Способ получения фосфолипидов
Изобретение относится к биотехнологии и масложировой пром. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта. Это достигается тем, что проводят переэтерификацию фосфолипазой Д в присутствии спиртового акцептора и инозита - активатора в буферном растворе, причем инозит вводят после добавления спиртового акцептора в количестве от 2 до 16% к массе реакционной смеси. 2 табл.
СОЮЭ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„SU„, 1472042 (51) 4 А 23 J 7/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4047960/31-13 (22) 31.03. 86 (46) 15.04.89. Бюл. и 14 (71) Ташкентский государственный . университет им.В.И.Ленина (72) И.M.Ðàõèìîâ и P.Х.Зиятдинова (53) 665.1(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
9 1082374, кл. А 23 J 7/00, 1984. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОЛИПИДОВ
Изобретение относится к биотехнологии и масложировой промьппленности и касается способов получения фосфолипидов, Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.
Способ осуществляется следующим образом.
Лецитин суспендируют в 0,1 И натрий-ацетатном буфере с рН 5,6 . Для реакции переэтерификации к суспензии добавляют спиртовый акцептор, раствор хлористого кальция и раствор фосфолипазы О. При встряхивании вносят диэтиловый эфир, а затем инозит из расчета 2-16% к объему реакционной смеси.
Пример 1. Синтез фосфатидилметанола фосфолипаэой D из Rhaphanus
sativas в 0,1 И натрий-ацетатном буфере, рН 5,6. Концентрация компонентов в реакционной среде: лецитин
2,5 мИ, СаС1 2,6 мМ; фермент 0,4 г/л; метанол 40 мл/л; диэтиловый эфир
300 мл/л; инозит 2%. к объему реакци(57) Изобретение относится к биотехнологии и масложировой промьппленности. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта. Это достигается тем, что проводят переэтерификацию фосфолипазой П в присутствии спиртового акцептора и иноэита — активатора в буферном растворе, причем инозит вводят после добавления спиртового акцептора в количестве от
2 до 16% к массе реакционной смеси.
2 табл. онной среды. Реакцию переэтерификации проводят в течение 2 ч. Выход целевого продукта 75Х.
Пример 2. Синтез фосфатидилметанола фосфолипазой П из Rhaphanus
sativas в 0,1 M натрий-ацетатном буфере, рН 5,6, Концентрация компонентов в реаКционной среде при переэтерификации: лецитин 2,.5 мМ; CaCl
2,6 мМ; фермент 0,4 г/л; метанол
40 мл/л; диэтиловый эфир 300 мл/л; инозит 20Х к объему реакционной среды. Реакцию переэтерификации проводят с течейие 2 ч. Выход фосфатидилметанола 58,2Х.
Пример 3. Синтез фосфатидилметанола при переэтерификации фосфолипазой D иэ Rhaphanus sativas в 0,1 М натрий-ацетатном буфере, рН 5,6. Концентрация компонентов в реакционной среде: летицин 2,5 мИ:
CaClg 2,6 мМ; фермент 0,4 и/л;метанол
40 мл/л; диэтиловый эфир 300 мл/л; инозит 12,5% к объему реак уонной среды.
Реакцию проводят при 37"С в течение 2 ч.
Таблица 1
10 12,5
2 6
Содержание инозита, % 1
16 . 20
Фосфатидилметанол, % 32,1 75,0 70,6 92,4 95,0 80,0 58,2
Таблица 2
Содержание метанола. Х
1 l
Фосфолипид
0,6 2,0 3,0 4,0
6,0
Фосфатидилметанол, Х 12,8 49,2 68,0 64,8 11,0 70,8
Фосфатидилинозит, Х 48,0 45,0 26,6 24,1 14,0 4,6 з 14720
При этом достигается оптимальный выход фосфатидилметанола (95%) .
Пример 4. Синтез фосфатидилэтанола при переэтерификации:фосфолипазой D из Rhaphanus sativas в
О,1 M натрий-ацетатном буфере, рН
5,6. Концентрация компонентов в реак»». ционной среде: фосфолипиды (сумма)
2 г/л, СаС1 2,6 мИ; фермент 10
0,4 г/л; этанол 12% к объему реакционной среды, иноэит 12Х к объему реакционной среды. Реакцию проводят в тех же условиях. Выход фосфатидилэтанола 86,6%. 15
Выход фосфатидилметанола и сопутствующего фосфатидилинозита в зависимости от количества добавки (инозита) представлены в табл. 1.
Из данных табл, 1 видно, что ино- 20 зит, введенный в среду, повышает выход фосфатидилметанола. Видно, что при содержании инозита в среде до
12,5Х выход продукта растет и доходит почти до 95%. Когда содержание 25 инозита ниже 2% от объема реакционной среды, повышение выхода меньше, чем в известных способах. Увеличение его концентрации сверх 16Х снижает выход, и при содержании инозита 20% 30 выход сравним с известными способами. Однако, это происходит лишь в том случае, если инозит вводят после добавления в реакционную среду спиртового акцептора (метанола).
В том случае, если инозит введен
42
4 в среду раньше, чем метанол, количе- ство фосфатидилинозита становится, значительным, что нежелательно,.так как в этом случае он сам поступает в качестве спиртового акцептора.
Выход фосфатидилметанола при введении инозита (12%) в реакционную среду до добавления метанола приведен в табл. 2.
Не только фосфатидилметанол, но и другие фосфолипиды могуТ быть получены с повышенным выходом в присутствии инозита. Известно, что фосфолипаза D катализирует как гидролитическую, так и синтетазную реак" цию. Функция инозита в данном случае заключается в смещении равновесия.в сторону протекания синтетазной реакции.
Предлагаемый способ позволяет повысить выход фосфолипидов на 40-62Х.
Формула изобретения
Способ получения фосфолипидов, включающий переэтерификацию лецитина фосфолипазой D в присутствии спиртового акцептора и активатора в буферном растворе, от л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве активатора используют иноэит в количестве 2-16% к массе реакционной смеси, причем вводят его после добавления .спиртового акцептора.
