Способ введения биологически активных веществ в организм животного

 

Изобретение относится к медицине и касается способа доставки биологически активных веществ непосредственно к органам-мишеням. Целью изобретения является повышение эффективностн способа за счет селективного транспорта вещества к органам.Для осуществления способа из плазмы крови крыс выделяли липопротеиды низкой, очень низкой и высокой плотности, инкубировали с С-холестерином и несвяяавшийся лиганд удаляли гельфильтрацией. Меченные холестерином липопротеиды вводили крысам и определяли распределение С-холестерина в различных органах и тканях крыс. Показана селективность доставки меченого гормона с липопротеидами очень низкой плотности - в печень, а с липопротеидами высокой ти - в надпочечники. 2 з.п.ф-лы, 1 табл. г сл

СОЮЗ СОВЕТСНИХ социАлистичесних

КСГ1УБ ЛИК

09) (Il) А1 (5!)5 А 61 К 37/22

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ф, -Ф

ГОСУДАРСТВЕННЬЮ КОМИТЕТ

ll0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНЯТИЯМ при Гннт сссР

H ASTOPCHOMY CBHQETEAhCTHV (46) 30.04.91 Ьюл. Ф 16 (21) 4101398/14 (22) 13.05.86 (71) Институт клинической и экспериментальной медицины СО АИН СССР (72) Л.Е.Панин, Л.М. Поляков и А.А. Розуменко (53) 612.015 (088.8) (56) Климов А.И., Коровкин Б.Ф., Кузнецов A.Ñ. и др. Аполипротеин В плазменных липопротеидов, встроенных в липосому, иммунологические свойст ва и распределение между органами, при введении кролику. Бюл. экспер. биол. и мед., 1983, т.44, 1 t0, с. 47-50. (54) СПОСОБ ВВЕДЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ОРГАНИЗМ ЖИВОТНОГО (57) Изобретение относится к медицине и касается способа доставки биоИзобретение относится к медицине, а именно к способам доставки биологически активных веществ в органы-мишени, и касается способа введения биологически активных веществ в организм животных.

Целью изобретения является повышение эффективности способа за счет селективного транспорта активного вещества к органам.

Способ осуществляют следующим образом, Из плазмы крови человека или животного ультрацентрифугированием в растворах КВг последовательнб выделяют.фракции липопротеидов очень низкой, низкой и высокой плотности,кологически активных веществ непосредственно к органам-мишеням. Целью изобретения является повыщение эффективности способа эа счет селективного транспорта вещества к органам.Для осуществления способа кэ плазмы крови крыс выделяли липолротеиды низкой, очень низкой и высокой плотности, инкубировали с С-холестерином и несвяэавпмйся лиганд удаляли гельфильтрацией. Меченные холестерином липопротеиды вводили крысам и определялн распределение С-холестерина в различных органах и тканях крыс . Показана селективность доставки меченого гормона с липопротеидами очень низкой плотности — в печень, а с липопротеидами высокой плотности — в надпочечннки. 2 э.п.ф-лы, 1 табл. торые затем диалиэуют против 500кратного объема О, 15 М NeC1 0,05 М трис/глициновый буфер (рН 7,4). К раствору, содераащему 0,5-1,0 мг/мл липопротеидного белка, добавляют связывающнйся с липопротеидами лиганд (биологически активное вещество), инкубируют в течение 0,5-1,0 ч при 37 и освобождают от избытка ли- ганда с помощью гель-фильтрации.

Нагруаенные лигандом липопротеиды выбранного класса плотности в количестве, определяемом целью введения биологически активного вещества, вводят внутривенно в организм.

Пример 1. Меченый йод-125тироксин (2<10 М) добавляли к

Радиоактивность в имп/мин на 1 мг ткани

Органы и ткани

И

С-Х-ЛПОНП "С-Х-ЛПНП С-Х-ЛПВП

20,5

16,6

4,8

6,9

58,0

6,9

16,?

48,0

9,1

10,2

4,7

15,9

2,5

15,1

14, t

10,1

8„3

6,9

39,4

10,8

9,9

Печень

Легкие

Сердце

Почки

Надпочечники

Жировая ткань

Селезенка з

1 5066 смеси липопротеидов очень низкой,низкой и высокой плотности (ЛПОНП, ЛПНН и ЛПВП), содержащей 1,5-2,0 мг белка. Смесь подвергали хроматографическому разделению с помощью

1 гель-фильтрации на колонке с сефароэой 4В (16 1000) . Йод-125-тивоксин злюировался с колонки двумя пиками.

Первый пик выходил с фракцией ЛПВП. Второй пик радиоактивности соответствовал свободному (несвязанному) гормону. Связывание гироксина с ЛПВП носило специфический характер,поскольку полностью подавлялось в при- 15 сутствии 500-кратного избытка немеченого тироксина.

Связывание кортикостероидов и их некоторых предшественников в отдельные фракции ЛП проводили при добав- 20 ленни к раствору ЛП (О, 5 мг белка)

-Р

1О М меченых С-прегнеиолона, Н-дезоксикортикостерона, Н-кортизола и Н-кортикостерона. Смесь инкубировали в течение О, 5-1,0 ч при 37 . 25 и подвергали хроматографическому разделению на колонке (161300 мм) с сефадексом Г-25 (Фармация). Элюент

0,02 М трис/НС1, рН 7,4, содержащий

5 мИ ЭДТА Na< и 5 мМ 2-меркаптоэтанола. Появление радиоактивности в объеме выхода ЛПВП свидетельствует о связывании Н-кортиэола фракцией

ЛПВП.

Полученные данные свидетельствуют о специфическом связывании липопротеидов во стероидными гормонами.

Для изучения селективности доставки биологически активных веществ к

/л органам-мишеням использовали С-холестерин. Выделенные с помощью ультрацентрифугирования липопротеиды (ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП) плазмы коови крыс инкубировали с С-холестерином. Несвяэавшийся с липопротеидами лиганд удаляли гель-фильтрацией на сефадексе Г-50. Меченые холестерином

ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП вводили крысам в одну иэ хвостовых вен. Через 3 ч животных забивали и исследовали распределение С-холестерина в различ- и ных органах и тканях крыс.

Поглощение С-холестерина органаЦ ми и тканями крыс через 3 ч после внутривенного введения в составе

ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП представлено в таблице.

Таким образом, представленные ин виво данные подтверждают факт селективной доставки лиганда с ЛПОНП в печень, а с ЛПВП вЂ” в надпочечники.

Формула изобретения

1 ° Способ введения биологически активных:веществ в организм животного путем инкубации их с носителем и внутривениой инъекции, о т л и ч а юш и и с я тем,чго, с целью повышения эффективности способа sa счет селективного транспорта активного вещества к органам, в качестве носителя используют липопротеиды кроBH высокой, низкой илиснень низкой плотности.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью селективного транспорта в печень стероидных гормонов, в качестве носителя используют липопротеиды очень низкой плотности.

3. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью селективного транспорта в надпочечники стероидных гормонов в качестве носителя используют липопротеиды высо-. кой плотности.