Способ определения антигенов или антител

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения антигенов или антител в биологических жидкостях. Цель - повышение точности анализа. Для этого в исследуемый образец добавляют специфический антиген или антитело, причем исследуемый образец обрабатывают декстрансульфатом, содержащимся в реакционной среде в концентрации 0,001 - 5,0 мас.%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 G О1 N 33/53 -" " !@3НЯ

:.. ; !г;.Н

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 3430145/28-14 (22) 03. 05. 82 (31) 67333/81 (32) 02 ° 05. 8! (33) JP (46) 30.03. 90. Бюл, h» 12 (71) Мицубиси Касси Корпорейшн (.П ) (72) Сатоси Тсутсуй, Тадамитсу Судо и Митио Ито (Jp) (53) 615.373(088.8) (56) Лабораторная иммунология./Под ред. А.E.Вязова. N. Медицина, 1967, с. 77-79.

Изобретение относится к способам определения антигенов илн антител в биологической жидкости.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующ м образом.

Полианионы, которые можно использовать в предлагаемом способе, представляют собой соединения, включающие в себя природные или синтетические полимеры, такие как полисахариды или полистирол, содержащий многочисленные анионные группы, такие как сульфонильные анионы или карбоксильные анионы, причем указанные соединения должны быть растворимы в реакционной среде, используемой для реакции антиген-антитело.

Такими полианионами являются декстрансульфат, гепарин, полистиролсульфокислота, ацетат целлюлозфталата, гиалуроновая кислота, хондроитинсульфат и т.п.

2 (54) СПОСОБ ОПРЕЛЕЛЕШИ ЛНТИГЕНОВ

ИЛИ АНТИТЕЛ (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения антигенов или антител в биологических жидкостях, 1(ель — повышение точности анализа. Для этого в исследуемый образец добавляют специфический антиген или антнтело, причем исследуемый образец обрабатывают декстран сульфатом, содержащимся в реакционной среде в концентрации 0,00!—

5,0 мас.7.

В соответствии со способом пс изобретению образец, с опс ржащнй определяемый антиген или антитело, обрабатывают полианионом, после чего вводят в реакцию антиген-антитело с соответствующим антителом или антигеном в реакционной среде.

Обработку полианионом можно проводить следующим образом: проводя реакцию антиген-антнтело в среде, которая включает в себя полианион, нлн обрабатывая образец твердой или жидкой О(-) фазой, содержащей полианион, до прове- Ж дения реакции антиген-антптело (в плследнем случае обработанный таким образом образец, содержащий антнген или антитело, может быт» введен в реакцию антиген-антитело после того, как из него будет удален л<1лианнон, (pl но обычно его вводят в реакцию вместе с полианионом).

Реакционные среди, годходяшне для использования в реакции антиген-антело, представляют собой водные сре1554782

30 ды, вклгг.гающие в себя, например, ь,.ду, солевой раствор, и буферные растворы, которые могут содержать одну (или более) добавку, выбранную из стабилизаторов, консервантов, хелатпых агентов, поверхностно-активных соединений и т д.

Буферный раствор включает в себя глициновые буферы, буферы на основе фосфорной кислоты, цитратные буферы, барбиталовые буферы, боратные буферы, буферы ыа основе системы трис(трис) гидроксиметил(аминометан) — соляная кислота, трис-малатные буферы, аммонийные буферы и т.д.

Стабилизаторы включают в себя, например, аминокислоты, полипептиды, белки и т.п., которые не осаждаются в данной иммунологической реакции и которые обычно присутствуют в концентрации 0,001 — 17, предпочтительно от 0,05 — 0,6/, Предпочтительными кон сервантами являются мертиолат и азид натрия.

Предпочтительные хелатные агенты включают в себя этилендиаминтетрауксусную кислоту, нитрилтриуксусную кислоту, цнклогександиаминтетрауксусыую кислоту и т.п.

В качестве поверхностно-активных соединений, как правило, предпочтительно использовать неионогенные псверхностно-активные соединения. рН реакционной среды должен нахо-диться в обычном интервале рН, применяющемся дЛя реакций антиген-антитело, обчно используют рН в интервале приблизительно 5 - 10, Концентрация полианиона в реакционной среде обычно ие превышает 5 мас.X

40 и предпочтительно равна 0 001

0,5 мас.X.

Более высокая концентрация может приводить к нестабильности реакции

45 в некоторых системах анализа. В то же время бЬлее низкая концентрация снижает ингибирование так называемых неспецифических реакций, которые мешают анализу и делают невозможным получение точных данных анализа из-за

50 повышенного ингибирующего эффекта.

Аитигены, которые служат в качесгве определяемого соединения и реагента, включают в себя различные антигены, такие как белки, полипептиды, стероиды, полисахариды, липиды, пыльца, пыль и гаптены, Антитела включают в себя, например, такие белки, которь. являются аытителамн против указанных антигеыов.

Анализ реакции аытыген-антитело по. изобретению применим для любых систем анализа. Таким образом, предлагаемый способ применим как для систем растворов, в которых и опредеггяеиое соединение, и реагент растворимы в реакционной среде, так и для систем с носителем, в которых реагеыт закреплен на особом носителе, который практически не растворим в реакционной среде, при этом говорят, что особый носитель сенсибилизироваы реа геытом.

Конкретные примеры реакций антигеыаытитело, которые могут быть проанализированы в соответствии со способом по изобретению, включают в себя реак-ции, протекающие при радиоиммунном анализе, при анализе агглютинации латекса с турбидиметрией в ближней ИКобласти, иммунофермеытном анализе, иммуыофлуоре сцен тном анализе, при и».мунонефелометрии с использованием све-торассеяния, при агглютинации зритроцитов, агглютинацни латекса и т.п.

Способ особенно прецпочтительно применять для такой системы анализа, как агглютинация латекса с турбидиметрией в ближней ИК-области, в которой может использоваться, например, обратимая пассивная агглютинация.

В соответствии со способом п< изобретенмо неспецифические реакции, которые могут протекать при реакциях антиген-антитело, могут быть предотвращены, в результате получают более точные данные анализа.

Пример 1. Агглютинация латек са с турбидиметрией в дальней ИК-области.

К 50 мкл сыворотки нормального человека, содержащей не более чем

2 нг/мл о6-фетопротеина (АФП), прибавляют 50 мкл раствора, содержа цег

1 мкг/мм АФП и затем 100 мкл сог евого раствора бычьего сывороточиого альбумина, содержащего декстрансульфат, и получают испытуемый. раствор.

К 50 мкл испытуемого раствора прибав» ляют 50 мкл латекстного реагента, сенсибнлизированиого антителом анти-АФП, и 200 мкл буферного раствора, после чего при перемешивании иэмеггвот изменение мутности в области ближнего ИК при 940 нм. Данные анализа образца считывают со станггартной кривой и рассчитывают выход. Результаты сравнива5 1554782 ют с контролем, который представляет реакционную систему без полианиона.

При добавлении декстрансульфата (при результирующей концентрации

5 равной О, 001 мас. У.) достигается значительное улучшение точности (P a

<О; 01) и коэффициента вариации (КВ).

Нормальное отклонение равно 2, 83 (по известному способу 10,32).

Составитель Г.Крюкова

Редактор А.Огар Техред H.Bepec Корректор Н.Король

Заказ 468 Тиржк 507 Подписное

РчИИПИ Государственного комитета. по изобретениям и открытиям при (К IT СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.укгород, ул. Гагарина,IПI

Пример 2. Процедуру по примеру 1 повторяют, sa исключением того, что окончательная концентрация декстрансульфата составляет 5 мас. X.

Получены аналогичные результаты.

Таким образом, способ позволяг т повысить точность анализа в 4-5 раз по сравнению с известным способом.

Ф о р м у,л а и э î б р е т е н и я

Способ определения антигенов или антител путем добавления в исследуемый образец соответствующего специфического антитела или антигена с последующей регистрацией реакции пассивной гемагглютинации, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повыщения точности способа, исследуемый образец обрабатывают декстрансульфатом, содержащимся в реакционной среде в концентрации 0,001-5,0 мас.X;