Способ определения теофиллина в плазме крови

 

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической биохимии. Способ включает обработку плазмы крови смесью вода-серная кислотавольфрамат натрия, центрифугирование пробы, обработку центрифугата хлорамином, щелочным раствором тимола и фотометрируют при λ=458 HN. Способ обладает высокой чувствительностью (0,2 мкг/мл), простотой и доступностью выполнения (время определения 25 мин) и может быть использован в клиникобиохимических исследованиях, контрольно-аналитических лабораториях.

г . СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/48

- ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4488151/30-14 (22) 28.09.88 (46) 23.10.90. Бал. N. 39 (71) Витебский медицинский институт (72) В.П.Хейдоров и Э.Я.Морозова (53) 615.717 (088.8) (56) Trultt Е.B., Carr 1г.СЛ., Bubert Н.М., Krantz I,С. Quantitative Estimation of

Theophylline In Blood. — J. pharmacoI. exp.

Therapeut, 1947. М 91, р. 185. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕОФИЛЛИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии.

Целью изобретеНия является повышение точности и ускорение способа, Способ осуществляют следующим образом.

Плазму крови осаждают смесью вода— серная кислота — вольфрамат натрия в соотношении 1:1:1, центрифугируют, центрифугат обрабатывают последовательно растворами хлорамина Б и щелочным раствором тимола, нагревают и фотометрируют полученный окрашенный раствор при1=458 нм, Способ быстро выполним, используемые реактивы доступны и дешевы. Точность способа составляет 0,77%, прототипа

9,60%. Нижняя граница определения 2 мкг теофиллина на 2 мл плазмы крови.

Способ является избирательным, основанным на высокоспецифической химической реакции. Определению теофиллина не мешают кофеин, кофеин-бензоат натрия, теобромин, дипрофиллин, мочевая кислота, мочевина, аллоксан, пуриновые и пирими.. Ж,„, 1601578 А1 (57) Изобретение относится к медицине, точнее к клинической биохимии. Способ включает обработку плазмы крови смесью вода — серная кислота — вольфрамат натрия, центрифугирование пробы, обработку центрифугата хлорамином, щелочным раствором тимола и фотометрирование при

=458 нм. Способ обладает высокой чувствительностью (0,2 мкг/MR), простотой и доступностью выполнения (время определения 25 мин) и может быть использован в клинико-биохимических исследованиях, контрольно-аналитических лабораториях. 2 табл. диновые основания и их нуклеозиды и нуклеотиды, барбитураты, этилендиамин, ряд других лекарственных препаратов.

Пример, К 2 мл плазмы крови прибавляют 2 мл дважды перегнанной воды, перемешивают, прибавляют 2 мл 2/3 N серной кислоты и снова перемешивают. После этого по каплям прибавляют, перемешивая, 2 мл

10%-ного раствора вольфрамата натрия.

Смесь хорошо перемешивают и центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, отмеривают 6 мл и переносят в пробирку, прибавляют 3 мл

10%-ного водного раствора хлорамина Б, перемешивают и оставляют в штативе. Через 2 — 3 мин прибавляют 1 мл 0,4%-ного водного раствора тимола в 15%-ном растворе гидроксида натрия, смесь перемешивают и помещают в водяную баню на 20 мин при

60 С. Окрашенные растворы охлаждают и измеряют оптическую плот»:. зсть при 458 нм, например, на ФЭК-56М (светофильтр ¹ 4, кювета толщиной слоя 20 мм) относительно раствора сравнения, который представляет смесь реактивов: 2 мл 2/3 N серной кислоты, 1601578

Сх 8

Х=—

6 2

Таблица 1

П р и м е ч а н и е . Х вЂ” средний результат определения;

Sx — стандартное отклонение среднего результата;

Ю,os — точность определения;

Ео — относительная дисперсия (при цдля вероятности 95 ).

Таблица 2

Я мл 10 -ного вольфрамата натрия, 2 мл воды и т.д., как указано. Количественную оценку концентрации теофиллина проводят по калибровочному графику, для его постро;вния в пробирки вносят различные объемы. стандартного раствора теофиллина с содер жанием 1 — 80 мкг (при определении тера1певтических доз теофиллина в крови

; достаточно интервала 1 — 30 мкг), доливают

1водой до 6 мл и проводят определение, как описано. При нахождении содержания тео1 ,филлина в анализируемой пробе вычитают величину 0,07 (поправка на оптическую

:плотность контроля — плазмы крови беэ теофиллина) от измеренного значения оптиче! СКОЙ ПЛОТНОСТИ.

Результаты определения теофиллина s

:; модельных водных растворах и статистиче, :ская обработка приведены в табл.1.

Предлагаемый способ позволяет опре, делять от 1 до 80 мкг теофиллина в 10 мл конечного объема. Время определения до

25 мин (при 45 мин по прототипу).

Способ прост и доступен в выполнении, ; позволяет проводить серийные анализы.

По разработанному способу было взято

°, несколько- различных образцов донорской крови, из которой центрифугированием от; деляли плазму, в отдельные пробы которой

::: добавляли разные количества теофиллина, а далее поступали, как описано, Данные приведены в табл.2.

Метрологическая характеристика указывает на хорошую воспроиэводимость и

5 точность результатов определения.теофиллина.

Расчет содержания теофиллина Х в 1 мл плазмы крови проводят по формуле где CX — концентрация теофиллина (мкг), найденная в анализируемой пробе по ка15 либровочному графику.

Формула изобретения

Способ определения теофиллина в плазме крови путем последовательной обработки анализируемой пробы химически20 ми реагентами и фотометрированием полученного окрашенного раствора, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, осаждение плазмы крови проводят смесью вода — 2/3 И

25 серная кислота — 10 -ный раствор вольфрамата натрия в соотношении 1:1:1, а обрабатывают центрифугат хлорамином, затем щелочным раствором тимола, нагревают и фотометрируют при il, = 458 нм.