Штамм вируса болезни гамборо для получения биологических препаратов и их оценки

 

Использование: иммунология, вирусология , ветеринария. Сущность изобретения: штамм 27/94 вируса болезни Гамборо ГКВ 2105 культивируется и титруется на коммерческих цыплятах 35-40-дневного возраста и куриных эмбрионах. Штамм вызывает характерную клиническую и патолого-анатомическую картину заболевания через 48-72 ч с титром вируса 105 5-106 ° ЭЙД so/мл, а активность сыворотки крови достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузионной преципитации 1:64. Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4885038/13 (22) 26,11.90 (46) 15,09.92. Бюл,¹ 34 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства (72) А.С.Алиев (56) Авторское свидетельство СССР № 1668392, кл. С 12 N 7/00, 1989.

lachida, Iritani, Plaque Heduction mutralization

test for the sегоdiagnosis of infections bursai

disease, lap 1 Vet. Sci 19 77, v. 39, р 1-5. (54) ШТАММ ВИРУСА БОЛЕЗНИ ГАМБОРО

ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ ОЦЕНКИ

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве антигена и иммунной сыворотки для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) и встречного иммуноэлектрофореза (В И ЭФ) с целью лабораторной диагностики болезни

Гам боро.

Болезнь Гамборо протекает остро, с характерной клиникой заболевания и субклинически. Широкое распространение имеет субклиническая форма, При острой форме болезни на первый план выступают клинические и паталого- анатомические признаки, свойственные вторичным инфекциям, что создает затруднения при постановке диагноза. Поэтому проведение лабораторных исследований имеет решающее значение при постановке диагноза и требует наличия специфических вы соков кти вн ых станда ртных антигенов и сыворотки, Штаммы вируса болезни Гамборо, предназначенные для производства антигена и

„„ Ы „„1761802 А1 (57) Использование: иммунология, вирусология, ветеринария. Сущность изобретения: штамм "27/94" вируса болезни Гамборо

ГКВ 2105 культивируется и титруется на коммерческих цыплятах 35 — 40-дневного возраста и куриных эмбрионах. Штамм вызывает характерную клиническую и патолого-анатомическую картину заболевания через 48 — 72 ч с титром вируса 10 — 10

ЭИД Бо/„,, а активность сыворотки крови достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузионной преципитации

1:64. Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен. иммунной сыворотки, должны быть достаточно вирулентными, свободными от контаминации и обладать высокой биологической и антигенной активностью. Технология производства антигена при болезни Гамборо предусматривает инактивацию вируса, поэтому штаммы должны быть чувствительными к воздействию общепризнанных инактивирующих препаратов и контролироваться на полноту инактивации.

Выпуск диагностикумов при болезни

Гамборо до настоящего времени не налажен.

Существующие диагностикумы готовят на СПФ-цыплятах, СПФ-эмбрионах и в культуре клеток.

В зарубежной практике известен ряд штаммов вируса болезни Гамборо, используемых для изготовления антигенов и сывороток при данной инфекции — штамм "SR — 1" (4), штамм "1/PY", Указанные штаммы культивируются на

СПФ-цыплятах (свободных от патогенных

1761802

10 факторов) или в культуре клеток различного происхождения, Однако получение и содержание СПФ-цыплят требует больших материальных и трудозатрат, размножение вируса в культуре, клеток вызывает снижение его антигенной активности, Полученные образцы антигена и сыворотки с использованием указанных штаммов обладают низкой активностью и не поддаются стандартизации, Широко используют высокоактивные вирулентные штаммы вируса болезни Гамборо. Известен штамм"cheville", используемый .для про э водства антигенов и сывороток для лабораторной диагностики болезни Гамборо— прототип изобретения.

Однако для культивирования этого штамма требуются СПФ-цыплята. Максимальной величины биологическая активность его достигает через 96 часов после заражения цыплят, показатели биологической активности при этом низкие (10 — 10 Э ИД 5о/мл}, Целью настоящего изобретения является получение нового штамма вируса болезни Гамборо, отвечающего всем требованиям производства диагностикумов, т,е, представляющего свободный от контаминации вирусный материал, обладающего высокой вирулентностью, биологической и антигенной активностью (титр вируса 10 -10 ЭИД50/Mn), способного адаптироваться и титроваться на цыплятах и куриных эмбрионах, Цель изобретения достигается получением вирулентного штамма "27/94" вируса болезни Гамборо — сем, Birnavidae

Вирус имеет кубическую симметрию, без оболочки, с диаметром 60 — 80 нм и относится к PHK-содержащим вирусам семейства Birnavidae. Вирус устойчив к воздействию температуры 56 С в течение

30 мин, эфира и хлораформа. Инактивируется при воздействии 0,1%-ного раствора формальдегида в течение 24 ч, В лиофилизированном состоянии штамм вируса сохраняет свои биологические и антигенные свойства при хранении в условиях холодильника в течение не менее двух лет, Заражение куриных эмбрионов вызывает гибель и поражение их в виде подкожных кровоизлияний и задержки роста и развития на 5 — 6 сутки после введения вируса, Для культивирования и титрации штамма

"27/94" вируса болезни Гамборо использовали коммерческих цыплят 35-40-дневного возраста и куриные эмбрионь,, 15

Для заражения использовали 0,2 мл вируссодержащего материала.

При заражении цыплят вирусный материл вводили интраназально. Через 72-96 ч отбирали фабрициевую сумку и готовили гомогенат на физиологическом растворе в соотношении 1:1.

При заражении эмбрионов вируссодержащий материал вводили в хориоалантоисную оболочку. Зараженные эмбрионы инкубировали при температуре 37,5 — 38 С.

Затем отбирали аллантоисную жидкость и хориоаллантоисную оболочку и аналогично готовили гомогенат.

Активность вируса определяли по титру и наличию патолого-анатомических изменений у зараженных цыплят и эмбрионов.

Устойчивость штамма к воздействию температуры, эфира и хлороформа определяли путем титрации вируса до и после воздействия на него укаэанных факторов, Инактивацию вируса при получении антигена проводили с помощью раствора формальдегида в конечной концентрации 0,17; в течение 24 ч. Полноту инактивации проверяли заражением эмбрионов.

Для получения иммунной сыворотки к вирусу болезни Гамборо,заражали цыплят вирулентным штаммов "27/94" в возрасте

35 — 40 сут и через 15 сут повторно вводили вирус в объеме 0,5 см в грудную мышцу.

Сыворотку от цыплят получали через l4 сут после повторного введения и исследовали на активность и специфичность в реакции диффузной преципитации и реакции нейтрализации, Вирулентный штамм "27/94" вируса болезни Гамборо адаптирован, поддерживается и титруется на коммерческих цыплятах и куриных эмбрионах, Штамм вызывает характерную клиническую и паталогоанатомическую картину заболевания через 48-72 часа после заражения цыплят и образования вируснейтрализующих антител на 14 сутки, Титр вируса в фабрициевой сумке цыплят на 96 час после заражения достигает

10 — 10 ЭИД50/мл, а активность сыворо5,5 6,0 ток крови цыплят, зараженных этим штаммом, через 14 суток достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузной преципитации 1;64, Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен.

Формула изобретения

Штамм вируса болезни Гамборо ГКВ М

2105 для получения диагностических препаратов и их оценки.