Штамм рнаguм реsтis для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике чумы. Целью изобретения является чумной фаг Ф-132 нового III серологического типа для внутривидовой дифференциации микроба чумы. Фаг Ф-132 обладает хорошо выраженной видовой литической специфичностью, что позволяет использовать его для дифференциации штаммов возбудителя чумы, выделенных в различных очагах. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5))5 С 12 N 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4333146/28-13 (22) 24..11.87 (46) 15.07.90. Бюл. N - 26 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Н.Н.Новосельцев и В.И.Марченков (53) 576.8.077.5(088.8) (56) Гольдфарт Л.М. и др. Некоторые особенности чумного бактериофага

М-1 ° — Материалы Всесоюзного симпозиума, посвященного 60-летию Тбилисского НИИВС, Тбилиси, 1984, с. 38-40. г

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике чумы.

Цель изобретения . — чумной фаг

Ф-132 нового III серологического типа, используемый для внутривидовой дифференциации микроба чумы.

Фаг Ф-132 получен в 1983 г. из штамма 2247 чумного микроба, выделенного от блох в приаральских Кара-Кумах Среднеазиатского пустынного очага, и может быть использован как представитель чумных фагов нового III серологического типа и как диагностический для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы.

Фаг Ф-132 депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером

Ф-132.

„„SU 157 1 4 А1

2 (54) ШТАММ PHAGUM PESTES ДЛЯ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ

ЧУМЫ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике чумы. Целью изобретения является чумной фаг

Ф-132 нового III серологического типа для внутривидовой дифференциации микроба чумы. Фаг Ф-132 обладает хорошо выраженной видовой литической специфичностью, что позволяет использовать его для дифференциации штаммов возбудителя чумы, выделенных в различных очагах. 3 табл.

Чумной фаг Ф-132 имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику.

Величина негативных колоний на газоне чумного вакционного штамма

ЕВ-76, выращенном двухслойным методом на агаре Хоттингера рН 7,1 равная около 1 мм в диаметре, округлой формы, с четким, хорошо контурированным краем, с прозрачным центром и слабо выраженной полупрозрачной периферией.

Фаг Ф-132 имеет головку правильной гексагональной формы и отросток, способный к сокращению. Больший разо мер головки составляет 649329 А меньо ший 598Й26 А. Длина отростка l203«

«+34 А его ширина 225т10 А. Длина соко ратившегося чехла 554+17 А, его ширина

278 14 A.

1578194

По классификации A.Ñ.Òèõîíåíêî (1968) фаг относится к пятой морфологической группе.

Одиночный цикл развития фага Ф-132 на клетках чумного вакционного штамма ЕВ-76 при 28 С в бульоне ЛБ сосо тавляет 150 мин. Период нарастания концентрации фаговых корпускул продолжается 30 мин. Урожай на одну клет -10 ку бактерий находится в пределах 9

74 корпускул. Константы адсорбции

-fO (О составляли: К 3,7 ° 10, К„, 2 2-10

К< 1,9" 10

Оптимальная множественность эара-1 -3 гS жения составляет 10 — 10

Фаг активно репродуцируется на клетках чумного вакционного штамма

ЕВ-76 в жидких питательных средах рН а

7, 1-7,2 при 28 С. Заражение 1б-18-часовой бульонной культуры этого штамма, имеющей концентрацию клеток и х х 10 фагом с указанной множественностью позволяет получать через 18

20 члизаты с титром п.10 - n 10 BOE/ìë. 25

Полезные свойства фагов иллюстрируются следующими примерами, Пример 1. Антифаговую сыноротку получают иммунизацией кроликов фагом Ф-132 по методу 1О.Н.Марьиной (1981) .

Сыворотка специфически активна против гомологичного фага и не вызывает инактивации чумных фагов I u II серстипов, В свою очередь сыворотки против чумных фагов I u II серотипов„

35 нейтрализуя гомологичные фаги, не обладают активностью в отношении фага

Ф-132 (табл. 1).

Специфичность и диапазон литической активности фага Ф-132 испытывают на 1540 штаммах. Чумной фаг Ф-132

III серотипа обладает выраженной специфичностью. Фаг лизирует 421 штамм возбудителя чумы при этом проявляет

45 активность лишь в отношении Т штамма псевдотуберкулезного микроба и I штамма возбудителя кишечного иерсиниоза (табл. 2).

При явно выраженной видовой литической специфичности фаг Ф-132 обладает не одинаковой активностью в отношении штаммов, выделенных в различных природных очаг ах чумы.

Из 61 штамма, вьщеленного в Ленинаканском и Зангезуро-Карабахском очагах Закавказского Нагорья, 56 (91,8 ) составляют резистентные. Из

19 штаммов, изолированных в Монголии, устойчивыми являются 10 (52,6 ), а

4 штамма из Тувы представляют только устойчивые формы. Штаммы иэ других природных очагов подвергаются лизису почти полностью (табл. 3).

Существование устойчивых к фагу

Ф-132 форм чумного микроба преимущественно в отдельных природных очагах этой нндфекции создает своеобразную маркировку возбудителя.

Ф

Пример 2. Препарат фага

Ф-132 используют для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы следующим образом.

В пробирку с 3,0-4,5 мл 0,7 агара (на любой питательной основе) расУ о плавленного и остуженного до 45-47 С, добавляют 0,1 мл 18-часовой бульонной культуры (или 1 миллиардную взвесь

18-часовой агаровой) исследуемого штамма чумного микроба и выливают на

1,5 .-ную агаровую пластинку в чашку

Петри. После застывания мягкого слоя чашку немного подсушивают и на поверхность arapa наносят каплю фага

Ф-132 с концентрацией и 10 БОЕ/мл.

Посевы инкубируют в термостате при о

28 . Результаты учитывают через 1820 ч, рассматривая чашки в проходящем свете.

Отсутствие лизиса на месте нанесения фага означает, что исследуемый штамм бактерий чумы принадлежит к возбудителю, циркулирующему в Ленинаканском и Зангезуро-Карабахском очагах Закавказского Нагорья, Монголии и Туве. Наличие лизиса на месте нанесения фага свицетельствует о принадлежности изучаемого штамма к возбудителю чумы, вьщеленному в других природных очагах этой инфекции.

Ф о р м у л а и з обретения

Штамм Phagum pestis ТНИИВС Ф-132 для внутривидовой,цифференциации возбудителя чумы.

1578!94

Т а блица 1

Нейтрализующее действие кроличьих антифаговых сывороток на фаги чумного микроба

Нейтрализующее действие фагов

Сыворотки против фагов (разведения) Ф-132 Покровский* Л-4 13 С

III серотнп I серотип II серотип

Ф-132 (1:80)

Покровский (1:200)

Л-413 С (f 100) 98,87

О

О

99,0Х

О

100Х

* — использовали коммерческую антифаговую сыворотку

Таблица 2

Специфичность и диапазон действия чумного фага

Ф-132 нового III серологического типа

Иэ них

Вид бактерий Количество исследованных штаммов лизируются не лизируются

266

266

О ила

Табл

Литическая активность чумного фага Ф-132 нового III серологического типа в отношении штаммов микроба чумы, выделенных в различных природных очагах

Место выделения штамма Количество исследованных штаммов

Из них лнзируются не лизируются абсол. j Х

19

51 91,8

5 100

10 52,6

4 100

428 .

О7

21 4,9

ВСИГО:

512

421

91 17,8

Составитель О.Жакетов

Редактор М.Недолуженко Техред М,яндык Корректор Л.Бескид

Заказ 1892 Тираж 480 Подписное

ВНИИПИ Государственнсго комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Гагарина, 101

J. pestis

J. pseudotuberculosis

3. entегоcolitica

Е. coli

Shigella

Представители других видов

Закавказское нагорье:

Эингеэуро-Карабахский, очаг

Ленинаканский очаг

Ионголия

Тува

Другие природные очаги, мутанты, штаммы неизвестного происхоядения

512

262

252

158

421

1

91

261

251

158