Способ определения активности человеческого лейкоцитарного интерферона
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при проведении научных исследований и в процессе производства человеческого лейкоцитарного интерферона. Целью изобретения является повышение чувствительности и достоверности способа определения активности человеческого лейкоцитарного интерферона. Указанная цель достигается использованием в качестве индикаторной системы перевиваемых клеток СПЭВ - вируса энцефаломиокардита мышей. При этом индикаторный вирус вносят в клетки после удаления интерферона, а перед учетом результатов клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия и окрашивают 1 %-ным раствором анилинового красителя с 1%-ным раствором ледяной уксусной кислоты. 2 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ о
©с
Ql
Cd
О
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1 (21) 4340413/13 (22) 08.12.87 (46) 23.07.91. Бюл. ¹ 27 (71) Пермский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) А. В,Мисенжников и С, H.Ëàçàðåâè÷ (53) 615.339:578,245(088.8) (56) Кондратьева Г.А. и др. Микрометод титрования человеческого интерферона. Сб;
"Труды Ленинградского НИИЭМ", 1985, 62, с. 132 — 136.
Патент США N. 4241174, кл. G 01 N 33/00, 1980. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при провеИзобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при проведении научных исследований и в процессе производства человеческого лейкоцитарного интерферона.
Цель изобретения — повышение чувствительности и достоверности способа определения активности человеческого лейкоцитарного интерферона.
Пример. Исследуемые пробы интерферона последовательно разводят в лунках плашек. смешивают с суспензией клеток(по
4-8х10 клеток на 1 лунку), плашки помеща4 ют в COz — инкубатор до образования монослоя (на 5 — 18 ч), после чего жидкость из плашек сливают и вносят в лунки рабочую дозу вируса ЭММ (по 100 ЦПДво/0,2 мл). Ж,, 1665300 Al (5|)5 G 01 N 33/00, G 12 N 9/00 дении научных иСследований и в процессе производства человеческого лейкоцитарного интерферона. Целью изобретения является повышение чувствительности и достоверности способа определения активности человеческого лейкоцита рного интерферона. Указанная цель достигается использованием в качестве индикаторной системы перевиваемых клеток СПЭ — вируса энцефаломиокардита мышей. При этом индикаторный вирус вносят в клетки после удаления интерферона, а перед учетом результатов клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия и окрашивают 1 -ным раствором анилинового красителя с 1 -ным раствором ледяной уксусной кислоты. 2 табл, Постановку основного опыта сопровождают контролями клеток(клетки беэ вируса) и развернутым контролем рабочей дозы вируса (без интерферона). После внесения рабочей дозы вируса плашки выдерживают в СОг-инкубаторе 18 — 24 ч, затем жидкость из плашек сливают, все лунки дважды промывают слабой струей физиологического раствора (рН
7,0) и окрашивают сохранившиеся клетки путем внесения в каждую лунку по 0,1 мл
1 -ного раствора анилинового красителя (например, метиленовой сини, фуксина) с
1 ледяной уксусной кислоты, Через
2 — 5 мин краситель сливают, лунки дважды промывает физиологическим раствором и проводят визуальный учет результатов исследования.
1665300
Формула изобретения
Способ определения активности чело веческого лейкоцитарного интерферона, включающий обработку перевиваемой
Таблица 1
Титрование препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона (ЧЛИ) в системах фибробласты эмбриона человека (ФЭЧ) — ВВС и СПЭ — вирус ЭММ.
Таблица 2
Титрование препаратов ЧЛИ на перевиваемых кле ках СПЭВ и Л вЂ” 41 по защитному действию от вируса ЭММ.
Сравнение заявленного способа со способами, включающими использование других индикаторных систем клеток и вирусов, показано в табл, 1 и 2.
Коэффициент корреляции 0,86, Как видно из табл. 1 и 2, предлагаемый способ определения активности ЧЛИ позволяет повысить чувствительность, воспроизводимость и достоверность тестирования интерферона, облегчить процедуру обработки и, обеспечить воэможность многократного ис пользования плашек. культуры клеток интерфероном, добавление индикаторного вируса и учет результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и его
5 достоверности, в качестве культуры клеток используют перевиваемую линию клеток
СПЭВ, а в качестве индикаторного вируса используют вирус энцефаломиокардита мышей, при этом добавление индикаторного
10 вируса осуществляют после удаления интерферона из культуры клеток, а перед учетом результатов культуру клеток промывают изотоническим раствором хлорида натрия и окрашивают красителем следующего соста15 ва; мас.$: метиленовая синь или фуксин
1, ледяная уксусная кислота 1, дистиллированная вода — до 100 ) .
