Способ оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний

 

Использование: в области медицины, а именно в иммунологии. Сущность изобретения: в цельную кровь пациента вводят взвесь микробов брюшного тифа, после чего смесь центрифугируют и фотоколориметрируют при длине волны 364 нм, измеряют оптическую плотность супернатанта и по калибровочной кривой, отражающей корреляционную зависимость между количеством микробных тел и оптической плотностью в %, определяют количество микробных тел, блокированных гуморальными и клеточными факторами, и при значении показателя менее 100 млн микробных тел оценивают лечение как эффективное, а при значении более 100 млн микробных тел - неэффективное , Способ позволяет повысить точность оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний. Способ прост в исполнении и требует при исследовании небольшой затраты времени.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!9) () 1) (я)з 6 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕН.ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4852150/14 (22) 18.06:90 (46) 07.05.93. Бюл. Рл 17 (71) Институт, экологии и генетики.микроорганизмов Уральского отделения АН СССР (72) В.А. Черешнев, В,П..Рочев и Н.Г. Смердова (56) Подопригора Г.И. и др. Современные методы изучения фагоцитарной активности лейкбцитов ln чего. - Журн. микробил., 1976, ЬЬ 1, с. 19-25. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ И СОМАТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (57) Использование: в области медицины, а именно в иммунологии. Сущность изобретения: в цельную кровь пациента вводят

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности лечения инфекционных и воматических заболеваний.

Цель изобретения — повышение точности способа и ускорение исследований, Способ осуществляется следующим образом.

Исследуют у больных до и после лечения антимикробную активность цельной крови по суммарной способности ее клеточных и гуморальных факторов одномоментно блокировать активность микробов.

При исследовании антимикробной ак.тивности крови используют взвеси коммерческих, стандартизированных микробных взвесь микробов брюшного тифа, после чего смесь центрифуги руют и фотоколориметрируют при длине волны 364 нм, измеряют оптическую плотность супернатанта и по калибровочной кривой, отражающей корреляционную зависимость между количеством микробных тел и оптической плотностью в („определяют количество микробных тел, блокированных гуморальными и клеточными факторами, и при значении показателя менее 100 млн микробных тел оценивают лечение как эффективное, а при значении более 100 млн микробных тел — не эффективное. Способ позволяет повысить точность оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний. Способ прост в исполнении и требует при исследовании небольшой затраты времени. диагностикумов: сальмонелл брюшного тифа, паратифи В, шигелл Зонне, Ньюкестл,, фь

Флекснера ТашНИИ ВС и др. ; С

Взвесь бактериального диагностикума „ Ц с содержанием в 1 мл 3 млрд микробных тел тщательно смешивают и разводят в два и четыре раза. В объеме 0,25 мл исходную взвесь микробов и различные ее разведения переносят доэатором в пробирки и разводят физраствором натрия хлорида до объема

2,25 мл, контрольной пробой является физраствор с аналогичным объемом. Определяют оптическую плотность в процентах фотометром фотоэлектрическим (КФК-2, КФ -3) с использованием лунок объемом

2,25 мл и длины волны 227-300 нм, 1814070

По результатам исследований составляют шкалу, позволяющую определить в 1 (, оптической плотности концентрацию микробов в 1 млн микробных тел. В коммерческих бактериальных диагностикумах с содержанием в 1 мл 3 млрд микробных тел в 1 определяется, как правило, 12 — 29 млн микробных тел.

С этой целью к 0,10 — 0,25 мл крови, взятой из пальца или вены, стабилизированной гепарином из расчета 50 АЕ/мл, добавляют

0,25 мл взвесь микробов с содержанием

200-400 млн микробных тел, к контрольной пробе крови приливают аналогичное количество физраствора. Смесь смешивают и выдерживают при 37 С в течение 15 мин, i центрифугируют 5 мин. Супернатант смеси в количестве 0.25 мл переносят в пробирки, в которые наливают 2,0 мл физраствора, определяют оптическую плотность опытной и контрольной проб крови.

Из исходной оптической плотности микробов вычисляют сумму оптической плотности микробов в супернатанте и коэффициента поправки и получают величину микробов в процентах, блокированных кровью, Полученный показатель умножают на количество микробов, содержащихся в

1 оптической плотности, и получают величину антимикробной активности крови в млн микробных тел.

Коэффициент поправки для конкретного микробного диагностикума в серийных исследованиях — величина постоянная. Она зависит от способности разведенной микробной взвеси оседать при центрифугировании в смеси с кровью, Для различных взвесей микробных диагностикумов эта величина составляет от 7 до 20%, Пример 1. Применение способа для оценки эффективности лечения больных детей и подростков с инфекционными воспалительными процессами.

Исследование проведено с кровью 17 детей и подростков в возрасте от 1 года 5 месяцев до 16 лет с острыми воспалительными процессами в форме абсцессов и флегмон челюстно-лицевой области до и после их лечения хирургическим и консервативным способами; пенициллином, ампициллином, оксациллином, витаминаМи группы В, аскорбиновой кислотой и противовоспалительными препаратами, Установлено, что до начала лечения у больных лиц средняя величина их антимикробной активности крови 99 млн микробных тел, индивидуальные колебания этой величины очень существенны и колеблются от 24 до 168 млн микробных тел, С учетом исходной антимикробной активности крови всех обследуемых лиц делили на две группы. К 1-й группе отнесли лиц с величиной, составляющей 84 млн микробных тел и ниже, к 2-й — с величиной более 84.

После лечения детей, по средним данным, отмечается склонность к повышению антимикробной активности крови — на 7

10 (Р>0,05). В то же время у детей 1-й группы с низкой исходной неспецифической защитой организма от микробов отмечается значительное повышение уровня антимикробной активности крови: на 70 (от 33 до 133%), 15 которое носит статистически достоверный характер (Р<0,01), И, наоборот, у детей 2-й группы отмечается снижение этого показателя крови на -21% (Р<0,01), Таким образом, результаты исследова20 .ний, приведенные в этом примере, подтверждают возможность использования заявляемого способа для определения индивидуальной разницы неспецифической защиты организма от микробов, обьектив25 ного контроля за эффективностью лечения больных лиц с инфекционными заболеваниями и прогнозирования изменения неспецифической резистентности организма от микробов при лечении больных.

30 Пример 2. Применение способа для оценки эффективности лечения больных детей с гемангиомой.

Использование антимикробной активности крови проведено у 11 детей в возрасте

35 от 6 месяцев до 4 лет с диагнозом гемангиома челюстно-лицевой области до и после их лечения преднизолоном в терапевтических дозах. который вводили в область гемангиомы, 40 Выявлено, что средняя исходная антимикробная активность крови у детей составляет 104 млн микробных тел, индивидуальные колебания этой величины составляют от 42 до 140 млн микробных тел. К 1-й

45 группе отнесли детей с низкой исходной антимикробной активностью крови — 84 и ниже млн микробных тел, к 2-й — с более 84.

После лечения у больных детей средняя величина антимикробной активности крови

50 снижается на3%, В тоже время утрехдетей с низкой:исходной антимикробной активно.. стью крови отмечается повышение ее величины на 67% (от 50 до 200%). И, наоборот, у детей 2-й группы с высокой исходной анти55 микробной активностью крови отмечается снижение ее величины, по средним данным, на -19% (Р<0,01), Таким образом, результаты исследований полностью подтверждают возможность объективного контроля за эффективностью

1814070

10

25 буется -не более 5 мин

35

45

50 лечения и прогнозирования изменения индивидуального уровня неспецифической реэистентности организма при лечении соматических заболеваний. Усиление у трех детей антимикробной активности крови с низкой ее исходной величиной не противоречит данным литературы, свидетельствующим от иммуностимулирующих свойствах глюкокортикоидов в относительно небольших дозах.

П ри м е р 3. Применение способа для оценки эффективности лечения детей с расщелиной верхней губы, Исследования проведены с кровью пяти детей в возрасте от 1 года 4 месяцев до 13 лет с диагнозом: расщелина верхней губы.

Антимикробную активность крови изучали до и после лечения детей оперативным способом и витаминами группы В. аскорбиновой кислотой (группа иммуностимуляторов), антибиотиками — пенициллином, оксациллином и другими препаратами, Установлено, что средняя исходная энтимикробная активность крови составляет

103 млн микробных тел. индивидуалиуие ее величины колеблются от 56 до 194.::.:Oocyte лечения отмечается повышение средней величины антимикробной активностй крови на 337;. В то же время у детей с низкой и средней исходной антимикробной активностью крови отмечается значительное повышение ее величины — от 57 до 150ф,. И, наоборот, у одного больного ребенка с высокой исходной антимикробной активностью крови, составляющей 194 млн микробных тел, отмечается снижение ее величины на -35 . В целом по группе этих детей прослеживается высокая обратная корреляция между исходной антимикробной активностью крови и повышением ее величины (r = 0,97 + 0,03, Р < 0,001).

Результаты этих исследований полностью подтверждают наличие обратной зависимости уровня повышения неспецифической защиты организма от микробов от ее исходной величины при лечении больных инфекционными и соматическими заболеваниями, изложенные в первых двух примерах.

Таким образом, способ позволяет оценить исходную величину неспецифической .защиты организма от микробов, проводить оценку эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний и прогнозировать изменение индивидуального уровня неспецифической резистентности организма от микробов у больных до начала их лечения.

Преимущества предлагаемого способа оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний в сравнении со способом определения фагоцитэрной активности лейкоцитов заключаются в упрощении и повышении точности.

Установлена высокая точность способа — процент средней ошибки одного измерения не превышает 6. Воспроиэводимость способа практически 1007ь, что объясняется объективностью оценки результатов исследований.

В то же время в сравнении с предлагаемым способом ме одика оценки фагоцитарной активноСти лейкоцитов в связи с трудностью дифференцировки объектов фагоцитоза, адсорбированных на поверхности лейкоцитов от фагоцитированных, а также с субъективностью оценки результатов исследований дает около 25$ ошибки, отличается низкой воспроизводимостью.

Существенным преимуществом предлагаемого способа в.сравнении с методикой оценки фагоцитоза является значительное упрощение способа и его экспрессность.

Результаты оценки неспецифической защиты организма от микробов известны сразу же после определения антимикробной активности крови, нэ исследование величины которой при серийных исследованиях треВ то же время для оценки фагоцитоза необходимо изготовление мазков, их фиксация и окраска с последующим подсчетом уровня фэгоцитоза, а для оценки результатов исследований фагоцитоза в стадии подсчета необходимо значительное количество времени — от 30 мин до 1 ч.

Предлагаемый способ отличается также высокой экономичностью — при исследовании не требуются предметные стекла, реактивы для фиксации и окраски мазков.

Значительным преимуществом предлагаемого способа является и то, что методика антимикробной активности крови отражает одномоментно суммарный результат взаимодействия и клеточных.(фагоцитов, лимфоцитов и эритроцитов) и гуморальных (антител, комплемента) факторов крови, их способность блокировать, агглютинировать, фагоцитировать микробы, а роль этих факторов а защите организма от микробов общепризнана. Величина антимикробной активности крови составлена на 50ф, из количества блокированных микробов гуморальными и на 50 клеточными факторами крови. Иэ этой величины на долю фагоцитоза приходится не более 5 из всех блокированных микробов.

В то же время способ определения фагоцитарной активности лейкоцитов в основ-.

1814070

Формула изобретения

Способ оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний путем введения в цельную кровь пациента

Составитель В. Рочев

Техред М.Моргентал

Корректор М, Максимишинец

Редактор Л. Волкова

Заказ 1826 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская иаб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Ф ном отражает активность 100-200 фагоцитов крови.

С учетом высокой эффективности, точности и простоты исполнения изобретение быть может применено как экспресс-способ для определения индивидуальной неспецифической защиты организма от микробов, оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний, прогнозирования изменения неспецифической защиты организма от микробов у больных до начала их лечения и в других. областях медицины. взвеси микробов брющного тифа с последующим исследованием реакции их взаимодействия, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности способа и уско5 рения исследования, смесь дополнительно центрифугируют. после чего полученный су. пернатант фотоколориметрируют при длине волны 364 нм, измеряют оптическую плотность супернатанта. и по калибровочной

10 кривой, отражающей корреляционную зависимость между количеством микробных тел и оптической плотностью в, определяют количество микробных тел. блокированных гуморальными и клеточными факторами и

15 при значении показателя менее 100 млн микробйых тел оценивают лечение как эффективное, а при значении более 100 млн микробных тел — не эффективное.