Способ подготовки препарата хориона для исследования

 

Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике. Целью является повышение качества препарата хориона. Цель достигается тем, что биоптат хориона инкубируют с раствором колхицина в течение 3 ч, который используют в концентрации 2,0 - 2,5 мкг/мл, а фиксацию проводят поэтапно, вначале в фиксатор добавляют гипотонический раствор в отношении 1:1, после фиксации его разводят водой также в отношении 1:1, причем перед окрашиванием препараты промывают фосфатным буфером PH 6,8 в течение 10 - 20 мин. Способ позволяет получить отдельные клетки хориона с хорошо расправленными метафазными пластинками.

СООЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИ Х

РЕСПУБЛИК

ВСЕЮ

ПИИЙ3ЬИБЛИ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4335637/28-14 (22) 08.12.87 (46) 07.06.90. Бюл. ¹ 21 (71) Институт акушерства и гинекологии АИН СССР (72) В.С.Баранов (53) 616-0,88.9(088.8) (56) Simoni G. Fetal karyotyping Ъу

direct chromosome preparations, Chorionic villus Sampling./Ed. В,Brambatti. Genoa, 1986, 991117. (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА ХОРИ0НА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике. Целью являИзобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике.

Целью является повьппение качества препарата за счет лучшего расправле°" ния клеток.

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат хориона отмывают раствором

Хенкса с добавлением гепарина. Вор-. синки отбирают под лупой, переносят в свежую порцию физиологического раствора. Далее переносят в раствор колхицина с 5%-ной эмбриональной телячьей сывороткой, и инкубируют 3 ч.

Часть ворсин переносят в физиологический раствор и помещают в холодильник. В конце инкубации среду заменяют на 3-4 мл 0,9%-ного раствора цитрата натрия. Через 13-15 мин непосредственно в гипотонический .раствор добавляют равный объем стандартно,го фиксатора, содержащего метиловый

„„SU„„1569652 A 1 (5))5 01 N 1/28, A 61 В 10/00

2 ется повьппение качества препарата хориона. Цель достигается тем, что бноптат хориона инкубируют с раствором колхицина в течение 3 ч, который используют в концентрации 2,0-2,5мкг/мл, а фиксацию. проводят поэтапно, в--.:=. в фиксатор добавляют гнпотонический раствор в отношении 1:1, после фиксации его разводят водой также в отношении 1:1, причем перед окрашиванчем препараты промывают фосфатным буфером рН 6,8 в течение 10-20 мин. Способ позволяет получить отдельные клетки хориона с хорошо расправленными метафазными пластинками. спирт и ледяную уксусную кислоту в

С, соотношении 3:1. Далее префиксатор заменяют чистым фиксатором и выдерживают в нем 40-60 мин. Затем фиксатор разводят водой в соотношении 1:1.

Небольшой объем образца переносят Ш®

СЭ на стекло в каплю 0 5 мл 60 уксусной Q3 кислоты. При этом клетки выделяются в фф раствор. Через 2-3 мин, когда образец (, ф становится прозрачным, клетки равно- {,ф мерно распределяют по стеклу. Препарат сушат на стекле над спиртовкой.

Каждое стекло помещают в фосфатный буфер (рН 6,8), споласкивают спиртом, окрашивают по Гимза и микроскопируют.

Образцы из холодильника переносят в среду игл + 5% ° Эмбриональной телячьей сывороткой добавляют колхицин

2 мкг/мл и инкубируют при 37 С. Далее проводят обработку описанным методом.

Пример 1. Беременность 7-8 нед. в анамнезе рождение двух детей с

1569652

Составитель,Л.Стебаева

Редактор А.Шандор Техред Л.Сердюкова Корректор С.Шевкун

Заказ 1441 Тираж 504 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

3 болезнью Дауна, Образец хориона обработан описанным способом. Подсчет хромосом выявил наличие набора хромосом 46ХУ. Ребенок здоров.

Пример 2. Беременность 7—

8 нед., в анамнезе рождение ребенка с болезнью Дауна ° Образец хориона обработан описанным способом. Подсчет хромосом выявил наличие набора хромо- 10 сом 47ХУ. У ребенка набор хромосом соответствовал болезни Дауна.

Способ позволяет повысить качество приготовления препарата хориона за чет лучшего расправления клеток, а

Соответственно и более расправленноГо набора хромосом. формула изобретения

Способ подготовки препарата хориона для исследования, путем биопсии ворсин хориона на 6-12 неделях беременности, инкубации с раствором колхицина, обработки гипотоническим раствором, фиксации в смеси метиловый спирт — ледяная уксусная кислота, получении суспензии клеток, нанесении на стекло в 60Х-ном растворе уксус-. ной кислоты, окрашивании препаратов и микроскопировании, о т и и ч а юшийся тем, что, с целью полного расправления клеток, инкубацию с ра-. створом колхицина проводят в течение

3 ч, при этом колхицин применяют в концентрации 2,.0-2,5 мкг/мл, а фиксацию проводят поэтапно, вначале в фик" сатор добавляют гипотонический раствор в соотношении : 1, после фиксации его разводят водой также в соотношении 1 : 1, причем перед окрашиванием препараты промывают фосфатным буфером рН 6,8 в течение 10-20 мин,