Штамм бактерий рsеudомоnаs wieringae продуцент экзоцеллюлярного полисахарида

 

Изобретение относится к микробиологии , а именно к диагностике фитопатогенов. Целью изобретения является получение нового штамма P.wi eringae, продуцирующего экзоцеллюлярный 0-антигенный полисахариц. Штамм Pseudomonas wieringae депонирован в коллекции Всесоюзного научноисследовательского института защиты растений (ВИЗР) под номером 2062. Использование экзоцеллюлярного полисахарида позволяет получать диагностические сыворотки ко всем 9 серогруппам Р. Syringae. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСЛУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4223886/31-13 (22) 02.03.87 (45) 30.01.89. Бюл. Р 4 (71) Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К, Заболотного (72) Р,И. Гвоздяк, Л.М. Яковлева, Г.M. Здоровенко, И.Я. Захарова, Л.В..Воронкова и Н.И. Клинкова (53) 576.8.075.3(088.8) (56) Г1икробиологический журнал, 1979, т. 41, Р 4, с, 330-339. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOM0NAS MIERINGAE — ПРОДУЦЕНТ ЭКЗОЦЕЛЛ10ЛЯРНОГО

ПОЛИСАХАРИДА

Изобретение относится к микробиологии, а именно к диагностике фитопатогенов.

Цель изобретения — получение нового штамма Pseudomonas wieringae, 5 продуцирующего зкзоцеллюлярный О-ан-. тпгенный полисахарид.

Штамм Pseudomonas wi eri ngae 7923 выделен из сахарной свеклы, поражен-. ной сосудисто-паренхиматозным забо1О леванием. На протяжении всего периода хранения на картофельном агаре при комнатной температуре штамм стабилен по своим основным признакам.

Штамм Pseudomonas wieringae 7923 хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений (ВИЗР) под регистрационным номером 2062.

Штамм ВИЗР Р 2062 характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками.

„. Я0„„1454847 А 1 (511 4 С 12 N 1 20 С 12 N 1/20, С 12 В. 1:38 (57) Изобретение относится к микробиологии, а именно к диагностике фитопатогенов. Целью изобретения является получение нового штамма

P.wi eringae,ïðîäóöèðóþùåãî экэоцеллюлярный 0-антигенный полисахариц.

Штамм Рзeudomonas wieringae депонирован в коллекции Всесоюзного научноисследовательского института защиты растений (ВИЗР) под номером 2062. Использование экэоцеллюлярного полисахарида позволяет получать диагностические сыворотки ко всем 9 серогруппам P. Syringae. 1 табл.

Клетки прямые, полиморфные, палочки размером 1,0-2,9 х 0,3-0,6 мк, расположенные одиночно, парами, группами, короткими цепочками. Го

Граму не красятся, подвижные, с полярным расположением жгутиков, Спор не образуют.

Отношение к кислороду: аэроб.

На картофельном arape (KA) колонии диаметром до 6 мм, беловато-серые, блестящие, слабо зернистые, со слегка конусовидно приподнятым центром и слабо волнистым краем. В проходящем свете колонии полупрозрачные, уплотненный центр постепенно переходит в прозрачный как бы ямчатый край.

При росте на мясопептонном агаре (MIIA) и агаризованной среде Хоттингера образует колонии диаметром до

4 мм, кремовато-серые, во многом сходные с ростом колоний на КА, огличающиеся меHee выраженной KoHvco20

Таким образом, сыворотки, полученные при иммунизации кролей экзоцеллюJIHpHbfM 0-антигенным полисахаридом

Pseudomonas wieringae ВИЗР Р 2062, являются специфичными для всех фитопатогенов вида Р. Syringae.

Ф о р и у л а и з о б р е т е н и я

Штамм бактерий Pseudomonas wieringae ВИЗР N 2062 — продуцент экзоцеллюлярного полисахарида.

Э 145484 видностью центра и более слабой волнистостью края.

В мясопептонном бульоне (МПБ) и на среде Кинг Б растет с образова5 нием желто-зеленого флуоресцирующего пигмента. Образование пигмента отсутствует на среде Кинг А.

Оптимальная температура роста 2628 С. !

О

Штамм ферментирует с образованием кислоты глюкозу, сахароэу; ксилозу, арабинозу, маннозу, маннит, сорбит, иноэит, глицерин. Не использует лактозу, мальтозу, рамнозу, дульцит, адонит, салицин, В качестве источника углерода может использовать также (-аланин, аргинин, глютамин, гистидин, яблочную и винную кислоты.

Способен расти на минеральных средах. Не нуждается в витаминах и других дополнительных факторах роста.

Штамм не продуцирует оксидазу и

1 аргининдигидролазу. Каталазо-положителен. 25

Лакмусовое молоко не редуцирует, не образует индола и сероводорода, Нитраты не редуцирует. Молоко послойно пептонизирует, желатин разжижает, При искусственном заражении штамм патогенен для огурцов, пшеницы, гороха, фасоли, суданской травы, лука, сои, кормовых бобов, столовой и кормовой свеклы, зеленых плодов груш.

Бактерии вызывают реакцию сверхчувЭ5 ствительности на табаке.

Штамм хорошо сохраняется íà KA и KIA под слоем вазелинового масла и без такового при комнатной температуре., а также в лиофильно высушенном состоянии.

Пример 1. Получение и характеристика ЭОПС.

Для получения экзоцеллюлярного

О-антигенногo полисахарида (ЭОПС штамм ВИЗР Pseudomonas wieringae о

Р 2062 выращивают на КА при 26-28 С

"1 в течение 20 ч. ЭОПС получают из супернатанта смыва клеток с твердой питательной среды, Выход ЭОПС составляет 4-5% от сухого веса клеток бактерий.

В ЭОПС обнаружено 56% углеводов, с менее 1% белка и отсутствуют примесинуклеиновых кислот. Углеводный компонент состоит иэ галактозы, раинозы, глюкоэамина, Препарат обладает высокой серологической активностью (с гомологичной О-сывороткой титр в реакциях кольцепреципитации 1 ."100000, гемагглютинации 1:!280 при иммуноэлектрофорезе обладает катод-. ной подвижностью, сыворотка, полученная к экзоцеллюлярному полисахариду, агглютинирует гомологичную культуру в разведении 1:12800—

1:51200).

Экзоцеллюлярный 0-аптигенный полисахарид стабилен при длительном хранении (I0 .лет).

ЭОПС используют в качестве антигена для получения сыворотки путем иммунизации ьм кролей, Пример 2. Сыворотку, полученную от кролей, иммунизированных

ЭОПС, используют в реакции агглютинации на стекле и в пробирках для идентификации фитопатогенов.

Данные идентификации фитопатогенов представлены в таблице.

1454847

Вид штамма

Количество исследованных штаммов

97,8

101

Составитель А.Федоров

Редактор Н. Киштулинец Техред M.Õoäàíè÷ Корректор С.Шекмар

Подписное

Тираж 500

Заказ 7411/30

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Фитопатогенные псевдо- . 277 монады 9 серогрупп

P. syringae

Фитопатогенные псевдомонады P. cichorii,, Р. solanacearum, P. gladioli, P. fluoroviolaceus

Иефитопатогенные псевдомонады 15 ви" дов

Бактерии рода

Ervinia, Bacillus, Xanthomonas, Corynebacterium, Klebsiella

Идентифицированы как фитопатогены, Х

10 (относятся к условно патогенным)