечную блокирующую способность и влияние на симпатическую и парасимпатическую блокаду.

Нечистокровных самцов кошек (Питомник Юго-Восточных лабораторий) массой 2,2 - 4,5 кг анестезировали смесью пентовероналнатрия, дозой 7 мг/кг и альфа-хлора-дозы, 80 мг/кг. Необходимый уровень анестезии поддерживался дополнительными дозами альфахлорадозы, вводимой по мере потребности в вену. Трахею каннулировали, и животных вентелировали в объеме 20 мл/кг комнатного воздуха посредством респирационного насоса "Харверд эпперэтс", настроенного на выполнение 20 ходов/мин. Артериальное давление крови измеряли через надрез в правой бедренной артерии, соединенный с преобразователем Р23 Стэтхэм. Сердечные сокращения определяли по ЭКГ с использованием тахографа Грэсс. Правый шейный симпатический нерв был обнаружен посредством надреза приблизительно в 5 см от верхнего шейного ганглия и помещен на экранированный двухполюсный платиновый электрод. Шейный симпатический нерв и блуждающий нерв раздражали на 10 с каждые 5 мин с помощью стимулятора S 88 Грэсс, используя следующие параметры: 20 Гц, длительность 0,5 мс и супрамаксимальное напряжение (10-15 В). Изометрические концентрации в третьем веке регистрировались во время напряжения в 5 г с помощью датчика смещения усилия FT.03 Грэсс и самописца Грэсс. Напряжение отдыха третьего века составило 5 г.

Левую заднюю конечность жестко закрепили, отделили голенное сухожилие и соединили его с датчиком смещения усилия FT.03 Грэсс. После сечения ствола седалищного нерва на экранированный биполярный платиновый электрод поместили малоберцовый нерв. Раздражения длительностью по 0,2 мс и при супрамаксимальном напряжении прикладывали к нерву с частотой 0,15 Гц, используя для этого стимулятор Грэсс S 88. Напряжение мышечного сокращения в передней голени подсчитывалось во время напряжения покоя нерва 50 Гр.

Испытываемые соединения развели в буферном солевом растворе при значении pH 3,0, выдержали на льду и затем ввели через канюлу в правой бедренной артерии. Температуру пищевода определяли с помощью терморезисторного датчика Еллоу Спрингс, а температуру внутренностей поддерживали в пределах от 37 до 38^oC с помощью теплового излучения. Все записи выполняли на многоканальном самописце Грэсс Модель 7. После завершения экспериментов котов умертвляли путем введения в вену насыщенного KCl или пентаверонал-натрия.

Значение ED₉₅ способности нервно-мышечного блокирования были рассчитаны по кривым эффекта.

Значения ED₅₀ и ED₂₅ для тормозящего эффекта соединений на соответственно стимулирование парасимпатического и симпатического нерва были рассчитаны аналогичным образом.

Результаты суммируются в таблице.

Формула изобретения

1. Физиологически приемлемая 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11- диоксо-4,10-диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7- диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолин галоидная, сульфатная, фосфатная, гидрофосфатная, ацетатная, пропионатная, сукцинантная, малеатная или органосульфонатная соль, по существу, свободная от других ее геометрических и оптических изомеров.

2. 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо- 4,10-диоксатридецилен)- бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1- вератрилизохинолиновая соль по п. 1 в смеси с менее, чем 5 мас. других ее геометрических и оптических изомеров.

3. 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридецилен)- бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолиновая соль по п. 2 в смеси с менее чем 2 мас. других ее геометрических и оптических изомеров.

4. 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10- диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4- тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолин органосульфонатная соль по любому из предыдущих пунктов.

5. 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридецилен)- бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолин мезилатная или бесилатная соль по п.4.

6. 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10- диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2- метил-1-вератрилизохинолин бесилатная соль по п.5.

7. Физиологически приемлемая соль 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11- диоксо-4,10-диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1- вератрилизохинолина по п.1 в качестве стимулятора нервно-мышечной блокады у животных.

8. Фармацевтическая композиция, стимулирующая нервно-мышечную блокаду, включающая активный ингредиент вместе с его фармацевтически приемлемым носителем, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента она содержит эффективное количество соли по любому из пп.1 6.

9. Фармацевтическая композиция по п.8, отличающаяся тем, что ее вводят путем инъекции или инфузии.

10. Способ получения физиологически приемлемой соли 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11-диоксо-4,10-диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1-вератрилизохинолина по п. 1, отличающийся тем, что смесь геометрических 1R, 1'R-изомеров соответствующей соли подвергают хроматографии.

11. Способ обеспечения нервно-мышечной блокады у животных путем введения активного вещества животному, отличающийся тем, что вводят путем инъекции соль 1R-цис, 1'R-цис-2,2'-(3,11- диоксо-4,10-диоксатридецилен)-бис-1,2,3,4-тетрагидро-6,7-диметокси-2-метил-1- вератрилизохинолина по п.4 в дозе 0,1 0,6 мг/кг.

РИСУНКИ

Рисунок 1