Способ определения рубомицина

 

Изобретение относится к медицине , а именно к способам определения рубомицина в лекарственных формах и биологических жидкостях. Цель - повышение избирательности, чувствительности и экспрессности. К анализируемому раствору в диметилформамиде прибавляют ацетат магния в диметип формамиде. Измеряют интенсивность флуоресценции раствора в ультрафиолетовой области. Спектр возбуждения флуоресценции лежит от 460 до 580 нм с максимумом 562 нм, спектр измерения флуоресценции лежит от 570 до 660 нм с максимумом 616 нм. 4 табл.

СОЮЗ COBETCHHX

СОИИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

;3Д ;+4 „ -"1 r.

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1 (46) 07. 08, 92. Бюл. Р 29 (21) 4316556/25 (22) 15. 10. 87 (71) Курский государственный медицинский институт (72) А.А.Хабаров (53) 543.42(088.8) (56).Временная фармакопейная статья

42-713-78. Рубомиции гидрохлорид

20 мг и 40 мг.

Sepaniak M.S., Yeung E.S. Determination of adriamycin and daunorubi«in in urine by highperformance

lignid «hromatography with laser

fluorometric detection. S. Chromatogr.

1980, 190, У 2, 377-383 °

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения лекарственного препарата рубомицина и может быть применено для анализа этого соединения в различном биологическом материале, необходимом для клинических исследований для соединения рациональной схемы лечения индивидуального больного.

Цель изобретения — повьппение чувствительности, избирательности и экспрессиости анализа биологических объектов с концентрацией рубомицина

0,01-30 мкг/мл.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в диметилформамиде, к 1 ип полученного раствора добавляют 8 мл диметилформамидв, 1 мл 1Х-ного раствора ацетата магния в диметилформамиде, переме„.SUÄÄ 1487642 Д1 (51)э С 01 0 21 64

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РУБОМИЦИНА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения рубомицина в лекарственных формах и биологических жидкостях. Цель— повьппение избирательности, чувстви- тельности и экспрессности. К анализируемому раствору в диметилформамиде прибавляют ацетат магния в диметипформамиде. Измеряют интенсивность флуоресценции раствора в ультрафиолетовой области. Спектр возбуждения флуоресценции лежит от 460 до 580 нм с максимумом 562 нм, спектр измерения флуоресценции лежит от 570 до 660 нм с максимумом 616 нм. 4 табл. шивают, а затем измеряют интенсивнос1ь. флуоресценции полученного при этом раствора, спектр возбуждения флуорес- «е,„ь ценции которого лежит от 440 до «Ф»

580 нм с максимумом 562 нм, а спектр излучения флуоресценции от 570 до

660 нм с максимумом 616 нм.

Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и конI концентрацией рубомицина лежит от

0,01 до 30 мкг/мл (табл; 1).

Зависимость интенсивности фпуоресценции от концентрации.вцетатв магния в диметилформамиде приведена в табл. 2. Чувствительность способа

0,05 мкг/мл. Зм

Пример 1. Качественное определение рубомицина.

К 0,1-1 мг препарата прибавляют

5 мл диметилформамида, 1-2 капли

1Х-ного раствора ацетата магния в ди1487642 метилформамиде, встряхивают и в ультрафиолетовом свете со светофильтром

УФС-3 наблюдают оранжевую флуоресценцию. Подобную фпуоресценцию не дают оливомицин, карминомицин, адриамицин, брунеомицин, дактиномицин, блеомицин (противоопухолевые антибиотики).

Пример 2. Количественное оп- !О ределение рубомицина в ампулах по

0,02 r. Точную навеску (0,02 r) препарата помещают в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 70-80 мл днметилформамида, встряхивают до растворения и добавляют диметилформамид до метки. К 0 5 мл данного раствора прибавляют 8,5 мл диметилформамида, кл 1%-ного раствора ацетата магния, перемешивают и флуориметрируют отно- 2р сительно стандартного раствора рубоI мицина. Для чего к 1 мл стандартного раствора рубомицииа с содержанием

100 мкг/мл прибавляют 8 мл диметилформамида, 1 мл 1Х-ного раствора 25 ацетата магния в диметилформамиде, перемешивают и флуориметрируют одновременно с испытуемыми растворами, Результаты количественного определения рубомицина в лекарственной фор- 30 ме представлены в табл. 3.

Пример 3. Количественное определение рубомицина в крови.

К 1-3 мп сыворотки крови прибав35 ляют 2 мл дистиллированной воды, 2 мл буферного раствора с РН 8,4, 10 мл раствора хлороформа и метилового спирта (9:1), и встряхивают 2-3 мин.

Затем центрифугируют 2-3 мин при 40

3000 об/мин. Хлороформный слой переносят в выпарительную чашку и выпаривают на водяной бане досуха. К сухому остатку прибавляют 9 мл диметилформамида, мл 1Х-ного раствора ацетата45 магния в диметилформамиде, переносят в кюветку и флуориметрируют относительно стандартного раствора рубомицина. Для чего в ряд пробирок вносят по 0,1, 0,5, 1 мл Раствора Рубо- 50 мицина с содержанием 10 мкг/мл, прибавляют соответственно 8,9, 8,5, 8 мл диметилформамида, по мл 1Хного раствора ацетата магния в диме" . тилформамиде, перемешивают и флуориметрируют одновременно с испытуемыми растворами. Результаты определе» ния рубомицина в крови приведены в . табл, 4.

Предлагаемый способ определения рубомицина в 5 раз чувствительнее известного, а высокая избирательная способность этого способа позволяет использовать его в фармацевтических и контрольно-аналитических лабораториях ЦЗЛ для качественного и количественного анализа в лекарственных формах, в воздухе рабочей эоны промышленных предприятий и при биофармацевтических и фарматокинетических исследованиях при раэработке оптимальных лекарственных форм, дозы и ритма назначения для оптимизации и ускорения лечения больных.

Подобной реакции не дают и не мешают определению близкие по структуре соединения (оливомицин, карминомицин, адриамицин, брунеомицин, дактиномицин, блеомицин), а также одновременно назначаемые (аскорбиновая, глютаминовая, никотиновая, фолиевая дегидрохолиевая кислоты; аминазин, анальгин, фенобарбитал, кордиамин, димедрол, промедол, морфин, тиофосфамид, бензотеф, сарколизин, метотрексат, допан, новэмбихин, эмбихин, циклофосфан, фосфамид, цитембена, дибунол, меркаптопурин, фторурацил, фторафур), Предлагаемый способ более экспрессен по сравнению с известным способом. На его осуществление требуется в 4 раза меньше времени, чем известным способом,. так анализ предлагаемым способом осуществляется за 20 мин, в та время как известным за 1,5 ч.

При анализе используются широкораспространенные реактивы, такие как ацетат магния, диметилформамид, хлороформ, что определяет экономическую целесообразность предложенного спо" соба в практике аналитических н биохимических лабораторий при оценке эффективности и безопасности его назначения при лечении различных опухолей.

Формула изобретения

Способ определения рубомицина, включающий растворение анализируемой пробы, возбуждение и измерение интенсивности его флуоресценции, по величине которой проводится определение, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, избирательности и экспрессности ана5 148 7642

В лиза биологических объектов с концепт- вают 1-27-ным раствором ацетата маграцией рубомицина 0,01-30 мкгlмл в ния, облучают,при длине волны возбукприсутствии противоопухолевых анти- дающего света 562 нм и регистрируют биотиков, анализируемую пробу раст- интенсивность флуоресценции при дливоряют в диметилформамице, обрабаты- не волны 616 нм.

Таблица 1

Концентрация, мкг/мл

Относительная-интенсивность флуоресценции

Та блица 2

Концентрация MgAc, X Относительная интенсивность флуоресценции,X

0,1

0,5

1,0

1,5

2,0

56

91

100

Таблица 3

Навеска, г Найдено рубо мицина, X

Метрологические характеристики

99,10

99,04

99,70

99,06

98,36

0,01947

0,01949

0,01968

0,01984

0,01991

Х=99,05

6+0,56

Å 0,45=

+0,40

Относительная ошибка а 0,40Х

О, 01995

0,01998

0,02003

0,02004

0,02014

98,51

98,16

99,40

99,30

99,85

0;01

0,02

0,03

0,04 .0,05

0,06

0,07

0,08

0,09

0,10

0,1 f

0,2 2

0,3 3

0,4 4

0 5 5

0,6 6

0,7 7

0,8 8

0,9 9

1,0 1О

8

12 !

24

28

32

36

10 10

18 18

26 26

34 34

42 42

48 48

57 56

65 64

74 72

82 80

18

26

34

43

51

68

83 го

18

27

44

52

19

Взято крови Найдено, икг/мл через после.а/в введе-. 11.07.87 ния, мин

18.08.87

Составитель О.Бадтиева

Редактор M.Âàñèïüåâà Техред Д.0лийицк Корректор И,Васильева

Ю ЮЮЮЮ и Ю

Заказ 3469 Тирам Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета .по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР.

113035, Москва, Ж-35, Раувская наб., д. 4/5

Ю WW Ю» Ю ЮЮЮ Ю

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óàrîðîä, ул. Гагарина,103

1487642 .Таблица 4

7,4

2,9

0,7