Способ электрофоретического разделения коллагенов на пептиды

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к медицине , касается анализа коллагеновых пептидов с Помощью электрофореза. Цель изобретения - повьшение точности способа. Для этого коллагеновые пептиды разделяют электрофорезом в геле первого направления, вырезают кусочки гелей с коллагеновыми пептидами, расщепляютих бромистым цианом, фракционируют полученные пептиды в геле первого направления. Затем вырезают кусочки гелей, содержащие индивидуальные полипептиды, выcyшIiвaют, обрабатывают бромистым цианом в условиях, при которых потери материала вследствие вымьшания из кусочков отсутствуют, раствор бромистого цияна перед электрофорезом в геле второго направления удаляют высушиванием. S (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО.ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4141139/28-14 (22) 30. 10.86 (46) 07.12.88. Бюл. Ф 45 (7 1) Институт медицинской генетики

AMH СССР (72) Б,П.Соколов, Б.M.Øåð и В.Н.Калинин (53) 612.015 (088.8) (56) Collagen et Related Research, 1981, v. 1, р. 543-548. (54) СПОСОБ ЗЛЕКТРОФОРЕТИЧЕ СКОГО

РАЗДЕЛЕНИЯ КОЛЛАГЕНОВ HA ПЕПТЩЫ (57) Изобретение относится к медицине, касается анализа коллагеновых пептидов с помощью электрофореза.

„„SU„„1442917 А1

Цель изобретения вЂ” повьппение точности способа. Для этого коллагеновые пептиды разделяют электрофорезом в геле первого направления, вырезают кусочки гелей с коллагеновыми пептидами, расщепляют их бромистым цианом, фракционируют полученные пептиды в геле первого направления.

Затем вырезают кусочки гелей, содержащие индивидуальные полипептиды, высушивают, обрабатывают бромистым цианом в условиях, при которых потери материала вследствие вымывания из кусочков отсутствуют, раствор бромистого циана перед электрофорезом в геле второго направления удаляют высушиванием.

1442917

Изобретение относится к медицине, а именно к анализу коллагеновых полипептидов с помощью электрофореза.

Цель. изобретения вЂ” повышение

5 точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу анализа коллагеновых полипептидов путем разделения их электрофорезом в геле первого направления, вырезают кусочки гелей с коллагеновыми полипептидами, расщепляют их бромистым цианом, фракционируют полученные пептиды в геле первого направления, после чего вырезают кусочки гелей, содержащие индивидуальные полипептиды, высушивают, обрабатывают бромистым цианом в условиях, при которых потери материала вследствие вымывания из кусочков отсутствуют, раствор бромистого циана перед электрофорезом в геле второго направления удаляют высушиванием.

Пример 1. Способ разделения 25 пептидов немеченных коллагенов .

100 мкг коллагена подвергают электрофорезу в пластине 57. ПААГ размером 150х150х1,5 мм. Гели окрашивают 5 мин в 0,17.-ном растворе 30 кумасси в 27.-ной уксусной кислоте, либо в смеси этанол: Н 0:уксусная кислота 5:5:1 и промывают в -воде

10 мин. Вырезают кусочки гелей, содержащие нужные полипептипы. Размер кусочков 10х3х1,5 мм. Кусочки гелей

35 высушивают в вакуумном шкафу при

20 С в течение 4 ч. К кусочкам гелей добавляют по 22 мкл (507 от начального объема кусочков гелей) 10%-ного 4< раствора бромциана в 70%-ной муравьиной кислоте, либо в смеси 707.вЂ” ная муравьиная кислота:диметилформамид 1:2 и выдерживают 18 ч при

18-22 С, либо 3 ч при 37 С. Раствор бромциана удаляют высушиванием в вакуумном шкафу в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляют по

30 мкм 10 -ного метанола и высушива ют повторно в том же режиме. Добавляют по 50 мкл буфера для образцов, выдерживают 10 мин. Помещают кусочки в лунки геля второго направления, подвергают электрофорезу.

После электрофореза гели второго направления окрашивают либо кумасси, 55 либо серебром.

Пример 2. Способ разделения пептидов немеченных коллагенов .

Начало осуществления способа как в примере 1. Гели окрашивают 15 мин в 27-ной уксусной кислоте либо в смеси этанол:Н О:уксусная кислота

5:5:1 и промывают в воде 10 мин.

Вырезание кусочков гелей и их размеры как в примере 1. Кусочки гелей высушивают в вакуумном шкафу при

20 С в течение 10 ч. К кусочкам гелей добавляют по 41 мкл (907 от начального объема кусочков) 207-ного раствора бромциана в 707-ной му" равьиной кислоте и выдерживают 18 ч при 18-22 С. Далее проводятся этапы как в примере 1. Раствор бромциана удаляют высушиванием в вакуумном шкафу в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляют по 30 мкл

107-ного метаноли и высушивают повторно в том же режиме. Добавляют по 50 мкл буфера для образцов,выдерживают 10 мин. Помещают кусочки в лунки геля второго направления, подвергают электрофорезу. После электрофореза гели второго направления окрашивают либо кумасси, либо серебром.

Пример 3 ° Способ разделения пептидов коллагенов, синтезируемых культурами фибробластов.

Коллагены метят C-пролином или и С-глицином, культивируя фибробласты в среде, содержащей. радиоактивные аминокислоты. Коллагены из культчоальной среды осаждают добавлением этанола до концентрации 707. Коллагены подвергают электрофорезу в ПААГ.

Гели высушивают и подвергают радиоавтографии в течение ночи. Используя радиоавтоrpаф, вырезают кусочки гелей, содержащие нужные полипептиды.

Далее выполняются этапы по примеру

1 или 2. Гели второго направления подвергаются флюорографии.

Предлагаемый способ позволяет снизить потери анализируемого материала, что приводит к увеличению его точности.

Формула изобретения

Способ электрофоретического разделения коллагенов на пептиды, включающий разделение в геле первого направления, вырезание кусочков гелей с полипептидами, обработку их бромцианом с последующим разделением в геле второго направления, о т личающийс я тем, что, с

Составитель А.Агуреев

Техред Л.Сердюкова

Корректор И.Муска

Редактор Е.Папп

Заказ 6379/42 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 1442917, 4 целью повышения точности способа, . бромциана в 70Х-ной муравьиной киспосле разделения в геле первого нап- лоте в количестве, составляющем 50равления проводят прямую локализацию 907 от первоначального объема кусочполипептидов, вырезают кусочки геля ков, после чего перед электрофореиндивидуальными полипептидами, вы- зом в геле второго направления сушивают их в вакууме в течение 4вЂ” удаляют раствор бромциана высушива10 ч, фиксируют 10-207-ным раствором нием в вакууме °

Способ электрофоретического разделения коллагенов на пептиды

Изобретение относится к способам осуществления теста на мутагенность,- который состоит в том, что на клеточную популяцию воздействуют мутагеном, в результате чего в части клеток происходят мутации, причем исходная клеточная популяция делится на подгруппы

Способ определения бластомогенной активности химических веществ // 1441931

Способ прогнозирования течения хронического гнойного среднего отита у больных,перенесших общеполостную операцию уха // 1439509

Изобретение относится к медицине И касается прогнозирования течения хронических гнойных заболеваний среднего уха

Способ диагностики рассеянного склероза // 1439502

Изобретение относится к медици- te, а именно к биофизическим методам лабораторной диагностики заболевания центральной нервной системы - рассеянного склероза

Способ определения индивидуальной чувствительности к левомизолу при лечении астматического бронхита у детей // 1439501

Изобретение относится к медицине , в частности к методам оценки зффективности лечения

Способ количественного определения ретикулоцитов в крови // 1439500

Изобретение относится к медицине , касается гематологии

Способ определения региональных изменений поверхности и скорости транскапиллярного обмена у животного // 1439499

Изобретение относится к экспериментальной медицине и предназначено для разработки способов диагностики и лечения различных патологических процессов

Способ определения очага размягчения головного мозга при остром нарушении мозгового кровообращения // 1439498

Изобретение относится к медицине , касается неврологии, предназначено для лечения нарушений мозгового кровообращения

Способ определения физической работоспособности // 1439497

Изобретение относится к меди цине, а именно к функциональной диагностике

Способ дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы // 1439450

Изобретение относится к пульмонологии

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750