Способ дифференциации лизогенных штаммов холерных вибрионов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике холеры. Цель изобретения - повышение точности способа. Лизогенные культуры холерных вибрионов выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-20% в течение 12-48 ч, затем наносят взвесь на газон индикаторного штамма V.ELTOR-75, засеянного в один из слоев плотной питательной среды. Учет ведут через 12-14 ч по наличию лизиса индикаторной культуры фагом. При наличии лизиса индикаторной культуры определяют лизогенный штамм холерного вибриона, продуцирующего устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса - лизогенный штамм, продуцирующий чувствительный к мочевине фаг.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU(II) 15781

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ. ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4426571/30-13 (22) 18. 05. 88 (46) !5.07.90. Бюл. Ф 26 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Т.А.Кудрякова, Л.Д.Македонова и Л.Р.Черкасова (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Микробиология и лабораторная диагностика холеры. Краткое руководство. Ростов-на-Дону, 1975, с. 109-110. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЛИЗОГЕННЫХ

HlTAMN0B ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике холеры.

Цель изобретения — повышение точ-. ности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Лиэогенные бактерии выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-207 в течение 12-48 ч и затем наносят взвесь на газон индикаторного штамма Vibrio

eltor 75.

Учет ведут через .12-14 ч по наличию лизиса индикаторного штамма фагом.

При наличии лиэиса индикаторной культуры дифференцируют 1 тип лизогенных штаммов (продуцирующих фаг, устойчи(51)5 С 12 И 1/20, С 12 Q 1/00 //

//(С 12 Q 1/00, С 12 R 1:63) 2 использовано при диагностике холеры.

Цель изобретения — повышение точности способа. Лизогенные культуры холерных вибрионов выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-20Х, в течение 12-48 ч, затем наносят взвесь на газон индикаторного штамма Ч.eltor-75, засеянного в один из слоев плотной питательной среды. Учет ведут через 12-14 ч по наличию лизиса индикаторной культуры фагом. При наличии лизиса индикаторной культуры определяют лизогенный штамм холерного вибриона, продуцирующего устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса — лизогенный штамм, продуцирующий чувствительный к мочевине фаг, вый к мочевине). Отсутствие лизиса свидетельствует о принадлежности штаммов ко II типу (продуцирующих фаг, р чувствительный к мочевине).

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для приготовления © раствора мочевины берут навеску 10 г, вносят в 1.00 мл бульона Мартена (рН

7,6-7,8). Среду стерилизуют кипячением в течение 30 мин и разливают по

2 мл в пробирки. Бульон с мочевиной совершенно прозрачен.

° вай

Отсеивают в две пробирки с 2 мл бульона, содержащего 103 мочевины, по одной петле суточных агаровых культур лизогенных вибрионов зльтор

377 и 1540. Выращивают s течение

1578189

Штаммы вибрионов эльтор 377 образуют зону фаголизиса (I тип).

Использование способа позволяет повысить точность дифференциации за счет выявления различий внутри лизогенных штаммов по свойствам продуцируемых фагов — чувствительных (II тип) и.устойчивых (I тип) к мочевине. формула изобретения

Составитель А.Завадская

Редактор М.Недолуженко Техред M.Õoäàíè÷ Корректор С. Черни

Заказ 1891

Тираж 497

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

12 при 37 С. Готовят плотную питательную среду, содержащую индикаторную культуру вибрионов эльтор 75, для чего 0,2-0,3 мл 4-5-часовой бульонной культуры вносят в 4 мл

0,77-ного растопленного агара Мартена и высевают на поверхность агаровой пластинки в чашки Петри двухслойным методом. На подсушенный газон наносят на расстоянии 5 см друг от друга по одной капле выросших бульонных куль тур и ставят посевы в термостат при

37 С на 1 сут. Учитывают результаты.

Штаммы вибрионов эльтор 377 образуют зонУ фаголизиса (I тип), штамм 1540не дает лизиса индикаторной культуры (II тип).

Пример 2, Отсевают в пробир«, 2р ку с 22 мл бульона, содержащего 15_#_1кочевины, одну петлю суточной агаровой культуры классического холерного вибриона 5281. Посев и учет проводят так же, как в примере 1. Вре" 25 мя контакта с мочевиной 24 ч. Штамм вызывает лизис индикаторной культуры (I тип).

Пример 3. Отсевают в пробирку с 2 мл бульона, содержащего 20Х 30 мочевины, штамм Ч.eltor 377,. Время контакта с мочевиной 48 ч. Посев и учет проводят, как в примере 1.

Способ дифференциации лизогенных штаммов холерных вибрионов путем выращивания исследуемой культуры в жидкой питательной среде с последующим пересевом выросшей культуры на плотную двуслойную питательную сре ду, один слой которой засеян индикаторной культурой, инкубированием посевов и учетом результатов по характеру лизиса индикаторной культуры, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, выращивание в жидкой питательной среде проводят в течение 12-48 ч в присутствии 10-20Х мочевины и при наличии лизиса индикаторной культуры исследуемую культуру относят к лизогенной, продуцирующей устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса культуру относят к лизогенной, продуцирующей чувствительный к мочевине фаг,