Способ скрининга нематицидов

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

C12N5 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

Изобретение относится к области биотехнологии и касается защиты растений от нематод. Способ с успехом можно применять в сельском хозяйстве. Целью изобретения является упрощение и ускорение анализа. Способ состоит в том, что растительный материал заражают стерильными нематодами, обрабатывают нематицидом, активность которого исследуют, после чего подсчитывают через 6-15 сут количество жизнеспособных нематод, при этом в качестве растительного материала используют культивируемые IN VITRO ткани растений. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ ц

РЕСПУбЛИК

96251 А 1. 091 (10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ (ННТ СССР

{21) 4493578/30-13 (22) 1 3.10.88 (46) 30.09.90. Бюл. У 36 (71) Всесоюзный институт гельминто" логии им. К.И. Скрябина и Всесоюзный научно-исследовательский институт риса (72) И.Б. Попова и Л.Н..Титаренко е (53) 578.085.23(088.8) (56) Попова М.Б, Шестиперов А,А.

Эффективность тиабендазола и бенлата в борьбе с рисовым афеленхоидом.

Бюлл. Всесоюзного института гельминтологии, вып. 23,- с. 20-28, 1978о (54) СПОСОБ СКРИНИНГА НЕИАТИЦИДОВ

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к защите растений, и может быть использовано при отборе высокоактивных соединений для борьбы с паразитическими нематодамн сельскохозяйственных растений.

Целью изобретения является ускорение и упрощение анализа.

Способ состоит в том, что отбор высокоактивных нематицидов проводят путем использования культуры ткани (каплусы, или проростки ), инокуляцией ее стерильными нематодами с одновременным внесенйем растворов испытуемых

-препаратов. Оценку нематицидности препаратов осуществляют через 6-15 дней после инокуляции культуры ткани риса. нематодами по наличию жизнеспособных нематод в культуре ткани, оценку фитотоксичности вЂ” по росту каллусной массы и растений-регенерантов. (51)5 G 01 N 33/48, С 12 N 5/00

2 (57) Изобретение относится к области биотехнологии и касается защиты растений от нематод. Способ с успехом можно применять в сельском хозяйстве.

Целью изобретения является упрощение и ускорение анализа. Способ состоит в том, что растительный материал заражают стерильными нематодами, обрабатывают нематицидом, активность которого исследуют, после чего подсчитывают через 6-15 сут количество жизнеспособных нематод, при этом в качестве растительного материала используют культивируемые in vitrn ткани растений. 1 табл.

Способ обеспечивает. отбор химических соединений контактного и системного действия, нефитотоксичных, высо-, коактивных дпя борьбы с рисовой листо- ф вой нематодой. С0

П р и и е р 1, В пять пробирок с каллусами и в пять пробирок с проростками восприимчивого к нематоде .сорта риса Дубовский 129 вносят по

0,3 мп 1Х-ного раствора биабендаэола (известного нематицида ) и 0,15 мп водг ной суспензии стерильных нематод иэ расчета 100 особей на одну пробирку.

В пять контрольных пробирок с каллусами и в пять контрольных пробирок с проростками риса вносят по 0,15 мп водной суспенэии стерильных нематод иэ расчета 100 особей в каждую пробирку.

Далее пробирки с каллусами помеО щают в термостат при температуре 28 С

1596251

Пример 3. Схема и методика опыта аналогична описанным в примерах и 2. В качестве испытуемого препарата берут химическое соединение В 401 с неизвестной нематоцидной активностью.

При оценке результатов через 615 дней после внесения препарата и и нематод в пробирках с каллусами и проростками не выявлено ни одной подвижной нематоды, что указывает на вы пробирки с проростками - в камеру с температурой 28 С. и освещенностью

2000 лк.

Контроль для примеров 1-3. один и тот же.

Оценку нематицидности препарата проводят через 6-15 дней после его внесения.

При просмотре под микроскопом

МБС-2 на стенках пробирок не обнаружено ни одной подвижной особи нематод, что свидетельствует о высокой нематицидной активности препарата.

Следовательно, выявлена и подтверж-15 ена высокая нематицидная активность тиабендаэола.

Не отмечено угнетения роста каплусаи растения, что указывало на отсутствие фитотоксичного действия препаата.

В контрольных пробирках с каллусами и проростками риса через несть дней найдены единичные особи нематод ,(1-12 экз. ), численность которых к пятнадцатому дню возросла до 250300 экэ.

Пример 2. В пять пробирок с саллусами и в 5 пробирок с проросткариса вносят па 0,3 мл 1%-ного раствора используемого препарата Ф 391 и по 0,15 мп водной суспенэии нема год из расчета 100 особей в одну пробирку.

Дальнейший ход эксперимента аналогичен описанному в примере 1, При учете через шесть дней в проирках с каллусами и проростками риса тмечены единичные особи активнодейтвующих нематод, через 15 дней их ко40 пичество составляет соответственно

200-250 и 200-230 экз .

Указанное свидетельствует о размножении нематод в культуре ткани риса, 45 препарата У 39) и его нефитотоксичности о сокую нематоцидную активность соединения .

Отмеченные потемнение и угнетение роста каллуса и проростка свидетельствует о фототоксичности препарата.

Пример 4 (по прототипу ). Опыт проводят в теплице. В десять вазонов с простерилизованной почвой высевают по десять семян риса. При появлении всходов проводят инокуляции нематодами из расчета 500 особей на одной растение. Растения в фазе трех листьев в пяти вазонах обрабатывают 1%-ным раствором тиабендазола. Контроль - пять вазонов с зараженными растениями риса без обработки препаратом.

В период выращивания риса проводят все мероприятия по уходу за растениями (подкормка, обеспечение водного и светового режима и др.).

Оценку нематицидной активности препарата проводят в конце вегетации растений (через 120 дней после посева семян ) по зараженности метелок риса нематодами. Нематод из зерна риса выделяют методом Бермана. Анализируют пятьдесят растений в опытном варианте и пятьдесят растений в контроле.

Пробы просматривают под микроскопом.

Наличие нематод свидетельствует о.зараженности растения. Зараженность растений в варианте с обработкой тиабендазолом составляет 48%, в контроле 88%. Нематоцидную активность препарата устанавливают по относительному количеству зараженных растений от аналогичного показателя в контроле по формуле (a-б) 100

ТЭ= а где а вЂ” число зараженных растений в контроле, б вЂ” число зараженных растений в опыте.

Техническая эффективность (ТЭ% ) применения тиабендазола 45,4%.

Фитотоксического действия препарата не отмечено.

Работу по приготовлению растворов испытываемых препаратов, суспензии стерильных нематод и внесению их в. пробирки с культурой ткани риса проводят в стерильных условиях (в боксе).

Результаты опытов в приведенных примерах свидетельствуют о высокой эффективности предлагаемого способа отбора высокоактивных нематицидов.

Использование предлагаемого способа

S 1596251 6 дпя оценки нематицидной активности их BereTaIUmj стерилизации почвы, .тиабендизола подтверждает высокую вазонов и т.д активность действия этого препарата Использование способа искл Очает на рисовую листовую нематоду (1003) влияние окружающей среды (rioxog

5 тогда как при оценке его активности условий, других организмов) на оцен известным способом (прототип) эф@ек- ку активности препаратов при их тивность составляет 45,4Х.

СКХХИНИНГЕ. ! !

Формула из о бр ет ения

Оценку препаратов на нематоцид" tO Способ скрининга нематицидов, ность проводят в течение 6-15 дней, включающий заражение растительного тогда как для оценки нематицидной,материала нематодами, обработку его активности тиабендазола известным . нематицидами и оценку активности неспособом (прототип ) требуется 120 матицидов, отличающийся дней. 15 тем, что, с целью упрощения и ускореСпособ позволяет повысить проиэ- ния анализа, в качестве растительного водительность труда и снизить трудо- материала используют культнвируемые затраты, так как его использование in vitro ткани растений, а оценку исключает необходимость проведения активности проводят путем подсчета анализов по вьщелению нематод из рас- количества жизнеспособных нематод че20 тений, ухода за растениями в период рез 6-15 сут после заражения.

Оценка способов первичной оценки ненатицнднай активности препаратов против рисовой листовой ненатоды

Оценка фнтотокснчности препарата

Сроки проведение нспытаниа, ДНН и нан концентрацюг раствора препарата, Х

Использованный субстрат

Химические соединение н препараты р п/и

Текннческаа зффектна ность енкв активности действие првларатв

ОЛ-ВО вранен вк рве еинй, Х через

15 дней рез дней через

15 дней через

6 дней

ppenapsva, Х!

00,0

1 Тиабендазол, 75Х д.н.

Хоровое каллусообразованне (отсутствие фнтотокснчности ) 6-15.

1,0

Квллус

Тивбендазол, 752 д р

Препарат Р 391

Прсиарот Р 391

Препарат Р 401

Препарат Р 40!

11 II Н I I I 11 II \

6-15

6-.15

3-10

l-7

1,0 ! iO

1,0

1 ° 0

1,0

100,0

lOOiO

1O0,О

200-250

230-250

Проростки

Каллус

llpOp0CTKN

Каллус

Проросткн

Потеннение каллуса (проявление фитотаксичностн) коронка каллусообр.

4 Контроль без внесения препарата

250-300

5-12

6-15

Квллус

11 Н II 11 II Ь

200-250

I-IO

6" 15

Проросткн

ПОрнальное р&зеиТНЕ ПРОРОСТКОВ

Тиабендазол, 752 д,н, Растение (прототип) 1,0

45,4

4В.О

110-120

Норнальное развитие раста п и

Отсутствие фнтотоксичности

Контроль (без обработки преПЕРЕТОН

1 I ° 11 11

88,О

Составитель В. Демкин

Редактор Н. Горват Техред g.дидык КоРРектоР С. Шевкун

Заказ 2906 Тираж 518 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ С(ТСР

113035, Иосквав Ж-35, Раушская каб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Изобретение относится к клинической биохимии и касается способа определения содержания тирозина в плазме крови

Способ дифференциальной диагностики и геморрагического и ишемического инсульта // 1596249

Изобретение относится к области медицины, в частности к невропатологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики геморрагического и ишемического инсульта

Способ диагностики уросепсиса // 1596248

Изобретение относится к области медицины, в частности к урологии, и может быть использовано для диагностики уросепсиса

Способ определения жизнеспособности клеток // 1596247

Изобретение относится к области биотехнологии, а также может быть использовано в медицине, в экологии и охране окружающей среды, в фундаментальной биологии клетки, при контроле за состоянием клеточных культур

Способ спектрофотометрического количественного определения но-шпы, выделенной из биологического материала // 1594427

Способ прогнозирования исходов острых гнойно-деструктивных легочно-плевральных заболеваний // 1594426

Изобретение относится к медицине, конкретно к способам прогнозирования исходов острых гнойно-деструктивных легочно-плевральных заболеваний и осложнений

Способ выявления серотонина на гистологическом препарате // 1594370

Изобретение относится к медицине, а именно нейрогистологии

Способ определения гонадотоксического действия веществ // 1589214

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения гонадотоксического действия веществ

Способ депарафинирования срезов при изготовлении постоянных цитологических препаратов // 1589213

Изобретение относится к цитологии и может быть использовано при изготовлении постоянных цитологических препаратов

Способ дифференциальной диагностики функционального нарушения и воспалительного состояния поджелудочной железы // 1589212

Изобретение относится к области медицины, конкретно - к гастроэнтерологии, и позволяет выявить ранние функциональные нарушения и воспалительное состояние поджелудочной железы, назначить своевременное лечение

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l. продуцент моноклональных антител к инсулину // 1595903

Изобретение относится к гибридомной технологии и может быть использовано для индикации и аффинной очистки инсулина человека

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l, используемый для получения моноклональных антител к антигену сд38 кортикальных тимоцитов // 1595902

Изобретение относится к гибридомной технологии и может быть использовано для определения иммунологического статуса организма

Столик для размещения приспособлений на сосуде дьюара // 1594213

Изобретение относится к криобиологии, а именно к устройствам для работы с биообъектами, замороженными в криогенных сосудах Дьюара

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus - продуцент гемопоэтического ростового фактора // 1585330

Изобретение относится к гибридомной технологии и может быть использовано при разработке методов лечения болезней крови

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus - продуцент моноклональных антител к фактору некроза опухоли @ человека // 1585329

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к штаммам гибридных клеток, секретирующих антитела определенной специфичности

Способ выращивания картофеля // 1585328

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при выращивании вегетативно размножающихся сельскохозяйственных растений методом апикальной меристемы

Штамм культивируемых клеток кожи и мышц эмбриона африканской зеленой мартышки для размножения вирусов // 1583440

Изобретение относится к вирусологии, биотехнологии и касается получения нового штамма гетероплоидных клеток из кожи и мышц эмбриона зеленой мартышки 4921, изучение его свойств, аттестации в качестве безопасного клеточного субстрата и оценки пригодности для применения в вирусологической практике, в том числе и вакцинном производстве

Способ микроклонального размножения гибридов осины // 1581741

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться при воспроизводстве лесных древесных растений

Способ культивирования тучных клеток // 1578193

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для исследования процессов гемопоэза

Способ выращивания клеток печени // 1578192

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для выращивания культур клеток печени, пригодных для трансплантации в целях коррекции печеночной недостаточности

Способ выращивания биомассы женьшеня // 2101934