Способ определения активности комплемента

 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях. Цель изобретения - повышение точности Способа. Выделенную сыворотку крови инкубируют с последовательно добавляемыми порциями эритроцитов, а активность комплемента определяют по их лизису. По сравнению с прототипом увеличивается точность способа в 2-3 раза..,

Т Д ГГ)Хт" ".)f)PP1 lip

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (я)5 G 01 М 33/53

$-) 0 hl g c 2

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4766973!14 (22) 05.12.89 (46) 15.04.92,Бюл. ¹ 14 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад. И.П,Павлова (72) И.Г.Щербак, Л.В. Галебская и Е.В.Рюмина (53) 615.374 (088.8) (56) Кэбот Е„Майер М. Экспериментальная иммунохимия. — М.; 1968, с. 66 — 69.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях, а также для изучения влияния на него каких-либо факторов.

Цель изобретения — повышение точности.

Способ осуществляется следующим образом.

В термостатированную при 37 С кювету спектрофотометра помещают 0,1 мл сыворотки крови, добавляют мединаловый буфер (рН 7,4), содержащий 0,1 желатина до объема 0,8 мл. После прогревания в течение

3 мин в инкубационную смесь добавляют

0,02 мл буфера, содержащего 0,36 10 сенсибилизированных эритроцитов барана (СЭБ), Регистрируют скорость лизиса эрит-. роцитов при 800 нм. После завершения лизиса в инкубационную смесь добавляют следующую, равную предыдущей, порцию

СЭБ, регистрируют скорость ливиса и про-. должают последовательно добавлять равные порции СЭБ до полного истощения (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА (57) Изобретение относится к.медицине, а именно к биохимическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях. Цель изобретения— повышение точности способа. Выделенную сыворотку крови инкубируют с последовательно добавляемыми порциями эритроцитов, а активность комплемента определяют по их лиэису. По сравнению с прототипом увеличивается точность способа в 2-3 раза. сыворотки. Строят график зависимости скорости лизиса СЭБ от количества добавляемых клеток . Путем экстраполяции графика на соответствующую ось регистрируют активность комплемента, которую сначала определяют как количество СЭБ полностью истощающих 0,1 мл сыворотки (Е), а затем рассчитывают активность комплемента; которая равна (ед. CHso), где

Е

0 1 О 9 10

0,1 — количество сыворотки в инкубационной смеси; 0,9 10 — количество СЭБ, рав6 ное половине от стандартного, принятого при определении СнБо; CH5o — величина, обратная количеству сыворотки, лизирующей 50 стандартной взвеси эритроцитов.

Пример 1. В термостатированную при

37 С кювету помещают 0,1 мл сыворотки крови донора, мединаловый буфер (рН 7,5), содержащий 0,1 желатина до объема

0,8 мл. После прогревания смеси в течение

3 мин вносят 0,02 мл буфера, содержащего

0,36 10 эритроцитов,. регистрируют ско1727075

Составитель В, Литовченко

Редактор M. Келемеш Техред M.Moðãeíòàë Корректор.Т. Малец

Заказ 1276 Тираж Подписное

ВКИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, l01 рость лизиса при 800 нм, после завершения ..лизиса вносят следующую порцию эритроцитов и продолжают процедуру ро полного истощения комплемента, регистрируемое

Ilo отсутствию возобновления лизиса после 5 добавления очередной порции.

Результаты представлены в таблице.

Количество СЭБ, лизированных 0,1 мл сыворотки коови составляет 13,75 0,36х х106=4,95 .10 клеток 10

495 10 5

0 1 0 9 106

Степень истощения комплемента малой порцией зимозана (0,5 мг), определяемая по прототипу, изменяется в гораздо больших пределах, чем при регистрации ее по предлагаемому способу.

Точность предлагаемого способа определения активности комплемента повыша- 20 ется в 2-3 раза, Предлагаемым способом можно определить в данном источнике комплемента компонент, который лимитирует процесс лизиса гетерологичных клеток, С этой целью 25 после полного истощения комплемента в исследуемой пробе необходимо добавить в инкубационную смесь какой-либо .компонент комплемента, Если при этом источник комплемента восстанавливает. свою литическую активность, значит данный момент в исходном материале был истощен первым, т.е. он лимитирует процесс лизиса гетерологичных клеток. Этим способом, кроме того, можно оценивать качество приготовляемых для клинических целей реагентов для определения отдельных компонентов комплемента. Реагент должен обладать достаточным резервом литической активности, С помощью метода можно определять оптимальный способ приготовления реагента.

Формула изобретения

Способ определения активности комплемента в сыворотке крови, включающий инкубацию сыворотки с порцией эритроцитов барана, отл и ч а ю щи йс я тем, что, с целью повышения точности способа, инкубацию сыворотки осуществляют при последовательном добавлении порций эритроцитов барана.