Способ определения удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов

 

Изобретение относится к области биологии и медицины и может быть использовано для исследований физико-химических свойств цитоплазмы эритроцитов. Целью изобретения является упрощение способа измерения удельного сопротивления цитоплазм эритроцитов. Проводят обработку суспензии эритроцитов поверхностно-активными веществами - гепарином, увеличивающими проводимость мембраны эритроцитов до значений, близких к значению проводимости цитоплазм. Измеряют объем эритроцитов кондуктометрическим способом до и после обработки и определяют удельное сопротивление цитоплазмы по формуле ρ<SB POS="POST">C</SB>=ρ<SB POS="POST">0</SB>(1++F/(M-1)), где ρ<SB POS="POST">0</SB> - удельное сопротивление раствора для приготовления суспензии эритроцитов

F - фактор формы

M = ΔR<SB POS="POST">0</SB>/ΔR<SB POS="POST">I</SB> - ОТНОШЕНИЕ СРЕДНИХ ЗНАЧЕНИЙ ЭЛЕКТРИЧЕСКИХ ОБЪЕМОВ ΔR<SB POS="POST">0</SB>,<SB POS="POST">I</SB> В ПРИСУТСТВИИ ГЕПАРИНА И БЕЗ НЕГО.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si) 4 С 01 И 27/00 27/07

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

PPp (1 + — )

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4276227/28-14, (22) 28.05.87 (46) 30. 10.89. Бюл. Р 40 (71) Омский научно-исследовательский институт природно-очаговых инфекций (72) Ю.ПтЧернов (53) 612.015 (088.8) (56) Zimmermann U °, Groves М. et al.

Development of à new Coulter cometer

system. Measurement of the volume, internal couductivitv and dielectric

brealdowm voltage of à single guard

all protoplast of Vicià-fuba.

I. Maubrane Biolog, 1980, Ф 52, р. 37-50 ° (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УДЕЛЬНОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ ЦИТОПЛАЗРЫ ЭРИТРОЦИТОВ (57) Изобретение относится к области биологии н медицины и может быть использовано для исследований физикоИзобретение относится к биологии и медицине, в частности измерению проводимости биологических материалов.

Цель изобретения — упрощение измерений.

Указанная цель достигается тем, что клетки обрабатывают поверхностно активным веществом (гепарин) в концентрациях, увеличивающих проводимость мембраны исследуемьм клеток до значений, близких к значению nposoдимости клеточной цитоплаэмы, процедура измерения объемов клеток повторяется еще раэ, а среднее значение удельного сопротивления цитоплаэмы клеток определяется по формуле

„„SU„„1518756 A 1

2 химических свойств цитоплаэмы эрйтро,цитов. Целью изобретения является упрощение способа измерения удельно-, го сопротивления цитоплаэм эритроци- . тов. Проводят обработку суспензии эрнтроцитов поверхностно-активньпж веществами - гепарином, увеличивающими проводимость мембраны эритроцитов до значений, близких к значению проводимости цитоплазм. Измеряют объем эритроцитов кондуктометрическим способом до и после обработки и определяют удельное сопротивленйЕ

f цитоплазмы по формуле )g tp (1+. 1) где © - удельное сопротивление раствора для приготовления суспенэии вритроцитов, f — фактор Фарии; т Q)

= AR

I где д — удельное сопротивление раст" вора для приготовления суспензии клеток; f — фактор формы клеток, m

= AP a/ARi — отношение средних или модальным значений изменений сопротивления кондуктометрического датчика (так называемых откликов) при попадании в канал датчика клеток, пропор",фЬ циональных объемам клеток, при от- д, сутствии и в присутствии поверхностно активных веществ. В случае, если параметр m определяется как

bRo f»

m вв — — — 7

bR; f, Vo

1518 75б то можно учитывать изменения объемов

V и формы клеток в присутствии поверхностно-активных веществ, которые при этом должны определяться незави5 сииым, например микроскопическим методом.

Вклад проводимости клеточной мембраны в отклик кондуктометрического датчика в случае его представления как я ейки гетерогенной среды может быть,чтен посредством замены в формуле эффективного удельного сопротив1 ления клетки )к на P, + II+ †. При а !5 этом отклик датчика будет иметь следующий вид: Е=Е Е (1+ (2)

V 1

Рс I30 0+ +5m 20 где о R — изменение сопротивления датчика P при попадании клетки в канал датчика (электрический объем клетки), (1 и V — - объемы клетки и канала датчи- 25 ка, Р<,11„ и P — удельные сопротивления цитоплазмы клетки, ее мембраны и буферного раствора, f — фактор формы клетки, а — эффективные радиус клетки (для сферы — просто ее ради30 ус), 1 — толщина мембраны клетки (1а< а).:

Изменение отклика кондуктометрического датчика в случае сохранения неизменными объема и формы клетки будет обусловлено изменением проводимости клеточной мембраны, поскольку удельное. сопротивление цитоплазмы клетки меньше сопротивления мембраны

1 р.«Р

Контроль объемов и формы клеток в присутствии поверхностно-активных веществ может быть выполнен методом оку.—

45 лярной микроскопии или микрофотосъемки.

Пример. К суспензии эритро- цитов человека дсбавляют гепарин в концентрации )0,3 мг/мл, с помощью кондуктометра измеряют сопротивление суспенэии, оно снижается после добавления гепарина в два раза. Проводят расчет пс формуле (2) и устанавливают, что проводимость мембраны эритроцитов увеличивается в присутствии гепарина более, чем в

Формула изобретения

Способ определения удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов, включающий приготовление суспензия, измерение объемов клеток кондуктометрическии методом, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упрощения измерений, увеличивают проводимость мембран эритрсцитов гепарином до значений, близких к значению проводимости цитоплазмы, определяют удельное сопротивление раствора для приготовления суспензии, определяют фактор формы клеток, определяют отношение средних значений электрических объемов клеток до и после обработки, а среднее значение удельного сопротивления цитоплазмы определяют по формуле

Р =Р (1 ° 1)

1 среднее значение удельного сопротивления цитоплазмы;

Г о — удельное сопротивление раствора для приготовления суспензии;

f — фактор формы клеток

m=1K /dR; — отношение средних значений э.чектрических обьемон h Кр, i, в присутствии гепарина и его сгсутствии. где

70 раз. В расчетах фактор формы эритроцитов принимают равным f = 1,3, а удельное сопротивление раствора

80 Ом см и предполаг ают, что

Р Р

Оценка удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов может быть получена согласно формуле (1), при этом она равна О = 210 Ом си. Для удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов известно значение — 220 Ом ° см, которое согласуется с нашими данными.

Положительный эффект предлагаемого способа измерения проводимости цитсплазмы клеток подтверждается тем, что позволяет проводить измерения на доступной коммерческой аппаратуре типа Коултера, к примеру на анализаторе нЬаЬогзса1е" венгерской фирмы Медикор".