Способ количественного определения ретикулоцитов в крови
Изобретение относится к медицине , касается гематологии. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа . Стимуляцию ретикулоцитоза проводят лабораторным животным путем ежедневного отбора крови из хвостовой вены (50-60 капель) 5-6 дн или введением 60 мг/кг фенилгидразина внутрибркшинно (дважды через 48 ч). Нарастание числа ретиколоцитов в периферической крови обнаруживают через 5-6 дн. Для определения содержания ретикулоцитов пробу крови из хвостовой вены помещают в пробирку с физиологическим раствором и гепарином и добавляют 2-3 капли насыщенного ; р-ра бриллиантового крезилового синего (,2 г на 100 мл абсолютного спирта ). После 10-15-минутного прокрашивания пробу отмывают от краски в 5- кратном объеме физраствора при 35Qg, Эритроциты оседают без раярушения, Отбирают надосадок и 3-4 раза повторяют процедуру до прозрачного цвета надосадка определяют содержание ретикулоцитов, для чего эритромассу центрифугируют 10 мин при 1500g. В результате происходит разделение по плавучей плотности эритроцитов и ретикулоцитов. Ретикулоциты определяют количественно в прО центах по соотношению высоты зоны ретикулоцитов (синий цвет) в общей высоте, занимаемой клетками (желтовато-зеленоватые и синий) в капилляре .
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
PECflYEi JNH
„, SU„„1439500
Al (51) 4 С 01 N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
Н А BTGPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4117998/28-14
$22) 06.06.86 (46) 23.11.88. Бюл. 11 - 43 (71) Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Иарциновского (72) А.М.Аплахвердиев (53) 616.07 (088.8) (56) Любина А.Я. и др, Клинические лабораторные исследования. М,: 1984, с. 155-156. 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕТИКУЛОЦИТОВ В КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, касается гематологии. Цель изобретения — ускорение и упрощение способа. Стимуляцию ретикулоцитоэа проводят лабораторным животным путем ежедневного отбора крови из хвостовой вены (50-60 капель) 5-6 дн или вве. дением 60 мг/кг фенилгидразина внутрибркппинно (дважды через 48 ч). Нарастание числа ретиколоцитов в периферической крови обнаруживают через
5-6 дн. Лля определения содержания ретикулоцитов пробу крови из хвостовой вены помещают в пробирку с физиологическим раствором и гепарином и добавляют 2-3 капли насыщенного; р-ра бриллиантового крезилового синего (1,2 г на 100 мл абсолютного спирт а) . После 1 О-15-минутного прокрашнвания пробу отмывают от краски в 5кратном объеме физраствора прн 350g<
Эритроциты оседают без разрушения, Отбирают надосадок и 3-4 раза повто ряют процедуру до прозрачного цвета надосадка, определяют содержание ретикулоцитов, для чего а эритромассу центрифугируют 10 мин @ при 1500g. B результате происходит разделение по плавучей плотности эритроцитов и ретикулоцитов. Ретикулоциты определяют количественно в про центах по соотношению высоты зоны ретикулоцитов (синий цвет) в обшей высоте, э анимаемой клетками (желтовато-зеленоватые и синий) в капилляСг©
1439500
Фо р мул а и з о б р е т ения
Составитель А.Агуреев
Техред А.Кравчук
Корректор 3,Лончакова
Редактор В,Данко
Заказ 6071 !44 Тираж 847 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5
Производственно-полиграфич ское пред, г. Ужгород, " . Проектная, 4
Изобретение относится к медицине а именно к гематологии.
Цель изобретения - ускорение и упрощение способа.
Пример 1. Крыс линии Vistas усыпляют под эфирным наркозом. Кожу тщательно обрабатывают дезинфицирующим раствором (спирт 70 ). Стимуляцию ретикулоцитоза проводят путем ежедневного отбора крови из хвостовой вены 50-60 капель в течение 56 дн, либо введением 60 мг!кг фенилгидразина виутрибрюшинно (дважды через 48 ч). В обоих случаях нараста, нне числа ретикулоцитов в перифери ческой крови обнаруживают через 5 6 дн, Для определения содержания ретикулоцитов берут 7-8 капель крови из хвостовой вены в пробирку, содержащую физраствор и 2 мг гепарина. Затем туда же добавляют 2-3 капли насы-! щенного раствора бриллиантового крезилового синего (1,2 r на 100 мп абl солютного спирта) . Количество добавля-25 емой краски достаточно для прокрашивания. При большем количестве затруд няется отмывание пробы от краски. Тщательно перемешивают, закрывают
i прсбкой и оставляют на 10-15 мин дпя, прскрашивания нри комнатной темпера, туре. После этого проба отмывается от краски в 5-кратном объеме физраствора в течение 5 мин при 350g, При такой скорости все эритроциты оседают и практически отсутствует разруше35 ние эритроцита. Отбирают недостаточную жидкость и повторяют процедуры
3 или 4 раза до прозрачного цвета недостаточной жидкости. При возможности полностью отбирают надосадочную жидкость и определяют содержание ретикулоцитов. С этой целью эритромассу набирают в капилляр (примерно 90Х длины капилляра) диаметром 1„0 мм и
f длиной 75 мм. Чем вьпче длина капилляра и уже диаметр, тем выраженней столбики элементов крови — эритроцитов и ретикулоцитов.
Со стороны заполнения капилляр закупоривают и помещают в диск гематокритной центрифуги. Вращение происходит в горизонтальной плоскости в течение 10 мин при 1500g. При таком времени и скорости происходит разделение по плавучей плотности эритроцитов и ретикулоцитов.
Определение ретикулоцитов. После центрифугирования определяют ретикупоциты количественно в процентах по соотношению высоты зоны ретикулоцитов (синий цвет) в общей высоте, занимаемой клетками (желтовато-зеленоватые и синий), в капилляре, Если высота зоны ретикулоцитов (синий цвет) 4 мм, то высота общей зоны, занимаемой эритроцитами и ретикулоцитами (желтовато-зеленоватые и синий), 20 мм.
В таком случае количество ретикулоцитов составляет 20% .
Способ количественного определения ретикулоцитов в крови путем окрашивания пробы бриллиантовым крезиловым синим, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, окрашенные пробы промывают физиологическим раствором, центрйфугируют 5 мин при 350g, затем переносят в капилляр диаметром 1 мм, центрифугкруют 10 мин при 1500g, измеряют общую высоту столбика жидкости„ окрашенной в желто-зеленый и синий цвета, и столбика, окрашенного в синий цвет, и по их соотношению определяют количество ретикулоцитов в крови.
