Способ препаративного гель-электрофоретического разделения гипофизарных белков

Авторы патента:

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

Изобретение относится к области препаративной биохимии и может быть использовэно для разделения гипофизарных белков Цель - упрощение и ускорение способа, который заключается в проведении препаративного гель-электрофоторетического разделения гипофизарных белков в кислых условиях (рН 3,2-3,5) в присутствии 2,5-3,0 М мочевины. В результате разделения получают 5 белковых фракций (Ai, A2, В, С и D), которые содержат пролактин, соматотропин (СТГ), неидентифицированные белки и сывороточный альбумин Изобретение позволяет добиться большей эффективности разработанного способа в связи с выделением большего числа белковых компонентов из гилофизарного экстракта. 2 ил., 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

s G 01 N 33/68

ГОСУДАРСТВЕ3+3ЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4461415/14 (22) 08.06.88 (46) 30,01.91. Бюл. М 4 (71) Институт экспериментальной эндокринологии и химии гормонов AMH СССР (72) В.И. Гудошников, B,В. Абрамова и В,П. Федотов (53) 612,015(088.8) (56) Blochlm. Blophys. Acta, 1968, ч. 168, р. 113-121. (54) СПОСОБ ПРЕПАРАТИВНОГО ГЕЛЬЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ ГИПОФИЗАРНЫХ БЕЛКОВ (57) Изобретение относится к области препаративной биохимии и может быть испольИзобретение относится к области биохимии, в частности к препаративной биохимии белков, и предназначено для разделения гипофизарных белков.

Цель изобретения вЂ” упрощение и ускорение способа.

На фиг. 1 представлен профиль элюции при первичном использовании колонки; на фиг. 2 вЂ” то же, при повторном использовании.

Способ осуществляется следующим образом.

Раствор кислого ацетонированного порошка аденогипофизов в кислом буфере А (1.5%-ный раствор уксусной кислоты с 2,53.0 М мочевины и 20% сахарозы, рН 3,2) наслаивают на колонку геля, полимеризованную в аппарате для препаративного гель-электрофореза, например, фирмы

"Shandon Southern", Великобритания, Гель состоит иэ 7% акриламида, 0,1% N.N-метилен-бис-акриламида в растворе 2.5-3,0 М. Ы, 1624327 А1 зовано для разделения гипофизарных белков. Цель вЂ” упрощение и ускорение способа. который заключается в проведении препаративного гель-электрофоторетического разделения гипофизарных белков в кислых условиях (рН 3,2-3,5) в присутствии 2,5-3,0

М мочевины, В результате разделения получают 5 белковых фракций (А3, Аг, В, С и 0), которые содержат пролактин, соматотропин (СТГ), неидентифицированные белки и сывороточный альбумин. Изобретение позволяет добиться большей эффективности разработанного способа в связи с выделением большего числа белковых компоненt тов из гипофизарного экстракта. 2 ил., 1 табл. мочевины и 1,5%-ной уксусной кислоты, рН

3,5. Полимеризацию геля осуществляют путем добавления 0,1% персульфата аммония и 0,1% ТЕМЕД (N,N,N,N,-тетраметилэти. лендиамина). Электрофорез ведут при 30вЂ”

60 мА и 270-600 В. В качестве верхнего электродного буфера используют раствор

1,5%-ной уксусной кислоты, рН 2,8, нижнего электродного буфера вЂ” раствор 10 мМ ацетата аммония и 1,5%-ной уксусной кислоты. рН 3,3, Элюцию и сбор фракций начинают в тот момент, когда лидирующие белковые полосы достигают нижней части геля (полосы видны по рефракции). Элюцию белковых полос проводят с помощью раствора 50 мМ ацетата аммония. 4,5% уксусной кислоты, рН 3,6 со скоростью 1,0 мл/мин. Фракции объемом 4,0 мл собирают с помощью коллектора фракций. Белковые пики регистрируют по поглощению света при длине волны

278 нм. Объединенные белковые фракции подвергают лиофильной сушке.

1624327

Изучение белкового состава полученных фракций проводят с помощью аналитического гель-электрофореза в щелочных условиях, Пример 1. 14 мг кислого ацетонированного порошка аденогипофизов крыс растворяют в 0,7 мл кислого буфера А с 2,5 М мочевины и наслаивают на колонку геля в аппарате для препаративного электрофореза, которая предварительно подвергнута преэлектрофорезу (без нанесений пробы) в течение 2 ч. Электрофореэ ведут при напряжении 410 В, которое подается на электроды с помощью источника питания УИП-1, в результате создается ток силой 40 мА. Сбор фракций заканчивают через 4 ч, Профиль элюции представлен на фиг. 1. Полученные фракции подвергают лиофильной сушке.

Аналитический гель-электрофорез в щелочныхх условиях показал, что полученные фракции содержат СТГ (соматотропный гормон),,ПРЛ, сывороточный альбумин и неидентифицированные белки, что подтверждается также определением N-концевых аминокислот (см. таблицу).

Пример 2. Злектрофорез проводят. как и в примере 1, с использованием той же колонки геля, но проба кислого ацетонированного порошка растворена в кислом буфере А с 3.0 М мочевины. Профиль элюции, представленный на фиг. 2, демонстрирует также воспроизводимость способа при повторном использовании колонки геля.

Определение состава белковых фракций с помощью аналитического гель-электрофореза (АГЭФ) в щелочных условиях и

N-концевых аминокислот представлено в

5 таблице.

Таким образом, способ позволяет ускорить процедуру разделения гипофизарных белков в 3-4 раза и повысить экономичность способа за счет- повторного использования

10 колонки геля, Формула изобретения

Способ препаративного гель-электрофоретического разделения гипофизарных

15. белков путем наслаивания буферного раствора белка на колонку, содержащую полимеризованный гель, с последующим разделением элюцией и сбором фракций гипофиэарных белков, отличающийся

20 тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, гель получают из 7ф акриламида и

0,1 N,N-метилен-бис-акриламида в растворе 2.5-3,0 М. мочевины и 1,5 -ной уксусной кислоты, рН 3,5, гипофизарные

25 белки растворяют в этом же растворе с добавлением 20ф сахарозы, рН 3,2, s качестве верхнего электродного буфера используют 1,5 (-ный раствор уксусной кис. лоты, рН 2,8, в качестве нижнего вЂ” 10 мМ

30 раствор ацетата аммония и 1,5$-ный раствор уксусной кислоты, рН 3,3. а элюцию проводят раствором, содержащим 50 мМ ацетата аммония, 4,5 уксусной кислоты, .рН 3,6.

1624327

И д олж. ed.

0,125

О.ЮО

OiNO аог5

50 й- фракции

ФиГ1

4зуе, вжЫ а гз

0,60

ОА75

am аож 0 И

ЯУ франции

Фиа 2

Составитель А, Агуреев

Редактор О. Спесивых Техред М.Моргентал Корректор И. Эрдейи . Заказ 184 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Способ препаративного гель-электрофоретического разделения гипофизарных белков

Изобретение относится к области медицины и касается способов диагностики хронического панкреатита

Способ определения активности каталазы в плазме крови // 1622821

Изобретение относится к биохимии и медицине и позволяет определять активность каталазы плазмы крови в норме и при гипербилнрубинемин

Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и острой пневмонии // 1617382

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике туберкулеза и острой пневмонии

Способ прогнозирования позднего токсикоза беременных // 1612265

Изобретение относится к акушерству

Способ определения пригодности лиц для работы в экстремальных ситуациях // 1612263

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, и может быть использовано для определения пригодности лиц для работы в экстремальных ситуациях

Способ определения активности антитромбина ш в плазме крови // 1608585

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения активности антитромбина Ш в плазме крови

Способ оценки биологической активности органических соединений в водных растворах // 1605206

Изобретение относится к медицине, в частности к разделу биохимических исследований, направленных на изучение и выявление механизма биологической активности компонентов биожидкостей и природных вод

Способ распознавания генотипов риса // 1604274

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в сельском хозяйстве в селекционно-генетических исследованиях

Способ идентификации генотипов сорго // 1604273

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в селекционно-генетических исследованиях

Способ определения скорости лимфотока у интактного экспериментального животного // 1603308

Изобретение относится к области медицины и биологии и может быть использовано в ветеринарии

Способ оценки эффективности замещения костного матрикса при трансплантации в ходе оперативного лечения костной опухоли // 2101708

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии

Способ прогнозирования осложненного течения острого панкреатита // 2102764

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогнозированию течения острого панкреатита

Способ дифференциальной диагностики клинических форм бруцеллеза у людей // 2103687

Изобретение относится к медицине, а, именно, к диагностике бруцеллеза цитохимическими методами

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Синтетические олигопептиды, специфически взаимодействующие с антителами к вирусу гепатита с, способы диагностики hcv- инфекции (варианты) // 2104284

Изобретение относится к медицине, молекулярной биологии и вирусологии и представляет собой биологически активные соединения - синтетические олигопептиды, соответствующие аминокислотным остаткам (а

Способ ранней диагностики послеродового эндометрита // 2104529

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для ранней доклинической диагностики послеродового эндометрита, одного из гнойносептических постгестационных заболеваний

Способ прогнозирования развития цилиохориоидальной отслойки после внутриглазной операции // 2104548

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может найти применение после внутриглазных операций для своевременного принятия профилактических мероприятий

Способ диагностики атрофического эндобронхита // 2104549

Способ определения эффективности иммуноцитотерапии у больных с опг-гестозами // 2105311

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и может найти применение в оценке эффективности терапии гестозов

Способ оценки завершенности формирования соединительнотканного рубца у больных, перенесших инфаркт миокарда // 2105983

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для установления завершенности патологического процесса при инфаркте миокарда (ИМ)