Штамм бактерий yersinia еnтоrосоliтiса 037 серовара, используемый для получения диагностической агглютинирующей моноварной сыворотки

 

Использование: медицинская микробиология , серологическая идентификация иерсиний. Сущность изобретения: штамм Yerslnia enterocolltlca 170 (Р-12821) выделен от лесной мыши бактериологическим способом. Штамм депонирован в ГИСКим. Л.А.Тарасевича под № 170. Сыворотку получают путем иммунизации кроликов убитой кипячением микробной взвесью штамма 170 (Р-12821). Диагностическое разведение 1 : 400, сыворотку используют для серологической идентификации иерсиний , принадлежащих к серовару 037, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4911011/13 (22) 18.02.91 (46) 23.01.93. Бюл. № 3 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Г,Г,Гурлева, Л.M,Ñìoëèêoâà и Л.В.Невенчанная (56) J. Wauter .et аИ //Апл,inst Pasteur.

1971, v. 120, р.631 — 642, J. Wauter et аП // Ann.inst Pasteur,.

1972, v. 122, р, 951-956, Aleks S.S. et аП // J. СИп. М!сгоЬ. 1984, v, 20, Nã 11, р. 99 — 102, Гурлева Г,Г., Ценева Г.Я., Митрикова

Л.А. и др. ЖМЭИ.— 1985, № 10. с, 39 — 42, (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSlNIA

ЕЙТЕВОСООТ! СА 037 СЕРО ВАРА, ИСИзобретение относится к медицинской микробиологии. в частности к серологической идентификации иерсиний энтероколитика.

Возбудитель кишечного иерсиниоза Y.

entегоcolltica неоднороден в антигенном от. ношении, Описано 32 серологических варианта, включающих 34 О-антигена. Для получения моноварных диагностических сывороток отечественные исследователи пользуются коллекцией типовых штаммов иерсиний.

Одйако использование для типирования иерсиний сывороток, полученных к известным типовым штаммам, позволяет определить серологические варианты у 6080 культур, выделяемых от людей, животных и из объектов внешней среды. Поэтому для расширения возможностей серологичвской идентификации иерсиний необходим

„„50,„1789558 А1 (5 )5 С 12 и 1/20, А 61 К 39/40// С 12

N 1/20, С 12 R 1:01) ПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧ ЕС КОЙ АГГЛ ЮТИ Н ИРУЮ ЩЕЙ

МОНОВАРНОЙ СЫВОРОТКИ (57) Использование; медицинская микробиология, серологическая идентификация иерсиний. Сущность изобретения: штамм

Yersinia entегоcolitica 170 (P-12821) выделен от лесной мыши бактериологическим способом. Штамм депонирован в ГИСК им.

Л,А.Тарасевича под ¹ 170. Сыворотку получают путем иммунизации кроликов убитой кипячением микробной взвесью штамма 170 (P-12821), Диагностическое разведение 1, 400, сыворотку используют для серологической идентификации иерсиний, принадлежащих к серовару 037, 1 табл. поиск представителей новых антигенных вариантов и приготовление к ним диагно- д стических сы вороток. 4

Целью изобретения являются получения штамма Y, entегоcolitlca нового 037 се- О ровара, что позволит дополнить коллекцию типовых штаммов.

Штамм Y, entегоcolftlca 170 (P-12821) СЛ выделен в районе г. Сочи 18.07,84 г. от лес- ОО ной мыши в баклаборатории Сочинского противочумного отделения.

Штамм депонирован в коллекции государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.

Л.А.Тарасевича под номером 170 (P-12821) и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

1789558

В мазках из суточных агаровых культур клетки штамма 170 (P-12821) имеют вид прямых коротких палочек 0,5-0,8 мкм х 1-1,5 мкм, подвижны при 22 С, спор и капсул не образуют, 5

На агаре Хоттингера (рН 7,2-7,6) через

24 ч роста образует сероватые непрозрачные колонии. По Граму не окрашивается.

В бульоне через сутки дает равномерное помутнение и осадок на дне. Иерсинии 10 указанного штамма растут на всех средах, используемых для диагностики знтеробактерий.

Физико-биохимические признаки..

Растет при 4 — 40 С. Оптиум роста 2829 . Не обладает оксидазной активностью, ферментирует с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, сахарозу, арабинозу, маннозу, ксилозу, 1-сорбозу, d-целлобиозу, cl-трегалозу,маннит, глицерин, сорбит, ино- 20 зит салицин; не активен в отношении лактоэы, рамнозы. d-рафинозы, d-мелибиозы, адонйта, дульцйта, -метил-d-глюкозида, салицина, Образует уреазу, -галактозидазу, орнитиндекарбоксилазу, ацетилметилкар- 25 бинол при 20". индол; восстанавливает нитраты в нитриты; не синтезирует лизиндекарбоксилазу, фаргининдигидролазу. При ферментации ряда субстратов образуют газ. Штамм является вторым 30 б иохимическим вариантом.

Антигенные свойства. Штамм У, entегоco1ltica 170 (Р-12821) не агглютинируется сыворотками к известным 32-м типовым штаммам, 35

Сыворотки 3-х серий, полученные путем иммунизации кроликов О-антигеном штамма Y. entегоcolitica 170 (Р-12821), агглютинируют культуру гомологичного штамма в разведении 1 . 2560-1: 5120 и не реагируют 40 ни с одним из 32-х типовых штаммов известных серологических вариантов.

Культура предлагаемого штамма устойчива к поливалентному чумному и псевдотуберкулезному бактериофагэм, к 45 псевдотуберкулезным Котляровой, 2391, к фагу кишечной палочки Т-З..

Использование штамма иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Использование штамма У, 50

entегоcolltlca 170(Р-12821) 037 серовара для получении диагностической агглютинирующей моновэрной сыворотки.

Суточную агаровую культуру штамма высевают на пластинку агара Хоттингера 55 (рН 7,1-7,2). Через 24 ч инкубации при 28 отбирают 7-10 колоний в -форме и отсевают их на скошенный агар Хоттингера в пробирке. Суточную агаровую культуру пересевают на поверхность скошенного агара Хоттингера во флаконе. Через 24 ч инкубэции выросшую культуру проверяют на чистоту в мазке, окрашейным по Граму. При наличии в мазках грамотрицательных прямых коротких палочек делают с матраца 5 — 6 мл 0,85 -го раствора натрия хлорида, Полученную взвесь доводят до концентрации 20 млрд. м. к. в мл тем же раствором, Взвесь кипятят на водной бане в течение 2,5 ч. После остывания делают высев на стерильность в бульон и на пластины агара

Хоттингера. За посевами наблюдают 5 суток, делая ежедневно высевы из бульона на агар. При отсутствии специфического и постороннего роста антигены оценивают как стерильные используют для иммунизации кроликов. Микробную взвесь концентрацией 10 м, к, в мл вводят кроликам весом

2,0-2,5 кг внутривенно в объеме 0,25; 0,5; 1;

1 мл с интервалом в 7 дней. Спустя неделю после последней инъекции берут пробно кровь из ушной вены в количестве 0,5-1,0 мл, Полученную сыворотку используют для постановки реакции агглютинации. Сыворотку титруют двукратно в объеме 0,5 мл

0,85 -ro раствора натрия хлорида, начиная от разведения 1: 25 до 1 : 2560. К ряду разведений сыворотки добавляют по 0,5 мл

1 млрд взвеси суточной агаровой культуры штамма Y. entегоcofitica 170 (12821) 037 серовара. Реакцию предварительно учитывают через 2 ч инкубации при 37 С. Затем пробирки оставляют при комнатной температуре на 18 ч, после чего окончательно учитывают результаты реакции, Если исследуемая сыворотка агглютинирует гомологичный штамм в разведении не менее чем 1: 1600 — 1: 3200, то через 8-10 дней после последней инъекции проводят тотальное кровопускание. В полученной сыворотке окончательно определяют титр антител.

Диагностическим считают разведение 1:

400. Перед употреблением сыворотки разводят до 1/ l0 диагностического титра, т. е.

1: 40, разливают по 2.мл в ампулы и используют. для серологической идентификации иерсиний.

Пример 2. Серологическая идентификация иерсиний.

С сывороткой к штамму Y. entегоcolitlca

170 (Р-12821) 037 се ровара изучают штаммы иерсиний энтероколитика, типичные по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам и не агглютинирующиеся сйворотками к 3-и типовым штаммам коллекции Wauters с соавт. Агглютийацию ставят в одной. пробирке в диагностическом титре. Сыворотку к штамму Y. entегоcolltlca l70(P-12821) разводят 0,85 Og,-ым раствором натрия хлорида 1

1789558

Формула изобретения для получения диагностической агглютиниШтамм бактерий Yersinla entегоcolittca рующей моноварной сыворотки.

ГИСК М 170 037 серовара, используемый

Результаты реакции агглютинации с сывороткой к штамму Y, entегоcolltlca 170

Составитель Г,Гурлева

Техред M,Mîðãåíòàë

Редактор

Корректор Н.Слободяник

Заказ 329 Тираж .Подписное

Внии! lA < осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

: 5, к 0,5 мл сыворотки добавляют равный объем 1 млрд. взвеси суточной агаровой культуры исследуемого штамма иерсиния энтероколитика. Пробирку помещают на 2 ч в термастат при 37 С, а затем при комнатной температуре. На следующий день учитывают результаты. При наличии в пробирке с укаэанной сывороткой четкой агглютинации определяют принадлежность исследуемого штамма к 037 серовару.

Новый типовой штамм Y. entегоcolltica

170 (P-12821) обладает специфическим 0-антигеном 037 серологического варианта, отличающимся от антигенов 32-х типовых

5 штаммов известных серологических групп (таблица).

Антигенные свойства штамма стабильны на протяжении 5 лет.