Патент ссср 181588

I8I 588

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Кл. 6а, 14

30Ь, 6

Заявлено 02.1!1.1965 (№ 946030/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 21,IV.1966. Бюллетень № 10

Дата опубликования описания 7 т П.1966

Комитет оо двлатс изобретений и открытий ори Совете Министров

СССР

МПК С 12k

А 61k

УДК 663.131:582.282

123.4 (088.8) l

P. Я. Карклинь, В. К. Гайле, Г. А. Витола, Л. П. Peulrapul - <-"">), ä><

А. К, Пробок, Б. Я. Кестере и В. Я. Л

Авторы изобретения

Заявитель

ШТАММ ASPFRGILLUS TERREUS ЭУ-376

30

Известен штамм Aspergillus terreus 718/9 для производства итаконовой кислоты из саха розы.

Предлагаемый штамм Aspergillus terreus

ЭУ-376 отличается от известного более высокой активностью образования итаконовой кислоты из сахарозы и значительно более высокой устойчивостью к микроорганизмам, инфицирующим бродильные среды. Кроме того, данный штамм обеспечивает повышенный выход итаконовой кислоты (до 400 О), Штамм Aspergillus terreus ЭУ-376 получен путем комбинированного воздействия этилениламина и ультрафиолетовых лучей на исходный штамм 718/9.

Морфологические свойства штамма,ЭУ-376 изучались у культуры, выращенной при 35 С на среде Мойера — Когхила.

Для изучения культуральных свойств штамма и характера роста использовались.питательные среды, применяемые для культивирования Aspergillus terreus: — среда Мойера—

Когхила, среда Чапека — Докса, сусло — агар (солодовая среда), картофель (естественная среда) и специальные среды, употребляемые для получения итаконовой кислоты. На среде

Мойера — Когхила изучалось строение гигантской колонии на седьмые сутки.

Состав питательных сред

1. Минеральная среда Мойера — Когхила (в г):

Лактоза 10

Глюкоза 5

5 Фосфорнокислый калий, однозамещенный 0,06

Сернокислый магний 0,05

Хлористый калий 0,1

Хлористый натрий 5

Азотнокислый калий 3

Кукурузный экстракт 3 ил

Виннокислое железо 0,005

Сернокислая медь 0,004

Сернокислый марганец 0,005

Агар 20

Об ьем доводят дистиллированной водой до l л.

2. Специальные среды для получения итаконовой кислоты

При поверхностном способе культивирования

А. Питательная среда (в г):

Сахароза (кристаллический сахар) 70

25 Сернокислый магний 4,4

Азотнокислый аммоний 2,5

Хлористый натрий 0,4

Сернокислый цинк 0,0044

Кукурузный экстракт 2

Азотная кислота

181588

2,7

2 для установления рН=2,4 —:2,5

Объем доводят водой до 1 л.

Б. Бродильная среда (в г):

Сахароза (кристаллический сахар) 70

Сернокислый магний 4,4

Азотная кислота для установления рН=2,2 —:2,5

Объем доводят водой до 1 л.

При глубинном способе культивирования

А. Среда для подращивания мицелия (в г):

Сахароза (кристаллический сахар) 60

Сернокислый аммоний 2,7

Сернокислый магний 6

Хлористый натрий 0,4

Сернокислый цинк 0,0044

Кукурузный экстракт 5,5

Азотная кислота для установления рН=2,7 — 3,0

Объем доводят водой до 1 л.

Б, Бродильная среда (в г):

Сахароза (кристаллический сахар)

Сернокислый аммоний

Сернокислый магний

Азотная кислота для установления рН=2,0 — 2,2

Объем доводят водой до 1 л.

Антагонистические свойства штамма ЭУ-376 наряду с исходным штаммом изучались по огношению к микроорганизмам, встречающимся в производстве итаконовой кислоты (посторонние плесневые грибки и бактерии). В опытах применялись следующие питательные среды: для выращивания плесневых грибков — сусло — агар и среда Мойера — Когхила, для бактерий — мясо-,пептонный агар. Густой посев

Aspergillus terreus на среде Мойера — Когхила выдерживался в течение трех суток при 35 С.

Затем из газона роста Aspergillus terreus вырезались блоки диаметром 1,5 см, которые помещались на поверхность питательной среды в чашках Петри, засеянной испытуемым микроорганизмом. После 24 час чашки просматривались и определялись наличие и величина зоны, на которой отсутствовал рост микроорганизма.

Предлагаемый штамм характеризуется следующими морфологокультуральными признаками:

1. Морфологические свойства. Среда Мойера — Когхила. У семисуточной культуры конидиальные головки слегка вытянутой формы диаметром 30 — 50 мк.

Пузырьки (визикулы) грушевидной формы диаметром 16 — 21 мк; 2/3 визикулы покрыты стеригмами. Стеригмы двуслойные. Длина стеригм первого порядка 6 — 9 лк, второго — 4 —6 лк. Конидии гладкие, круглые, их средний диаметр 2,8 лк, Длина конидиеносцев 140—

220 мк, диаметр 4,5 — 7 мк. Гифы двухсуточной культуры тонкие, диаметром 2,8 — 4,2 мк.

2. Культуральные свойства. Семисуточная гигантская колония, выращенная на среде

4

Мойера — Когхила, имеет круглую форму, диаметром 8 сл. Край колонии, лишенный зрелого конидиеношения, 0,4 см. Конидиеносцы низкие, конидии песочного цвета. Продолжительность созревания конидий 10 — 12 дней при

30" C.

Рост мицелия штамма ЭУ-376 на различных питательных средах.

Минеральная среда. Среда Моиера — Когхила. Субстратный мицелий очень тонкий, гладкий. В начале развития бесцветный, затем светло-коричневого цвета. Воздушного мицелия нет. Конидии песочного цвета.

Среда Чалека — Докса. Субстратный мицелий средней величины, складчатый. В начале развития бесцветный, затем бурый со слабо-желтоватым оттенком.

Органическая среда. Сусло — агар (солодовая среда). Субстратный мицелий средней толщины. В субстрате образуется черно-коричневый пигмент. Имеется воздушный мицелий.

Естественная среда. Картофельный ломтик.

Субстратный мицелий средней толщины, слабо-желтый,.конидии песочного цвета.

Синтетическая среда, употребляемая для получения итаконовой кислоты. Субстратный мицелий тонкий, складчатый, бесцветный. В конце цикла подошва мицелия становится буроватой и в субстрате образуется бурый пигмент. Мицелий эластичный, конидии не образуются или образуются очень мало.

3. Антагонистические свойства. Aspergil 1 us

terreus ЭУ-376 — слабый антагонист в отношении Вас. mesentericus, Вас. megatherium, Bact. со11.

В производственных условиях мицелий

Aspergillus terreus ЭУ-376 формируется быстрее, чем у штамма 718/9, и это благоприятствует борьбе с инфекцией.

4. Сбраживание сахарозы. Aspergillus terreus ЭУ-376 хорошо сбраживает сахарозу при поверхностном и глубинном способах культивирования.

Предмет изобретения

Штамм Aspergillus terreus ЭУ-376.

Минеральная среда. Среда Мойера — Когхила. Субстратный мицелии очень тонкий, гладкий. В начале развития бесцветный, затем светло-коричневого цвета. Воздушного мицслия нет. Конидии песочного цвета.

Среда Чапека — Докса. Субстратный мицелий средней величины, складчатый. В начале развития бесцветный, затем бурый со слабожелтоватым оттенком.

Органическая среда. Сусло †аг. Субстратный мицелий средней толщины, В субстрате образуется черно-коричневый пигмент.

Имеется воздушный мнцелий.

Естественная среда. Картофельный ломтик.

Субстратный мицелий средней толщины, слаоо-желтый, конидии песочного цвета.

Синтетическая среда, употребляемая для получения итаконовой кислоты. Субстратный

181588

Составитель В. Нигкегородцева

Редактор P. С, Чистова Техред Л. К. Ткаченко Корректоры; М. П. Ромашова и О. Б. Тюрина

Заказ !632,2 Тираж 820 Формат бум. 60 ; (90 /s Объем 0,27 изд. л Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 мицелий тонкий, складчатый, бесцветный.

B конце цикла подошва мицелия становится буроватой и в субстрате образуется бурый пигмент. Мицелий эластичный, конидии не образуются или образуются очень мало, Морфологические свойства. Среда Мойера — Когхила. У семисуточной культуры конидиальные головки слегка вытянутой формы диаметром 30 — 50 лlK. Пузырьки (визикулы) грушевидной формы диаметром 16 — 21 ли.;

2/3 визикулы покрыты стеригмами. Стеригмы двуслойные. Длина стеригм первого порядка

6 — 9 лк, второго — 4 — 6 л!к. Конидии гладкие, круглые, их средний диаметр 2,8 ик. Длина конидиеносцев 140 — 220 лк, диаметр 4,5 — 7 мк.

Г ифы двухсуточной культуры тонкие, диаметром 2,8 — 4,2 мк.

Культуральные свойства. Семисуточная гигантская колония, выращенная на среде Мойера — Когхила, имеет круглую форму диаметром 8 см. Край колонии, лишенный зрелого конидиеношения, 0,4 сл, конидиеносцы низкие, конидии песочного цвета. Продолжительность созревания конидий 10 — 12 дней при 30оС, Антагонистические свойства. Aspergillus

terreus ЭУ-376 — слабый антагонист в отношении Вас. mesentericus, Вас. megatherium, Baci. со11.

В производственных условиях мицелий штамма,ЭУ-376 формируется быстро, что благоприятствует борьбе с инфекцией.

Сбраживание сахарозы. Штамм ЭУ-376 хорошо сбраживает сахарозу при поверхностном и глубинном способах культивирования.