Способ приготовления мазков-отпечатков лейкоцитов кожи
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии Целью является повышение выхода клеток и уменьшение rjja s магичности Цель достигается тем, чш IM кожу наносят фотосенсииилизирующую смесь, содержащую метоксзлен и эмульсионный крем в соотношении 1:100, а иссле довзнию подвергают содержимое субэпидермального пузырька, полученного путем воздействия на кожу УФА-лазерным излучением дозой 15 Дж/см . Способ позволяет значительно снизить травмзт11- ность исследования за счет исключения скарификации, а также получить большой выход клеток.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ С В ИДЕТ ЕЛ ЬСТВУ! у) ((" (21) 4785934/14 (22) 24.01.90 (46) 23,05.92. f»on. N" 19 (7 I) Саратовский научно-исследовательский институт сельской гигиены . (72) С.Г,Утц, В.В.Тучин, Е,В,Румянцева и А,1О.Барабанов (53) 616-0.88.8(088.8) ;54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКОВОТПЕЧАТКОВ ЛЕЙКОЦИТОВ КОЖИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, Целью является поИзобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и касается излучения миграции лейкоцитов. Целью изобретения ям яется повышение выхода клеток и уменьшение травматичности. Способ осуществляют следующим образом, На внутреннюю поверхность предплечья размером 0,5 0,5 см втирают фотосенсибилизатор, содержащий эмульсионный крем и метоксален в соотношении 1:100. Через 30-60 мин (время, необходимое для фотосенсибилиэации) производят облучение кожи.в месте нанесения фотосенсибилизатора лазерным излучением с длиной волны 320— 400 нм (УФА-диапазон). В качестве источника лазерного излучения может быть использован лазер ЛГИ-21 с длиной волны 337,1 нм и средней выходной мощностью 4 м Вт, Площадь участка облучения составляет 0,03 — 0,06 см, доза облучения — не менее 15 Дж/см, Выбор дозы облучения осуществляют по результатам предварительного исследования. Через 8 — 9 ч на месте облучения начи„„5Ц„„1735739 Al вышение выхода клеток и уменьшение гра»мати ности. Цель достигается тем, что Ila кожу наносят фотосенсибилизиру ащую смесь, содержащую метоксален и эмульсионный крем в соотношении 1:100, а иссле-дованию подвергают содержимое субэпидермального пузырька, полученного путем воздействия на кожу УФА-лазерным излучением дозой 15 Дж/см . Способ по2 зволяет значитегil HO снизить травматичность исследования за счет исключения скарификации, а также получить большой выход клеток. нает формироваться очаг асептической воспалительной реакции, что проявляется в виде возникновения участка зритемы. Через 46-48 ч на месте облучения возникает субэпидермальный пузырек с диаметром, соответствующим площади участка облучения. Пузырек заполняется тканевой жидкостью (экссудатом), в которую мигрируют лейкоциты. Непосредственно после образования пузырька (48 ч) или через заданный интервал времени (например, 72 ч) пузырек вскрывают стерильной иглой и из его содержимого готовят мазок-от ечаток на стерильное предметное стекло, предварительно обезжиренное в смеси Никифорова {cfiviIiT/эфир в пропорции 1;1). После высыхания при комнатной температуре мазок-отпечаток фиксируют в течение 3 мин 96 этиловым спиртам и окрашивают (например, по Романовскому), препарат просматривают под микроскопом с иммерсией и подсчитывают 50-100 клеток. Пример ". Доброволец 24 года. Диагноз: практически здоров. В участок кожи на .внутренней поверхности левого предплечья размерами 3,5 х 3,5 см внесен эмульсион1735739 Составитель Л,Стебаева Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор А.Осауленко Редактор С.Пекарь Заказ 1811 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушскэя наб;, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород. ул,Гагарина. 101 ный крем, содержащий метоксален. Через 1 ч было проведено облучение двух участков кожи лазерным облучением с длиной волны 337,1 нм (лазер ЛГИ-21) с дозой по 15 Дж/см2. Кожа внутренней поверхности правого предплечья была обработана 3 ной настойкой йода и спиртом, затем стерильным скальпелем произведена скарификация эпидермиса размером 0,5 х 0,5 см, Скарификат был покрыт стерильным предметным стеклом, которое было зафиксировано на руке пластырем. Спустя 8 ч на месте лазерного облучения появилась эритема, а через 46 ч после облучения — два субэпидермальных пузырьках, Мазки-отпечатки из радиационных пузырьков готовились: из одного — через 48 ч, из второго — через 72 ч после облучения, Мазки-отпечатки со скарификата готовились: первый — через 6 ч, второй — через 24 ч. В мазке-отпечатке по Ребук через 6 ч определяют большое количество нитей фибрина и клеточного детрита. Лимфоцитов 2, моноцитов 17, гранулоцитов 81 о . Через 24 ч в мазке по Ребук отмечают высокую бактериальную обсемененность, что сделало невозможным подсчет качественного состава мазка. В мазке-отпечатке, полученном из радиационного пузырька через 48 ч: лимфоциты 0%, моноциты 29%, гранулоциты 80, В мазке-отпечатке через 72 ч: лимфоциты 3, моноциты 61, гранулоциты 36 . Клеточные элементы в мазках-отпечатках, полученных из радиальных пузырьков, сохраняют свои мембраны, детрит и бактериал ьн а я обсеменен ность отсутствуют. Пример 2, Больной 30 лет, Диагноз: псориаз, стадия прогрессирования. В участок кожи размерами 3 х 3 см на внутренней поверхности левого предплечья нанесен эмульсионный крем, содержащий фотосенсибипизатор. Через 45 мин после 5 фотосенсибилиэации в пределах фотосенсибилизированных участков было облучено два участка кожи диаметром 3 мм лазерным излучением с длиной волны 337,1 нм с дозой 10 Дж/см, 10 . На внутренней поверхности правого предплечья было выполнено Ребук-тестирование по описанной методике. Результаты исследования. B мазках по Ребук: через 6 ч (! фаза AB P) лимфоциты 1, 15 моноциты 15, гранулоциты 84 /; через 24 ч (tl ABP) лимфоциты 0, моноциты 36, гранулоциты 64 . B мазках-отпечатках из радиационного пузырька через 48 ч лимфоциты 0%, моно20 циты 38, гранулоциты 60о . Способ позволяет значительно повысить выход лигирующих клеток, а также значительно упрощает анализ за счет снижения травматичности, 25. Формула изобретения Способ приготовления мазков-отпечатк . в лейкоцитов кожи путем ее предварительной обработки с последующим 30 . изготовлением мазка из мигрирующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода клеток и уменьшения травматичности, мазок готовят из секрета субэпидермального пузырька, при этом обработку кожи проводят в течение 30 — 60 мин фотосенсибилизирующей смесью. содержащей метоксален и эмульсионный крем в соотношении 1; l00, а субэпидермальный пузырек получают путем воздействия на ко40 жу УФА-лазерным излучением дозой 15 Дж/см .
