Питательная среда для культивирования грибов рода aspergillus - продуцентов тирозиназы

 

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и представляет собой питательную.среду для культивирования грибов рода Aspergil- lus - продуцентов тирозинаэы. Цель изобретения - повьшшйие активности тирозиназы. Питательная среда имеет следующий состав, мас.%: сахароза 0,25-0,5; KHiP04 0,10-0,11; NH.NO, 0,0931-0,,1; MgS04-7HiO 0,05-0,055; KCl 0,05-0,055; FeS04 . 0,001- 0,0015; CuS04-5H20 0,001-0,0015; L -тирозин 0,001-0,0015; гидролизный лигнин 0,5-0,55; дистиллированная вода остальное. 2 табл. с SS (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

C0LlHAËÈÑÒÈ×ЕСНИХ

РЕСПУБЛИК g 4 С 12 N 1/14, 9/88//

//(С 12 N 9/88, С 12 R .1:бб) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯЫ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ „, .", Н АВТОРСКОМУ/ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Дй (21) 4219286/28-13 (22} 16.02.87 (46) 07.01.89. Бюл. Р 1 (71) Армянский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых веществ (72) Г.С.Гукасян, З.Н,Багдасарян и В.Г.Пасоян (53) 663.18 (088.8) (56) Методы изучения почвенных микрооргани.змов и их метаболитов.-M.:

МГУ, 1966, с.15.

Haneda К., Vatanabe S., Takoda Х.

Арр1ied Microbiology. 22(4), 721-722, 1971.

„„80„„1449577 A 1 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБОВ РОДА ASPERGILLUS

ПРОДУЦЕНТОВ ТИРОЗИНАЗЫ (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой питательную. среду для культивирования грибов рода Aspergil"

lus — продуцентов тирозиназы. Цель изобретения — повьппейие активности тирозннаэы. Питательная среда имеет следующий состав, мас.Ж: сахароза

0,25-0,5в КН Р04 0,10 Оэii;в ИН4ИОз

0,0931-0,1 MgS04 7Н О 0,05"0,055;

КС1 0,05-0,055; FeS04 7Н О- 0,0010,0015 CuS04 5Н О 0,001-0,0015;

Ь -тирозин 0,001-0,0015; гидролизный лигнин 0,5-0,55; дистиллированная вода остальное. 2 табл.

1449577

0,50-0,55

При концентрации сахарозы 0,5% грибы хорошо растут и.обладают высокой активностью, а киже.0„25% рост

i ðèáoâ относительно слабый, хотя удельная активность биомассы не сни- 55 жается.

Сравнительные данные по выращиваНию различных,штаммов грибов рода.Изобретение относится к микробио.логической, промышленности, а именно к питательной среде для культивирования грибов рода Aspergillus — проС дуцентов тирозиназы, фермента, осуще4твдяющего трансформацию L -тиро" зи« а в Ь -диоксифенилаланин (L -ДОФА).

Цель изобретения — повышение акти ности тирозиназы. 10

Питательная среда имеет следующий, со тав, мас.%:

Сахароза 0,25-0,50 кн ро, .0,10-0,11

ЯН4Ю., О. 0931-0 1000 15, MgSO4 .7Н О 0,050-0,055

КС1 0, 050-0„055

FeS04 7Н О . О«0010 0 0015

CuSO4 5Н О 0,0010-.0,0015

Гидр олиэ ный лигнин

Дистиллированная вода Остальное

Эта питательная среда отличается от известной введением гидролизного л гнина, который является отходам ( целлюлозно-бумажной промышленности, Концентрации минеральных солей (1 Н РО4, БН4ЫО, М8$0 4 7Н О, КС1, F4SO4 7Н. О) взяты соответственно, с11еде Чапека. Эти количества являютс«1 оптимальными для роста грибов.

П еделы концентраций сахарозы, лигн на, тирозина и CuS04 ° 5Н О являютс оптимальными и основаны на зкспер ментальньгл данных. Концентрации

Ll-тироэина и Cu$04 ° 5Н О вьппе

0 0015% не влияют на активность тироэиназы, а ниже 0,001% активность н рост гриба снижаются. Существен40 ное влияние на активность имеет концентрация лигнина и сахарозы. Введение гидролизного,лигнина в состав среды приводит к эффективному повышению тироэиназной активности продуиентов. Концентрация лигнина вьппе

0 55% не влияет на активность, а

Ни7ке 0,5% активность резко снижаетс,я.

Aspergillus на известных и предлагаемой средах представлены в.табл.1.

Пример 1. Берут сахароэу 5 r, КН РОп .1 r, NH4NO> О, 931 r, Ng $04

«7Н О 0,5 г, КС1 0,5 r, FeSO4 ° 7Н О

0„0i r CuS0> 5HzO 0,01 r 1. -тирозин 0,01 r растворяют в дистиллиро-.

ВВННоН воде с расчетом, чтобы конечный объем был 1 л, После растворения добавляют 5 г (0,5 мас.%) измельченного гидролизного лигнина Волжского целлюлозно-дрожжевого комбината и стерилизуют при 0,8 атм 20 мин. Параллельно готовят среду Чапека и известную среду (без лигнина), Одновременно производят посев восьми штаммов иэ видов flavus u flavipes на трех средах. Культивирование осуо ществляют при 29 С на качалках. Тирозиназную активность определяют по способности биомассы превращать

L -тирозин. После определенного вре мени роста биомассу собирают фильтрацией, промывают дистиллированной водой (поглощение промывных вод при

280 нм ниже 0,01) . Биомассу инкубируют с раствором тирозина в 0,01 м

Ыа фосфатном буфере при аэрации при

25 С. В качестве контроля берут мицеллий в буфере. За единицу активности принимают количество фермента, который приводит к увеличению оптической плотности реакционной смеси при 280 нм на 0,001 за минуту. Результаты показали, что при росте гри" бов на среде с лигнином их активность эффективно увеличивается (табл. 1).

H p и м е р 2. Готовят питательную среду (среду А) следующего состава, мас.%: сахароза 0,25; КН РО4

0 1; 1Н41 0, 0 093 ; ISO Н,О 0,05»

КС1 0,05; FeS04 7Н О 0,001, Cu$04 »

«5Н О 0,001; L -тирозин 0,001 гидролизный лигнин 0,5; дистиллированная вода остальное. Культивирование грибов и определение тироэинаэной активности проводят аналогично примеру 1 °

Результаты представлены в табл.2.

Пример 3. Готовят питательную среду (среду Б) следующего состава, мас.%: сахароза 0,5; кн Р04

О» 1 1ó ;ИН4ИО у О, 1 у NgS04 7НпО О, 055

КС1 0,055; FeS04 "7Н О 0,0015;

CuSO4" 5Н О 0,0015; L -тирозин 0,0015; гидролизный лигнин 0,55; дистиллированная вода остальное, Культивирование грибов и определение.тироэинаэ9577

Остальное

Та бли цаСреда Чапека Вид Штамм

Род

Суммарная акСуммарная акУдельна активУдельная активСуммар ная ак

Удельная ктивтивность ность ед/г ивност ость, ед/г ивность ность ед/г

Asper- Flavigillus рез

8,4

1,4

632 1,4

0110 2,0

10258 1,6

130 780

7 2

t 6

5,2

1,04

1,04

22

0,9

4,95

0,9

3,36

012

0,84

0,84

7,15 1,4

4,5 t 2

t6 8 68 408

14,4 80 440 з 144 ной активности проводят аналогично примеру 1.

Результаты представлены в табл.2.

Таким образом, предлагаемая питательная среда позволяет. направленно повысить тирозиназную активность продуцентов рода Aspergillus (в

60-100 раз), упростить состав среды за счет исключения органических до-. бавок, пептона и дрожжевого экстракта, снизить себестоимость среды за счет исключения органических добавок и уменьшения количества Ь -тирозина и сахарозы.

Формула из о бр ет ения

Питательная среда для культивиро.вания грибов рода Aspergillus — продуцентов тирозиназы, содержащая источники углерода, азота, КН2РО4, MgSO4 ° 7Н О, CuS04 5Н О, L -тирозин

То же Flavus 0377 i 3

10573 1,5 и дистиллированную воду, о т л и -" ч а ю щ а я.с я тем, что, с.целью повышения активности, тирозиназы, 5 она дополнительно содержит отход. целлюлозно-бумажного производствагидролизный лигнин, КС1,. FeS04 7 H О, при этом питательная среда содержит в качестве источников углерода и азота сахарозу и NH4NOg соответст-

1 венно при следующем соотношении компонентов, мас.7:

Сахароза 0 25-0-,50

КН,РО4 -0,f0-0, 11

NH NO Ою 0931 Ов 1000

MgSO»-7H О 0,050-0,055

КС1 0,050-0,055

FeS04 ° 7Н О 0,0010-0,0015

СиЯО4" 5Нл0 Оэ 0010 Ою0015

L -тирозин О, 0010-0, 0015

Гидролизный лиг нин О, 50-0, 55

Дис тиллир ованная вода звестная среда Предлагаемая среда

22 180 1080

16 160 800

8,32 100 500

7,2 80 480

10 70 315

Таблица 2

1449577

Среда Б

Среда А

Штамм

Вид

Роф ность

780

130

741

Авр rgillus Flavipes

130

632

1080

0110

1015

175

162

800

160

696,6

10258

500

100

450

100

425

315

280

70

012

F1avu s

68 408

0377

То

10573 80 400 80 440

Составитель Т.Мелентьева

Техред Л.Сердюкова Корректор Э.Лончакова

Редактор И.Горная

Заказ 6934/28 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Удельная активность, ед/г

Общая активность

Удельная активность, ед/г

Общая актив