Способ дифференциации мyсовастеriuм аviuм от мyсовастеriuм inтrасеllulаrе

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации возбудителя туберкулеза птичьего вида от атипичных микобактерий вида интроцеллюляре. Целью изобретения является повышение точности способа. Питательную среду Левенштей-Иенсена или Финн-2, содержащую 0,1 мас.% синтойода в качестве селективного агента, засевают взвесью двухнедельных изучаемых культур. Посев инкубируют при температуре 38°С в течение 20 дней. При наличии роста на среде исследуемую культуру идентифицируют как MYCOBACTERIUM INTRACELLULARE, а при отсутствии роста - MYCOBACTERIUM AVIUM, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК (1)5 С 12 N 1/20, С 12 Q 1/04,.:...

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ HOMHTET

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OVHPblTHRM

flPH ГКНТ СССР (21) 4683806/13 (22) 25.04.89 (46) 30. 07.91. Бюа. В 28 (71) Украинский научно=исследова= тельский институт экспериментальной ветеринарии (72) 10.Я.Кассич, В.А.Кочмарский, А.И.Завгородний и В.M.Íoâèêîâ (53) 576.8.093.1(088.8) (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАПИИ MYCOBACTERIUM AVIUM ОТ MYCOBACTERIUM INTRAСЕЫЛЛ.АКЕ (57) Изобретение относится к меди= цинской микробиологии и касает.я диф

Изобретение относится к меди= цинской и ветеринарной микробиоло гии и касается дифференциации возбу= дителя туберкулеза птичьего вида от атипичных микобактерий вида интро целлюпяре.

Цель изобретения повьппение тОчности способа.

Способ осуществляют следующим об, разом.

Питатепьную среду Левенштейна=

Иенсена или Финн=2 готовят по обще= принятой методике. Затем ее разли вают в две стерильные колбы емкостью 150 ип. В первую колбу, содержащую 99 мп среды, добавляют 1 мп 57 ного раствора синтайода, чтобы кон= центрация его в среде быпа О, 17 и тщательно смешивают. В другую колбу синтайод не добавляют (контроль).

Затем содержимое колб разливают по

„SUÄÄ 1666530 А1

2 ференциации возбудителя туберкулеза птичьего вида от атипичных микобак терий вида интроцеллюпяре. Целью изобретения является повьппение точности способа. Питательную среду

Левенштейна=йенсена или Финн-2, со держащую О,! мас.Х синтойода в ка= честве селективного агента, засевают взвесью двухнедельных изучаемых культур. Посев инкубируют при 38 С в течение 20 дней. При наличии роста на среде исследуемую культуру иден= тифицируют как Mycobacterium intracellulare, а при отсутствии роста

Mycobacterium avium. 1 табл, I

5 мп в стерильные бактериологические пробирки, которые в наклонном положении помещают в аппарат для свертывания и инактивируют (среду о

Левенштейна-Иенсена при 90 С в те.чение 1 ч, а среду Финн-2 при 85 С о

30 мин) .

Из выросших двухнедельных изучае= мых культур, которые по культуральноморфологическим свойствам отнесены к комплексу авиуминтрацеллиляре, готовят микобактериальные взвеси

1 мг/мп на стерильном физиологическом растворе и высевают по 0,5 мл на

5 пробирок со средой, содержащей 0,1Х синтайода, а также на контрольную среду без синтайода. Пробирки поме щают в термостат в горизонтальном положении на 1 сут, Затем пробирки парафинируют и выдерживают в те>мо-.

6530

1О

50

3 166 стате 20 дней при 38 С. Учет резуль татов посевов проводят. ежедневно.

Дифференцирующнм показателем для

Mycobacterium intracellulare от 1. avium является рост колоний

И. intracellulare на среде Левен= штейна Иенсена или Финн-. 2, содержа щей О, 1% синтайода, при отсутствии роста у Y-. avium, Пример. Из выросших на среде

Павловского двухнедельных испытуемых и музейных культур микобактерий гото.

1 вили взвеси на стерильном физиологи ческом растворе из расчета 1 мг/мн, которые стерильными мерными пипетками высевают по О;5 мп на пять проби=

v рок со средой Левенштейна-.Иенсена, которая содержит, мас.%: однозамещен= ный фосфорнокислый калий 0,1; серно кислый магний 0,01; лимоннокислый магний 0,03; аспарагин 0,2; глицерин х/ч 0,7; вода дистиллированная 36,3; яичная масса 61,0; 2Х-.íûé раствор малахитовой зелени 1,?; синтайод 0,5; нли со средой Финн=2, которая содер-. жит„мас.%: магнезия сернокислая

О, 01, натрии лимоннокислын 0,03; однозамещенный фосфорнокислый калий

0,7, аммоний лимоннокислый однозаме= щенный О, 1; натрий глутаминовокислый

0,3; глицерин х/ч О, 7; железоаммиач= ные квасцы 0,001 вода дистиллированная 36,0; яичная масса 61,5; синтайод

О, 1," 2Х -ный раствор малахитовой зелени 1,2, а также на 2 пробирки со средой Левенштейна=Йенсена или Финн-2 без синтайода (контроль).

Рост колоний микобактерий на средах, содержащих О, 1% синтайода, на бпндают на 7-10 день у одной испь туемой (№ 230) и у контрольной куль= туры вида M. intracellulare. Ha сре= де без синтайода рост колоний обна=

p saNT как у Всех испытуемых> ТаК и у контрольных культур микобактерий на 7-10 день. Испытуемые культуры (№ 354, 249 и 227), а также контроль-. ная культура И. avium не растут на средах с 0,1% "ным содержанием син= тайода.

Результаты представлены в таблице.

Из данных таблицы видно, что при изучении четырех культур микобактернй .55 на плотных яичных средах Финн-2 и

Левенштейна-Йенсена с 0,1Х-ным сии= тайодом рост колоний микобактерий обнаружен у одной культуры (¹ 230) и у контрольной культуры M. intracellulare на 7 день„ У трех культур (¹ 354, №- 249 и 227), а также у контрольной культуры M. avium роста колоний не выявлено.

При изучении культур на полусин тетической жидкой среде Шула с

О, 5% ным иодоналом Б выявлено, что культура № 230 дает рост через

8 дней, а культуры № 354 и № 249 дают через 9 дней неопределенный результат в виде рыхлого осадка на дне пробирки. Культура №- 227 не дает осадка на дне пробирки.

В контроле M. avium дает неопре деленный, à M. intracellulare novo жительный результат. Для изучения образовавшегося осадка делают мазки, красят по методу Циль:-Нильсена и про водят микроскопическое исследование.

При зтом микроскопия мазков показы вает, что в поле зрения наряду с кислотоустойчивыми палочками обнару жены частички коагулированного белка среды Шула.

Из сравнительного анализа предлагаемого способа с известным следует, что предлагаемый способ дает более четкие результаты исследования, со кращает срок идентификации культур на 1 2 дня и не требует проведения дополнительных исследований (приго товленне мазков, окраска их по Циль=

Нильсену и микроскопическое исследо= ванне) .

Формула изобретения

Способ дифференциации Mycobacterium avium от Mycobacterium intracellulare путем посева исследуемого материала на плотную питательную среду дпя выращивания микобактерий туберкулеза с добавлением селектив-. ного агента с последующим инкубированием посевов и учетом результатов, отличающийся тем, что, с. целью повышения точности способа, посев осуществляют на среду Финн 2 или Левенштейна=йенсена, содержащую в качестве селективного агента син тай од в концентрации О, 1 ма с. % и при: наличии роста культуру идентифици руют как Mycobacterium intracellulare,ïðH отсутствии роста - Nycobacterium avium, 1666530

Ж фр культур

Вн11 культуры

Среды Финн-2, Левенштейна

11ейсена с 0,12ным синтайодом

Полусинтетическая вид" кая среда Шула с 0,52 иым иодоналом Б

I Г7 8 9 1

354

И. avium

249

227

230 и

+ И.intracellu-lare

П р и м е ч а н и е. + рост колоний микобактерий; рост колоний отсутствует;

+ - получен неопределенный результат.

Составитель А.Завадская

Редактор Н.Киштулинец Техред М.Моргентал Корректор М.Демчик

Заказ 2498 Тираж 376 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Кон1 роль

М.avium И 117

M.intracellu"

lare Р 128

Предлагаемый способ ид культуры Известный способ обнарунеи рост через дней

1 1 (йе определен

Не опреде лен

М.avium

Не опреде лен