Способ оценки функционального состояния лимфоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Целью изобретения является повышение экономичности способа при диагностических обследованиях . Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы - катрана) используют для постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П.Г. Митогенное действие катрэкса в разведении 1:10 не уступает таковой ФРА-Р (Dlfco) в концентрации 15 мкг/мл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5f)s G 01 N ЗЗ/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4391290/14 (22) 11.02.88

{46) 15,03.91. Бюл. N. 10 (71) Донецкий государственный медицинский институт им. М. Горького (72) Л.И.Жовниренко и А.Г,Гачечиладзе (53) 615.475(088.8) (56) Иммунологические методы/ Под ред.

Г, Фримеля, М.: Медицина, 1987, с. 294. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЛИМФОЦИТОВ

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы организма.

Цель изобретения — повышение экономичности способа при диагностических обследованиях.

Способ осуществляют следующим образом.

Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы катрон), используют в реакции бластной трансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П,Г.

Гепаринизированную венозную кровь больных по 0,1 мл вносят в стерильные пенициллиновые флаконы с 3 мл питательной смеси (среда 199 с 10 сыворотки крупного рогатого скота и 200 единицами пенициллина со стрептомицином). В опытные пробы (по 2 флакона на каждую пробу) добавляют по 0,1 мл катрэкса, Пробы инкубируют в термостате при 37 С 72ч. 3а 20ч до окончания инкубации во все пробы в стерильных условиях вносят по 0,2 мл раствора тимидина, меченного тритием, содержащего 2 мк Ки. После Ы 1635141 А1 (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Целью изобретения является повышение экономичности способа при диагностических обследованиях. Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы — катрана) используют для постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П.Г.

Митогенное действие катрэкса в разведении 1:10 не уступает таковой ФРА — P ("Dlfco") в концентрации 15 мкг/мл. внесения радиоактивной метки пробы хранят при 37 С.

После завершения периода культивирования производят специальную обработку культур с целью отмывания клеток от невключившейся метки и подготовки их для радиометрии в сцинтилляционном счетчике, На первом этапе осуществляют лизис эритроцитов и отмывку лимфоцитов Зф -ной уксусной кислотой центрифугированием в течение 10 мин при 1,5 тыс. оборотах в минуту (двухкратно). На следующем этапе осаждают нуклеиновые кислоты и белок, охлажденной 5ь-ной трихлоруксусной кислотой (ТХУК) путем тщательного перемешивания содержимого проб, а затем — отсутствие при + 4 С в течение 30 мин и последующего центрифугирования при

1,5 тыс. об/мин 10 мин.

Гидролиэ ДНК проводят добавлением

0,5 мл горячей 5 -ной ТХУК и инкубацией проб в водяной бане при 90 С в течение 30 мин.

После окончания гидролиза пробы центрифугируют в том же режиме. Центрифугат переносят в счетные флаконы, разбавляют. его 10 мл сцинтилляционной жидкости

1635141

Составитель P.Ãóìåíþê

Техред М.Моргентал Корректор О.Ципле

Редактор А.Ревин

Заказ 754 Тираж 410 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 (ЖС вЂ” 8) и помещают в счетчик "Бета-1" вместе с флаконами с чистой ЖС (фон), Счет каждой пробы осуществляют в течение 2 мин. После подсчета результаты опытных проб, контрольных (без митогена) и фоновых соответственно усредняют и выражают в числе импульсов в минуту или рассчитывают индекс стимуляции бластной трансформации (ИС) после вычитания фона по формуле

Значение с еднего счета опытной и обы

Значение счета контрольной пробы

Пример. Кровь обследуемого M. вносили в 7 флаконов с 3 мл питательной смеси по 0,1 мл. Во флаконы 2 и 3 добавляли по 0,1 мл ФГА, разведенного в 120 раз (5мкг/мл); во флаконы 4 g 5 и 6 и 7 — по 0,1 мл катрэкса в разведении соответственно

1:10 и 1:20; флакон 1 оставили без митогена (контроль). 8се пробы инкубировали 72ч. За

20 ч до окончания инкубации в пробы внесли по 0,2 мл ЗН-тимидина (все этапы осуществляли в стерильных условиях), а после окончания процесса культивирования — специально обработаны и подготовлены к счету. Получены такие результаты (в имп/мин и

ИС): фон — 248,260 — средняя 254; контроль—

1674; опыт с ФГА — 7029, 7872 — средняя

7450: ИСФгд 1674 — 254 — 5,1; Опыт с

7450 — 254 катрэксом (К) — средняя 27322 в разведении

1;10 (К1:10) и 1:20 (средняя 21129):

5 27322 — 254

ИС к 1: 10 1674 — 254 19,2 .

21129 — 254

ИС к 1: го — 1674 254 14,8 .

Следовательно, активность катрэкса в

10 10-кратном разведении примерно в 3,8 раза выше таковой фитогемагглютинина, разведенного 120 раз (при сопоставлении как индексов стимуляции, так и числа импульсов в минуту).

15 Таким образом, катрэкс имеет выраженный митогенный эффект на лимфоциты и в разведении 1:10 соответствует активности

ФГА-P (Dlfco) в концентрации 15 мкг/мл при стоимости 1 дозы катрэкса — 10 коп.

Формула изобретения

Способ оценки функционального состояния лимфоцитов путем проведения реакции бласттрансформации с митогеном и

25 последующей оценкой индекса стимуляции лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения экономичности способа при диагностических обследованиях s качестве митогена используют катрэкс.