Способ определения индивидуальной чувствительности больных с язвенной болезнью желудка к иммуномодуляторам

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения индивидуальной чувствительности больных с язвенной болезнью желудка к иммуномодуляторам. Цель изобретения - повышение точности способа. У больного берут кровь, выделяют лимфоциты клеток, после прикрепления к стеклу инкубируют в присутствии иммуномодулятора и определяют в них показатель стабильности лизосомольных мембран и при его увеличении в 2 раза и более по сравнению с контролем определяют индивидуальную чувствительность к данному иммуномодулятору. По сравнению с прототипом точность увеличивается в 2,4- 5,7 раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 7 А1 (st)s G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

>

Н зом (21) 4796494/14 (22) 26,02.90 (46) 15.04.92. Бюл. М 14 (71) Рос овский-на-Дону медицинский институт (72) А.И.Поляк, В.И.Нефедов, И.А.Тимошевская и И.П.Чумбуридзе (53) 615.374 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1171691, кл. G 01 N 33/53, 1985. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БОЛЬНЫХ С ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЖЕЛУДКА

К ИММУНОМОДУЛЯТОPAM

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения чувствительности организма к иммуномодуляторам с целью проведения иммунокорригирующей терапии иммунодефицитных состоя ний.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим обраВ пробирку, содержащую 0,5 мл антикоагулянта, набирают венозную кровь до отметки 5 мл. Хорошо встряхивают. В другую центрифужную пробирку наливают 1 мл фиколла (фирма Uppsa/а) и наслаивают исследуемую кровь, центрифугируют 20 мин при

1500 об/мин. После образования колец белого цвета отсасывают пипеткой кольцо мононуклеаров с нижним слоем плазмы и переносят в другую чистую пробирку. При (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения индивидуальной чувствительности больных с язвенной болезнью желудка к иммуномодуляторам. Цель изобретения — повышение точности способа. У больного берут кровь, выделяют лимфоциты клеток, после прикрепления к стеклу инкубируют в присутствии иммуномодулятора и определяют в них показатель стабильности лизосомольных мембран и при его увеличении в 2 раза и более по сравнению с контролем определяют индивидуальную чувствительность к данному иммуномодулятору. По сравнению с прототипом точность увеличивается в 2,45,7 раз. этом клетки не отмывают. Разбавляют средой 199 в соотношении; 1 ч. клеток + 2,2 ч, среды, подсчитывают в камере Горяева, доводят средой 199 до нужной концентрации (2 х 10 кл/мл), вносят на плашку по 0,25 мл в каждую лунку и инкубируют 60 мин (чтобы обеспечить прилипание мононуклеарных фагоцитов). Затем клетки трехкратно отмывают средой 199 и вносят в лунки по 0,2 мл культуральной среды, состоящей из среды

199, включающей 2,5; эмбриональной телячьей сыворотки и 0,5 глютаминовой кислоты. В первые две ячейки вносят только культуральную среду (контроль), в последующие — по 0,03 мл исследуемые иммуномодуляторы в разведении 1:5. Инкубируют в течение 5 ч, Затем из лунок отбирают по 0,06 мл жидкости (содержащей секретируемый лизоцим) и производят четырехкратное замораживание и размораживание клеток.

Далее оценивают лизоцим до Дорофейчуку, 1727077

50

Составитель В,Литовченко

Техред М.Моргентал Корректор М.Кучерявая

Редактор М.Келемеш

Заказ 1277 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 определяют показатель стабильности лизосомальных мембран (ПСЛМ) для каждого иммуномодулятора по формуле: ПСЛМ =„".; х

100;, где ПСЛМ вЂ” показатель стабильности лизосомальных мембран; Jlc — секретированный лизоцим, мкг/мл, Л вЂ” общий лизоцим, мкг/мл. Такой же показатель определяют и в контроле для проведения иммунокоррекции, подбирают тот иммуномодулятор, при контакте с которым ПСЛМ увеличивается в 2 и более раз по сравнению с контролем.

Пример, Больной Ж,, 54 лет, диагноз: язвенная болезнь желудка. Поступил на оперативное лечение, Заболевание началось 25 лет назад. Периодически лечился, сначала с временным улучшением, затем— без эффекта, Сопутствующие заболевания: хронический тонзиллит, тонзилогенная интоксикация, проявляющаяся болями в суставах, кардиопатией, частые ОРЗ (до 5 раз в год). Аллергологический анамнез благоприятный. Исследование иммунного статуса: показатели фагоцитоза в норме, резкое снижение Т-РОК (26 / и абсолютное значение—

0,455 тыс/мм ), уровня комплементарной активности сыворотки — до 27,7 СН/50 мл, высокие значения циркулирующих иммунологических комплексов (ЦИК) — 160 (м). При исследовании субпопуляций Т- и В-лимфоиитов с noMoLllblo моноклональных антител (МКАТ) СД1, СД4, СДв, В, Вд, Вм, обнаружено резкое снижение Т-хелперов до 21, несколько повышенный уровень

Т-супрессоров — 31, по результатам теста

"кожное окно" по Rebuck — снижение функциональной активности Т-лимфоцитов.

По результатам клинико-иммунологического обследования больному наряду с оперативным лечением основного заболевания рекомендован стимулятор Т-звена иммунитета. В данном случае наибольшее лабилизирующее действие на лизосомальные мембраны фагоцитов оказывает тималин. В этом случае увеличением ПСЛМ увеличилось в 3 5 раза по сравнению с контролем.

5 Больной получил тималин в дозе 3 мг/кг, 1 раз в день за 3 дня до операции и 2 дня в послеоперационном периоде.

Отмечалось гладкое течение послеоперационного периода, Через 7 дней после

10 операции и курса иммунокоррекции Т-РОК показатели поднялись до нормы (56 ), КАС и ЦИК нормализовались (соответственно

52,6 СН/50 мл и 60 м). Повысился уровень

Т-хелперов до 52, общая популяция Т-кле15 ток составляла 59, а по данным теста

"кожное окно" нормализовался (0,5), При использовании предлагаемого способа увеличивается в 2,4 — 5,7 раз точность способа. Так, точность определения инди20 видуальной чувствительности к иммуномодуляторам составляет при использовании предлагаемого способа 75 — 87, по прототипу 13 — 36 .

Формула изобретения

Способ определения индивидуальной чувствительности больных с язвенной болезнью желудка к иммуномодуляторам, включающий забор крови, выделение лей30 ковзвеси, культивирование ее, инкубирование пробы с прилипшим к стеклу клетками в присутствии иммуномодулятора и без него, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в клетках обе35 их проб определяют содержание общего и секретируемого лизоцима и вычисляют показатель стабильности мембран клеток, и при увеличении показателя более чем в 2 раза в клетках пробы с иммуномодулятором

40 по сравнению с другой пробой определяют чувствительность больных к иммуномодулятору,