Способ получения культуры клеток животных

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве лечебно-профилактических и диагностических препаратов. Цель изобретения - увеличение прироста клеточной массы. Стимуляция пролиферации клеток в культуре достигается кратковременной обработкой высокочастотным ультразвуком низкой интенсивности клеток перед пассированием. Облучение суспензии перевиваемых клеток почти теленка МДВК, ВНК проводят в непрерывном режиме. Для воздействия ультразвуком суспензию клеток помещают в стеклянную кювету, куда погружают ультразвуковой излучатель. Частота действующего ультразвука 880 кГц, интенсивность 0,02-0,08 Вт<SP POS="POST">.</SP>см<SP POS="POST">-2</SP>, время экспозиции 5-30 с. При всех режимах обработки наблюдается повышение индекса пролиферации клеток. 1 табл.

сОюз сОВетсних

СОЦИАЛИСТ ИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ЦЯ> <11> (g))g С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТ0РСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4465008/30-13 (22) 22.07.88 (46) 07.10.90. Бюл. N - 37 (71) Московская ветеринарная академия им. К.И.Скрябина (72) А.А.Олешкевич, В.Б.Акопян и Л.П.Смирнова (53) 578.085.23(088.8) (56) Дьяконов Л.П. и др. Культивирование клеток и тканей животных.

Ставрополь, 1986, с. 47-51. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК

ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве лечебно-профилактических. и диагностических препаратов. Цель

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве лечебно-профилактических и диагностических препаратов.

Целью изобретения является увеличение прироста клеточной массы.

Пример 1. Клетки, не обработанные ультразвуком (контрольный образец), в посадочной концентрации

8 10 кл/мл засевают на матрасные колбы. Объем клеточной суспензии

10 мл. Монослой формируется на третьи сутки. Концентрация клеток 31 х х 10 кл/мл, индекс пролиферации 3,8.

Пример 2. Объем и концентрация клеточной суспензии аналогичны примеру 1. Образец обрабатывают ультразвуком частотой 880 кГц с интенсивностью 0,005 Вт см- в течение 5 с.

Максимальный прирост клеточной массы

2 изобретения — увеличение прироста клеточной массы. Стимуляция пролиферации клеток в культуре достигается кратковременной обработкой высокочастотным ультразвуком низкой интенсивности клеток перед пассированием. Облучение суспензии перевиваемых клеток почки теленка МДВК, BHK проводят в непрерывном режиме. Для воздействия ультразвуком суспензию клеток помещают в стеклянную кювету, куда погружают ультразвуковой излучатель. Частота действующего ультразвука 880 кГц, интенсивность 0,02-0,08 Вт см, время экспозиции 5-30 с. При всех режимах обработки наблюдается повышение индекса пролиферации клеток. 1 табл. составляет 620 тыс. кл/мл (62 10 кл/мл), индекс пролиферации 7, 7.

Пример 3. Объем, концентрация клеточной суспензии и время образования монослоя аналогичны примеру 2. Суспензию клеток обрабатывают ультразвуком частотой 880 кГц с интенсивностью 0,02 Вт см в течение .10 с. Индекс пролиферации 6,7, что соответствует максимальному приросту клеточной массы 53 -10 кл/мл.

Пример 4. Объем, концентрация клеточной суспензии, время образования монослоя, частота и интенсивность действующего ультразвука анало гичны примеру 2. Время озвучивания суспензии клеток 30 с. Индекс пролиферации 5,0, что соответствует максимальному приросту клеточной массы

40 104 кл/мл.

° 1597387 прирост клеток и сократить время на получение единицы объема клеточной массы (ИДВК, ВНК и др.}.

Формула изобретения

Способ получения культуры клеток животных путем пассирования клеток в синтетической питательной среде, отличающийся тем, что, с целью увеличения прироста клеточной массы, на клетки перед пассированием воздействуют ультразвуком с частотой

880 кГц и интенсивностью 0,02—

0,08 Вт см в течение 5-30 с.

Способ прост в исполнении, не требует для осуществления дорогостоящего оборудования, позволяет увеличить

Прирост кле- 1 Индекс прблиточной мас- ферации сы, кл/мл Время воздействия ультразвуком, с

Интенсивность действующего ультразвука, Вт см

Без обработки

30!

Составитель А.Маныкин

Техред M.Дидык Корректор Л.Бескиц

Редактор И.Дербак

Заказ 3032

Тираж 486

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,101

Общая зависимость выхода клеточной массы от интенсивности и длительности ультразвуковой обработки приведена в таблице.

Из данных таблицы видно, что оптимальный режим составляет 0,02

0,08 Вт;см при экспозиции 5-30 с.

В этом случае наблюдают максимальный,,прирост клеточной массы - от 35 10 10 до 72 10" кл/мл, что соответствуетиндексу пролиферации 4,4-9,0.

0,02

0,03

0,05

0,06

0,08

0,02

0,03

0,05

0,06

0,08

0,02

0,03

0,05

0,06

0,08

31 10

45 10

59 ° 10+

62 ° 10

55. 104

44 104

53 10"

70 -10

72. 10

68 ° 10

59 10+

40 10

50 10+

58.10

50 10

35 10

3,8

5,6

7,4

7,7

7,0

5,5

6,7

8,7

9,0

8,5

7,4

5,0

6,2

7,2

6,2

4,4