Штамм вируса гриппа а(h3n2) для приготовления диагностических препаратов
Использование: штамм вируса гриппа А (НЗ N 2) - А (Караганда) 398/90, применяемый для приготовления диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм (Ш) вируса гриппа А/Караганда/398/90 представляет собой дрейф-вариант прото-. типного штамма А/Сычуань/2/87 (НЗ N 2). Вирус хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37° С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 Ig ЭИДбо/0,2 мл. Ш хорошо агглютинирует эритроциты кур, слабее - морской свинки, совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади и крупного рогатого скота, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей , обладает низкой гемагглютинируеющей активностью и высокой иммуногенностью. Ш А/Караганда/398/90 - ингибиторезистентный. В состав гемагглютинина входят Н3.10 и Н3.16 детерминанты. Положительный эффект: Ш Ф/Караганда/398/90 может быть использован для производства диагностических препаратов , предназначенных для идентификации вновь выделенных вирусов гриппа и обнаружения антител. 5 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 7/00
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 1
iJQ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4911849/13 (22) 13.02.91 . (46) 23.01,93. Бюл, N. 3 (71) Институт микробиологии и вирусологии
АН КазССР (72) М.Х.Саятов, Л,И,Шахворостова, И,Л. Колыванова, Е.И. Исаева и M,È;Öâåòêoâa (56) Luzyanlna Т.Y. Golubev D.B. Ivanova N,A.
et al. Ann, Microbiology, 1975, — 126  — P.
461-470 Styk В., Kostolansky F. et ai„Acta
virol., 1986, М 3, P 220 — 226, (54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А (H3 N 2)
ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование: штамм вируса гриппа А (H3 N 2) — А (Караганда) 398/90, применяемый для приготовления диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм (Ш) вируса гриппа А/Караганда/398/90 представляет собой дрейф-вариант протоИзобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения диагностикума вируса гриппа.
: B настоящее время особое внимание обращает на себя все усиливающаяся гетерогенность вирусной популяции сероподтипа А (H3 N 2) на фоне длительной циркуляции его в популяциии человека (Гендон IO.3., Климов А.И., Дреннер Л: и др. . Сравнительный анализ геномов эпидемических штаммов вирусов гриппа // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1984, М 12, с. 24-29; Лузянина
Т.Я., Гринбаум Е.Б., Юхнова Л.Г. и др. Лабораторная характеристика вирусов гриппа А (НЗ N 2) возбудителей эпидемии 1983 r. s
„,. Ж„„1789561 А1 типного штамма А/Сычуань/2/87 (H3 N 2).
Вирус хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37 С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 lg ЭИДБо/0,2 мл.
Ш хорошо агглютинирует эритроциты кур, слабее — морской свинки, совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади и крупного рогатого скота, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой гемагглютинируеющей активностью и высокой иммуногенностью, Ш А/Караганда/398/90
- ингибиторезистентный, В состав гемагг-. лютинина входят Н3.10 и Н3.16 детерми- нанты. Положительный эффект:
Ф/Караганда/398/90 может быть использо ван для производства диагностических пре паратов, предназначенных дл идентификации вновь выделенных вируса гриппа и обнаружения антител, 5 табл.
Ленинграде // Acta virol, 1986, N 4, с, 294301, Нарастание гетерогенности вирусов А (НЗ N 2) может предшествовать появлению нового антигенного варианта данного подтипа возбудителя (Luzyanina Т.Ya., Goiubev
D.Â., Ьапоча N.À. et ai. Characteristic of
antigenic and biological properties of
influenza А viruses isolated different
epidemic of the same cycle // Ann
Microbiology, 1975, 126 b; р 461 — 470). В связи с этим прогностическое значение может иметь установленные направленности процесса изменчивости антигенной структуры возбудителя, а также оперативно выявление новых антигенных вариантов (Stuk В., Rostoiansky F., et al. Характеристика эпиде1789561 мических штаммов вируса гриппа А 1983 года с помощью поликлональных и моноклональных антител и выявление двух одновременно циркулирующих антигенных вариантов // Acta vtrol., 1986, М 3, с. 220226). Изоляты эпидемий 1990 r. относились к сероподтипу А (Н3 К 2), в основном были близки международным референс-штаммам А/Сычуань/2/87 и А/Гуандрнг/39/89.
Пред лагаемый штамм А/Караганда/398/90 является дрейф-вариантом проютипного штамма А/Сычуань/2/87. Штамм
19 выделен из н/гл смыва больного человека при пассировании на куриных эмбрионах в феврале 1990 r. во время эпидемической вспышки гриппа в Караганде (Казахская
ССР) и хранится в коллекции Института вйрусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР (депозитор И. 2264).
Целью изобретения является получение 20 штамма вируса гриппа А/Караганда/398/90 (НЗ N 2), обладающего специфи- ческой иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов при идентифика-.25 ции вновь выделенных вирусов гриппа, Антигенную структуру штамма изучали согласно рекомендациям В03 в РТГА (реакция тормо>кения гемагглютинирующей активности) с использованием набора 30 лоликланальных крысиных сывороток к эталонным штаммам А (НЗ N 2) и в РПНА(реакция подавления нейраминидазной активности с кроличьими иммунными сыворотками к рекомбинантным вирусам Р19 35 (HeqlNI), Р9 (HeqlN2) и P17 (Heq!N2). Дополнительно проводился тонкий иммунологический анализ штамма а РТГА с моноклональными антителами к вирусу
А/Филиппины/2/82. Кроме того, в иммуно- 40 логическом анализе были использованы моноспецифические антитела к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина.
Результаты изучения антигенной струк- 45 туры даны в табл. 1-5.
Выделенный штамм А/Караганда/398/90 характеризуется широтой антигенного спектра при взаимодействии с сыворотками к эталлонным вариантам 50
А/Филиппины/2(82, А/Кен/1/84, А/Миссисипи/1/85, А/СССР/2/85, A/Ëåíèírрад/360/86, А/Виктория/7/87, до
1/4-1/16 гомологичного титра, а с А/Сычу.ань/2/87 до 1/2 гомологичного титра;
Использование в иммунологическом анализе монорецепторных сывороток к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической адсорбции, дало возможность получить объективную оценку новизны предлагаемого варианта вируса. Опыты показали, что штамм A/Êàраганда/398/90 имел своеобразное сочетание антигенных детерминант, характеризующееся наличием одной "старой" детерминанты Н3,10, встречающейся в составе вирусов бангкокской разновидности и новой — НЗ.16 — "сычуаньской" детерминанты, Применение моноклональных антител к вирусу гриппа A/Ôèëèïïèíû/2/82 позволило выявить своеобразие нового штамма.
Эпитопы его опознавались 6-7 из 13 использованных моноклональных антител.
Адапционные свойства. Выделенный от человека вирус А/Караганда/398/90 релродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной температуре (37 С) до инфекционного титра 5 Ig ЭИД 50/0,2 мл.
Штамм обладает низкой геммагглютинирующей (1: 32-1: 128) и высокой иммуногенной активностью (титр антител в РТГА 1;
1280), Свойство агглютинации. Вирус обладает узким спектром гемагглютинирующей ак- . тивности. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур (в титре 1: 32-1: 128), слабее — морской свинки(1: 32-1: 64), в низких титрах эритроциты. белых крыс (1: 4 — 1: 8), совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади крупного рогатого скота.
Терморезистентность (Тм-признак).
Предлагаемый штамм обладает термостабильным гемагглютинином, активность которого сохранялась после прогревания при
56 С в течение 4 ч и утрачивалась при 62 С втечение 1 ч.
Ингибиторочувствительность, Вирус
А/Караганда/398/90 ингибиторезистентный.
Адсорбционно-элюирующая активность, Новый штамм обладает высокой сорбирующей способностью по отношению к эритроцитам кур (до 100 ) и практически не элюирует с эритроцитов.
Патогенные свойства. Вирус А/Караганда/398/90 проявляет слабопатогенные свойства для белых мышей;
Штамм, выделенный от человека (А/Караганда/398/90), предназначен для производства гриппозного антигена, который может быть использован при серологической диагностике гриппа. С этой целью штамм размножают путем заражения 9-10дневных куриных эмбрионов в аллантоис-. ную полость.
Пример. Лабораторные животные— белые полость, 1789561 антигеном вируса гриппа человека A (MI N 1) реакция отрицательна.
Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа A/Êàðàãàíäà/398/90 А (НЗ N 2), 5 изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты могут найти применение в вирусологической практике для- идентификации вновь выделенных штаммов и изуче10 ния популяционного иммунитета населения с целью осуществления надзора за распространением вируса гриппа в природе и процессом изменчивости возбудителей гриппозной инфекции.
Схема иммунизации. Иммунные сыворотки получают в результате 4-кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодержащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом, Животных обескровливают через 10 дней после последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы из нехолерного вибриона.
Титр иммунной сыворотки заявляемого препарата в РТГА с гомологичным антигеном составляет 1; 1280, с гетерологичным
Формула изобретения
Штамм вируса гриппа А (НЗ N 2) ГКВ
2264, для приготовления диагностических препаратов.
Таблица 1
Исследование антигенной структуры гемагглютинина вируса гриппа A/Êàðàãàíäà/398/90 в
РТГА
Тит в РТГА с ви сами
Подтип гемагглютинина
Иммунные сывороткй к вирусам гомологичным А/Караганда/398/90
П р и м е ч а н и е: Здесь и в последующих таблицах титры даны в обратнах величинах, А/свинья/Айова/15/3
А/Пуэрто-Рико/8/34
А/СССР /090/77
А/Сингапур(57
А/Гонконг/1/68
A/floрт-Чалмерс/1/7
А/Виктория/3/75
А/Техас/1/77
А/Филлипины/2/82
А/Кен/1/84
А/Миссисипи/1/85
А/СССР/2/85
А/Ленинград/360/86
А/Виктория/7/87
А/Сычуань/2/87
В/Сингап /222/79
Н1
Н1
Н1
Н2
НЗ
НЗ
Н3
Н3
НЗ
Н3
Н3
НЗ
Н3
Н3
Н3
640
<20
<20
<20
<20
<20
<20
<20
<20 40
<20
1789561
Табл ица 2
Анализ в РТГА иммунной сыворотки к вирусу гриппа А/Караганда/398/90
Таблица 3 Лсследование антигенной структуры нейраминидазы вируса гриппаА/Караганда/398/90 е
РПНА
1789561
Таблица 4
Определение антигенного состава гемагглютинина вируса гриппа А/Караганда/398/90
Таблица 5
Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа A/Êàðàãàíäà/398/90 с моноклональными антителами
Составитель M.Ñàÿòîâ
Техред М.Моргентал Корректор 3. Салка
Редактор
Заказ 329 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101