Способ диагностики злокачественных опухолей
Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к онкологии. Цель изобретения - повышение достоверности и обеспечение универсальности диагностики злокачественных опухолей. Для диагностики злокачественных опухолей по предлагаемому способу к 1 мл сыворотки (негемолизированной) крови наслаивают 1 мл цитохрома C (4 мг/мл), визуально наблюдают на поверхности этих жидкостей белое кольцо, по которому судят о реакции преципитации, смешивают указанные жидкости, определяют наличие низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C, по реакции преципитации и по соотношению низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C в пределах от 225 до 663 ед. плотности диагносцируют злокачественную опухоль. 1 табл.
Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к онкологии.
Проблема диагностики злокачественных новообразований является ключевой проблемой в онкологии, решение которой обеспечивает успешное лечение больных. Среди многочисленных и разнообразных способов диагностики злокачественных опухолей особое место занимает способы диагностики по крови, некоторые из которых основаны на использовании: лимфоблаков, обнаруживаемых в периферической крови больных и являющихся одним из ранних признаков острого лимфолейкоза (Абдулкадыров К.М. Ругаль В. И. Хронический зозинофильный миелолейкоз. Врачебное дело, 1983, N 5, с. 52-54); лимфоцитопении, которая является основным симптомом лимфогранулематоза (Иванушкин Е.Ф. и др. Нарушение клеточного иммунитета у детей, больных лимфогранулематозом, и возможности его коррекции. Труды II Московского международного института им. Н.И. Пирогова. М. 1981, с. 50-59); повышение СОЭ, отражающего нарушение белкового обмена в организме больных и наблюдающего при многих злокачественных опухолях (Ранняя диагностика злокачественных опухолей. М. 1984); анемии, которая является одним из частых признаков рака толстой и прямой кишки (Мельников Р.А. Современное состояние проблемы диагностики лечения рак прямой кишки. В книге: Диагностика и лечение рака прямой кишки. Труды научно-исследовательского института онкологии Минздрава СССР, Л. 1983, с. 5-10); фиброногена в плазме крови (авт. св. N 978.862, A 61 K 35/16, 1980); фибронопептида A, повышенный уровень которого в крови выявляется у больных раком головы и шеи, раком легких, толстой кишки и предстательной железы (Rickles F. R. и др. Abnormalities of blood coaqulation in patients with cancer. Cancer, 1983, vol. 51, N 2, p. 301-307); билирубина, соответствующее изменение которого является характерным клиническим проявлением рабдомиосаркомы желчных протоков (Ganes G.O. и др. Differential features of some unusual Eilary tumors. Gastronintest Radiol, 1982, vol. 7, N 7, p. 341-348); ЯМР релаксации в сыворотке крови: у больных со злокачественными опухолями обнаружено увеличение времени спинрешеточной релаксации в сыворотке крови (Ревокатов О.П. и др. ЯМР-релаксация в сыворотке крови человека и диагностика злокачественных новообразований. Биофизика, 1982, т. 27, N 2, с. 336-337); хемилюминесценции плазмы крови, изменение которой обнаруживается у больных хроническим лимфолейкозом, некоторыми вариантами острого лейкоза и лимфогранулематозом (Серкиз Я. И. Хриенко А.П. Диагностическое значение хемилюминесценции плазмы крови у онкологических больных. В кн. Первый Всесоюзный биологический съезд 1982, с. 167);титра антител к вирусу Эпштейна-Барр для диагностики скрытых форм рака носоглотки (Pearson G.R. Epstein Barr virus: Immunology. In: viral oncology. Ed. G. Kein. New York: Raun Press, 1980, p. 739-767);
альфафетопротеина в сыворотке крови для диагностики рака печени (Татаринов Ю. С. Эмбриональные и плацентарные белки как маркеры злокачественных опухолей. В кн. Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины. Труды II Московского медицинского института им. Н.И. Пирогова, М. 1979, с. 20-21);
коагуляции и фибринолиза крови (Диагностика изменений в системе свертывания крови и фибринолизе методом электрокоагулографии на этапах хирургического и комбинированного лечения онкологических больных для своевременной их коррекции. М. 1982, с. 6). Из известных способов диагностики злокачественных опухолей по крови наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики злокачественных опухолей (Татаринов Ю.С. Эмбриональные и плацентарные белки как маркеры злокачественных опухолей. В кн. Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины. Труды II Московского медицинского института им. Н.И. Пирогова, М. 1979, с. 20-21), который и выбран в качестве прототипа. Указанный способ основан на исследовании сыворотки крови обследуемого. При этом эмбриональные и плацентарные белки в сыворотке крови являются маркерами злокачественных опухолей. Высокая степень специфичности главная особенность таких маркеров новообразований. Так, наличие в сыворотке крови альфафетопротеина является признаком гепатоцелюлярного рака печени и опухолей желточного мешка, раково-эмбрионального антигена рака толстого кишечника, фетального сульфогликопротеина-рака желудка, онкофетального гликопротеина рака поджелудочной железы. Кроме того, данный способ, основанный на использовании указанных маркеров, не позволяет достоверно диагностировать злокачественные опухоли у 100% больных. Это объясняется тем, что при некоторых злокачественных опухолях (легкого, молочной железы, челюстей влагалища, прямой кишки и др.) возможны пропуски, так как они не имеют соответствующих маркеров. Целью изобретения является повышение достоверности и обеспечение универсальности диагностики злокачественных опухолей. Цель достигается тем, что к 1 мл сыворотки (негемолизированной) крови наслаивают 1 мл цитохрома C (4 мг/мл), визуально наблюдают на поверхности этих жидкостей белое кольцо, по которому судят о реакции преципитации, смешивают указанные жидкости, определяют наличие низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C, по реакции преципитации и по соотношению низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C определяют наличие онкобелка в сыворотке крови, который является признаком злокачественной опухоли у обследуемого. Диагностику злокачественных опухолей по предлагаемому способу осуществляют следующим образом. К 1 мл сыворотки (негемолизированной) крови, взятой натощак и лишенной форменных элементов, наслаивают 1 мл цитохрома C (4 мг/мл). Визуально наблюдают на поверхности этих жидкостей белое кольцо, которое указывает на наличие реакции преципитации. При этом указанное кольцо наблюдают через 20-30 мин только в сыворотке онкологических больных. 3) Смешивают указанные жидкости. 4) Определяют, например, в спектрофотометре наличие низкоспиновой формы цитохрома C (542 нм) и высокоспиновой формы цитохрома C (380 и 620 нм). 5) По реакции преципитации и по соотношению низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C определяют наличие онкобелка в сыворотке крови, который является признаком злокачественной опухоли у обследуемого. Многолетние исследования под руководством доктора медицинских наук профессора Манойлова С. Е. показали, что под влиянием канцерогенных агентов, независимо от их физико-химической природы (проникающая-ионизирующая радиация, химические канцерогены, онкобелок и т.д.) селективно необратимо поражаются цитохромные системы, в частности цитохром C. При этом происходит необратимый переход из низкоспинового состояния (физиологически активного) в высокоспиновое состояние (физиологически неактивное) цитохромов, т.е. происходит процесс окисления атомов железа, следовательно, в клетках нарушаются процессы тканевого дыхания, процессы, связанные с энергетическим обменом. В этом случае в клетках наступает необратимая гипоксия, приводящая к снижению энергетического обмена и создающая необходимые условия для биосинтеза так называемого онкобелка (туморнуклеопротеида) и к образованию опухолевой клетки. Исследования показали, что для синтеза онкобелка количества энергии затрачивается меньше, чем для синтеза нормальных белков. Экспериментальный материал достаточно четко показал на зависимость между онкобелками и цитохромами и особенно цитохромом C. В силу высокой мембранной проницаемости опухолевых клеток онкобелок попадает в кровь и разносится по всему организму. Онкобелок обладает канцерогенными свойствами аналогично онковирусу, он может проникать в нормальные клетки и вызывать опухоль. Для доказательства того, что онкобелок обладает свойствами онковируса, он был выделен из клеток саркомы Плисса и введен интактным крысам. При этом была получена саркома Плисса. Наличие онкобелка в сыворотке крови крыс носителей опухоли впервые было обнаружено в лаборатории Манойлова С.Е. На основании экспериментальных данных был разработан метод обнаружения онкобелка в сыворотке онкологических больных с помощью экзогенного цитохрома C. В начале были проведены многочисленные эксперименты с сывороткой крови здоровых людей (доноров). В результате этой работы были определены средние величины окислительно-восстановительной способности сыворотки по отношению к экзогенному цитохрому C. Степень восстанавливаемости была от 150 до 200 единиц. Как правило цитохром C с такими сыворотками не образовывает белое кольцо. Затем были исследованы сыворотки крови раковых больных с различными локализациями. Сыворотка крови больных опухолевыми заболеваниями образовывала белое кольцо и в значительной степени восстанавливала цитохром C. Была выявлена следующая шкала:
от 220-250 единиц +
от 250-300 единиц ++
от 300-350 единиц +++
от 350- и выше ++++
Помимо сыворотки крови здоровых людей были исследованы сыворотки некоторых неопухолевых заболеваний (воспаление легкого, язва желудка, гастриты, сердечные заболевания и т.д.). Во всех случаях, за исключением ранних стадий ишемической болезни и инфаркта миокарда, реакция была в пределах здоровых людей. При сердечных заболеваниях реакция оценивалась на один + и в некоторых случаях на два ++. Соотношения низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохром C, полученные экспериментально, приведены в таблице. Следует отметить что система диагностики злокачественных опухолей включает два основных этапа. Вначале простыми и недорогостоящими способами проводят предварительную оценку онкологического статуса обследуемого. Пи подозрении на наличие злокачественной опухоли обследуемого направляют на второй этап более детальное обследование на предмет подтверждения и уточнения диагноза злокачественной опухоли. На этом этапе обосновано применение сложных дорогостоящих и травматических способов исследования (цитологического и гистологического способов оценки клеток и тканей). Предлагаемый способ обеспечивает повышение достоверности диагностики злокачественных опухолей и одновременно совмещает два вышеуказанных этапа, не используя сложных дорогостоящих и травматических способов исследования. Это достигается за счет использования в качестве признака заболевания онкобелка в крови обследуемого, который является универсальным признаком для всех злокачественных опухолей и, соединяясь с антигеном (цитохромом C), приводит к неспецифической иммунобиологической реакции преципитации. По мере эффективности лечения больных сыворотка крови дает те же результаты, что и сыворотка здоровых людей. Следовательно, предлагаемый способ позволяет также судить об эффективности лечения.
Формула изобретения
РИСУНКИ
Рисунок 1