Питательная среда для культивирования вакцинного штамма gersinia реsтis ev-76

 

Изобретение относится к микробиологии, а именно к получению живых вакцин для профилактики чумы. Питательную среду, содержащую автолизат селезенки, гидролизат пшеничных отрубей, модифицируют, включая в нее твин 40, твин 80 тиомочевину, ионы Са. Предлагаемые добавки повышают устойчивость штамма JERSINIA PESTIS EV-76 к лиофилизации. Эта среда позволяет увеличить выход биомассы с единицы объема. Данная среда может найти применение при производстве живой сухой чумной вакцины. 1 табл.

СВОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (qI) g С 12 N 1/20, А 61 К 39/10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А8ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР, (21) 4641801/30-13 (22) 09. 11.88 (46) 15. 12. 90. Бюл. Р 46 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Н.В.Лопатина, А.Н.Терентьев, Л.Л.Наталич и О.В.Перемет (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехноло. гии. Тех.конф. Ч. I, !!ахачкала, 1988, с. 108-109.

Изобретение относится к микробиологии, а именно к получению ж вых сухих вакцин для профилактики чумы.

Целью изобретения является повышение устойчивости штамма ЕЧ-76 к лиофилизации .

Птамм Y. pestis ЕЧ-76 получают на питательной срег,е, содержащей компоненты, г/л:

Автоли зат с ел ез енкп 15-16

Гидр оли эат бел ка пшеничных отрубей 5-6

Натрий хлористый 0,1-0,5

Натрий сернокислый О, 1-0, 01

Агар японский пластинчатый или корсаковский 1,5-2,0

Вода дистиллированная До 1 л

Пример 1. Устойчивые к лиофилизапип штаммы Y.pest is EV-76 по„„Я0„„1613485 А 1

2 (54) П!!ТЛТЕЛВНЛЯ СРЕДА ДЛЛ KYJIbTHHHРОВЛИИ ВЛКП!!ННОГО ИТА!"!!!А YERSINIA

Р STIS EV-76 (57) Изобретение относится к микробиологии, а именно к получению живых вакцин для профилактики чумы. Питательнуюую ср еду, сод ержащую а втоли эат селезенки, гидролизат пшеничных отрубей, модифицируют, включая в нее твин-40, твин 80 тиомочевину, ионы

Са. Предлагаемые добавки повышают устойчивость штамма Yersinia pestis

EV-76 к лиофилизации. Эта среда позволяет увеличить выход биомассы с единицы объема. Данная среда может найти применение при производстве живой сухой чумной вакцины. 1 табл. лучают на искусственной питательной среде, которую готовят следующим образом: берут 15 r сухого автолизата селезенки, добавляют сухой гидролиМ эат белка пшеничных отрубей 5 г,натрий хлористый 0,1 r, натрий сернокислый 0,1 r агар японский пластинчатый или корсаковский 1,5 г, твин 40—

О, 001 r, твин 80 — О, 001 r, хлорис- Ю

TbGf или азотнокислый кальций 0,0005 r....

Разбавляют дистиллированной водой до

1 л, устанавливают рН 7,4. Смесь обрабатывают в автоклзве текучим паром.

Готовую среду фильтруют через марлю, устанавливают рН 7, 1, разливают в посуду и стерилизуют при О, 7 атhf (115 С) 20 мин. Затем в готовую среО ду стерильно добавляют тиомочевину в количестве 0,0005 г/л (тиомочевина

1613485

Пример 2. Птаммы Y.pest is .:V-76 получают на питательной среде, которая в отличие от среды, описанной я примере 1, содержит компоненты в следующих соотношениях, г/л:

Лвтолизат селезенки 15,5

Гидролиэат белка пшеничных отрубей

Натрий хлористый

Натрий сернокислый

Агар японский пластинчатый (или корса ковс кий) 1,75

Твин 40 0,05

Твин 80 0,05

Хлористый кальций ипи а зотнокислый кальций О, 001

Тиомочевина О, 001

Дистиллированная вода До 1л

Тиомочевину добавляют ех tempore 40 с т ерил ьно .

Устойчивость штамма к лиофилизации после культивирования на данной среде увеличилась вдвое, П р и и е р 3. Устойчивые к лио- 45 филизации штаммы Y,pestis EV-76 получают на питательной среде, содержащей, г /л:

Автолизат селезенки 16

Гидролизат белка пшеничных отрубей

Натрий хлористый

На трий с ер но кислый

5,5

0,3

0,5

6 50

0,5

0,1 разлагается при автоклавировании) .

Штаммы, полученные на этой среде, лиофилизируют с применением защитной среды, состоящей из сахарозы 107, желатины 17, тиомочевины 1 . Ампулы с ва к ци ной вс кр ывают, р ес ус пе н зир уют охлажденным до +5ОС физиологическим раствором и высевают на агар Хоттингера для подсчета жизнеспособных клеток. Устойчивость к лиофилизации штамма Y.pestis FV-76, культивируемого «|ë оптимизированной среде, увеличивается в 5 раз, по сравнению с испол ьз ива ни ем пр от от и па . 5

Результаты представлены в таблице. (жизнеспособность клеток Y.pestis

Е 1 — 76 после лиофилизации в зависимости от концентрации предлагаемых добавок к среде "СО").

Агар японский пластинча— тый (или корса ковский) 2,0

Твин 40 0,01

Твин 80 0,01

Хлори стыл или а э от нокисв лый кальций 0,002

Тиомочевина 0,002

Дистиллированная вода До 1л

Тиомочевину добавляют ех tempore стерильно.

Устой гивость к лиофилизации штамма Y.pestis FV-76 после культивирования на этой среде увеличилась в

3 раза по сравн .нию с использованием известной среды.

Таким образом, кул ьтивир она ни е штамма V . pest is EV-76 на оптимизированной питательной среде позволяет в

2-5 раз увеличив, ть устойчиность птамма Y.pestis ЕЧ-76 к лиофилиэации. Параллельно с увеличением уст ойчи в ости выход биомассы на пр едла— гаемой среде возрастает на 60-707.

0,0005-0,002

0,0005-0,002

1, 5-2,0

До 1л

Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я

Питательная среда для культивирования вакцинного штамма Yersin ia

pestis EV-76, содержащая автолизат селезенки, гидролизат белка пшеничных отрубей, натрий сернокислый, натрий хлористьп, агар и воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения устой-iHBoc TH штамма к лиофилизации, среда дополнительно содержит твин 40, твин 80, тиомочевину, хлористый кальций или азотнокисльп кальций при следующем содержании компонентов, г/л:

Лвтолизат с еле зенки 15-16

Гидролизат белка пшеничнь х отр убей 5-6

Натрий хлористьп О, 1-0, 5

Натрий сернокислый 0,01-0,1

Твин 40 О, 001-0, 01

Твин 80 О, 001-0, 01

Хлористый кальций или азотнокислый кал ьций

Тиомоч евина

Агар

Вода дистиллированная

1613485

Жиз неспособность клеток Y.pestis

ЕЧ-76 после лиофилизациию

Количество жиэнеспособОптическая плотДобавки к среде

"СО", г /л ность микробной массы в мл у pË ных клеток

Y.pestis

ЕЧ-76 по отношению к числу клеток до лиофилиза ции, 7

Твин 40 — О, 1

Твин 80 — О, 1

СаС1 или CACO О, 1

Тиомочевина О, 1

Предлагаемый оптимизированный вариант среды

Твин 40 — О, 005

Твин 80 — О, 005

23,3+1,7

40-50

37,3+1,3

70-90

CaCl < или Ca(N03)z

0,001

Тиомочевина О, 001

Твин 40 — О, 0001

Твин 80 — О, 0001

40-50

11,4Ы,З

СаС! 2 или Са (NO 3)а

О, 0001

Тиомочевина О, 0001

Среда "СО" прототип без добавок

30-50

16,0+1,68

Составитель А,Федоров

Реда ктор О. Спесивых Техр ед M. Дидык Корректор И.Эрдейи

Заказ 3867 Тираж 502 Подписное

ВНИИ11И Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина,101