Способ количественного определения высших карбоновых кислот и n-ацилпроизводных аминокислот на их основе

 

Изобретение относится к области аналитической химии. Сущность изобретения состоит в последовательной обработке анализируемой пробы диоксаном и сульфатом аммония, метилированием диазометаном и хроматографированием полученной смеси, в обработке анализируемой пробы раствором фосфорной кислоты до рН 3, диоксаном, насыщенным раствором сульфата аммония, отбирают аликвотную часть органической фазы, обрабатывают ее сначала метанолом, затем метилируют диазометаном и хроматографируют полученную смесь.

(51)5 G 01 N 31/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

О

О (Л 4

Комитет Российской Федерации по патентам и товарнымзнакам (21) 5036374/04 (22) 25.02.92 (46) 07.09.93. Бюл. N - 33-36 (71) Научно-производственное товарищество "Протеин-ПАВ" (72) Михалкин А. П., Станьков И. Н., Грибов

Э. Л. (73) Научно-производственное товарищество "Протеин-ПАВ" (56) Суноэова Е.В., Трубников В,И. и Сакодынский К.Н. Газовая хроматография аминокислот, М.: Наука, 1976.

Михалкин А.П. и Степанова Л,П. Определение высших карбоновых кислот в продуктах ацилирования 6-амино-гексановой кислоты методом гаэожидкостной хроматографии. Научно-технический реферат. сб, сер. горнохимическая промышленность, вып. 2, М.. НИИТЭХим, 1990.

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способу хроматографического разделения высших карбоновых кислот(ВКК) и продуктов ацилирования аминокислот и/или смесей аминокислот укаэанными карбоновыми кислотами.

Известен способ хроматографического разделения ВКК и аминокислот с переводом их в относительно легколетучие производные по карбоксильной и аминогруппе. При этом время удерживания производного глицина в виде н-пентилового эфира N-гептаноилглицина с общим числом атомом углерода в соединении 14 составляет 29,4 мин.

„„RU„„ 2000567 С (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЫСШИХ КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ И N-АЦИЛПРОИЗВОДНЫХ

АМИНОКИСЛОТ НА ИХ ОСНОВЕ (57) Изобретение относится к области аналитической химии. Сущность изобретения состоит в последовательной обработке анализируемой пробы диоксаном и сульфатом аммония, метилированием диаэометаном и хроматографированием полученной смеси, в обработке анализируемой пробы раствором фосфорной кислоты до рН 3, диоксаном, насыщенным раствором сульфата аммония, отбирают аликвотную часть органической фазы, обрабатывают ее сначала метанолом, затем метилируют диазометаном и хроматографируют полученную смесь.

Известен способ определения ВКК в продуктах ацилирования 6-аминогексановой кислоты хроматографическим разделением анализируемой пробы на хромосорбе с полиэтиленгликольсукцинатом, активированным ортофосфорной кислотой. Однако данный метод определения ВКК не дает возможности одновременно при этом определять и N-au nnpo s op e аминокислот, Данный способ состоит в том, что анализируемую пробу (0,5 г) обрабатывают диоксаном (2 мл), насыщенным раствором сульфата аммония (1 мл), сильно встряхивают (2-3 мин) и после расслоения отбирают верхний слой. добавляют метанол и раствор диазометана в диоксане.

2000567

Таблица 1 телень иаелененил /Ат,/ и коэффициенты традуироеочные /Kcr/ инлиаилуальных карбоноеых кислот етаном

Сла

О. 63

0,63

0.47

0,58

0.54 0.67

0.51

0.59

0.50 0.66

0.48

0,Ла

05 Г 063

Полноту извлечения ВКК и N-ациламинокислот определяют путем сравнения коэффициентов стандартизации (калибровочных коэффициентов), полученных на смесях индивидуальных соединений после их извлечения из водных растворов с последующим высаливанием (сульфатом аммония) и непосредственно в гидрофильном растворителе.

Количественное определение анализируемой смеси проводили по методу внутреннего стандарта (триптопилфосфата) с использованием пламенно-иониэационного детектора на стеклянной колонке (100х0,3 см), заполненной инертным супером и 5%

ОУ-17, при температуре колонки 110240 С (5" С/л ин) и испарителя — 300 С.

Пример. Искусственно приготовленные смеси BKK(Cg — Сщ;2) — система А, реальных продуктов ацилирования гидролизатов белка, содержащих свободные L-аминокислоты и короткие олигопептиды, указанными карбоновыми кислотами Cg С1в;г (система

Б) и смеси продуктов ацилирования гидролиэатов белка кислотами коксового масла, в основном представленными карбоновыми кислотами Ciz-С34, в смеси с N-пальмитоилаланином, N-стеароилглицином и N-стеароала/1анином (система В) последовательно обрабатывают как описано диоксаном, насыщенным раствором сульфата аммония и метилируют диазометаном.

Массовую долю компонентов анализируемых смесей определяли как минимум по двум навескам и трем вводам пробы из каждой навески в испаритель хроматографа, Расчет доли компонентов проводили по методу внутреннего стандарта (трипропилфосфат) с оценкой коэффициентов стандартизации. Данные экспериментально подтвержденных результатов представлены в табл, 1-3.

Формула изобретения

Способ количественного определения высших карбоновых кислот и N-ацилпроизводных аминокислот на их основе, включающий хроматографирование, о т л и ч а ю20 шийся тем, что анализируемую пробу последовательно обрабатывают раствором фосфорной кислоты до значения рН 3. диоксаном, насыщенным раствором сульфата аммония, отбирают аликвотную часть органической фазы, обрабатывают ее сначала метанолом, затем метилируют диазометаном и хроматографированию подвергают полученную смесь.

2000567

Таблица 2

Воспроиэводимость результатов определения массовых долей карбоновых кислот в продуктах ацилирования гидролизата белка

Таблица 3

Достоверность результатов методики определения массовых долей карбоновых кислот в продуктах ацилирования гидролизата белка

Тираж Подписное

НПО " Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Заказ 3077

Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул,Гагарина, 101

Составитель С.Хованская

Редактор А.Кучеряковэ Техред М,Моргентал Корректор М.Максимишинец