Способ определения активности фагоцитов

 

Изобретение относится к медицине , точнее - к иммунологии. Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа. Для этого производят исследование фагоцитарной активности лейкоцитов крови у пациента . Смешивают фагоциты с суспензией меченного люминалом тест-объекта. В качестве тест-объекта используют микроорганизмь Micrococcus lysodok- ticus. Проводят инкубацию при 37 С в монослое фагоцитов при их соотношении с тест-объектом 1:10. Затем ставят реакцию хемилюминесценций (ХЛ) и через 15, 35, 45 мин измеряют степень ХЛ на приборе. 2 табл. с S (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„„SU„„1386911 (51)4 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ц,"

Н АВТОРСКОМУ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ А1." > Рг„ (21) 4064364/28-14 (22) 11 ° 03.86 (46) 07.04.88. Бюл. Ф 13 (71) Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт (72) С.М.Ликолетов, В.Ю.Сорокин, Э.С.Темкин и В.С.Жукова (53) 615.375(088.8) (56) Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1984, У 5, с. 634. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ФАГОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медицине, точнее — к иммунологии. Цель изобретения — повышение чувствительности и упрощение способа. Для этого производят исследование фагоцитарной активности лейкоцитов крови у пациента. Смешивают фагоциты с суспензией меченного люминалом тест-объекта.

В качестве тест-объекта используют микроорганизмы M1crococcus lysodokг1cus. Проводят инкубацию при 37 С о в монослое фагоцитов при их соотношении с тест-объектом 1:10. Затем ставят реакцию хемилюминесценций

С2 (лЛ) и через 15, 35, 45 мин измеряют S степень ХЛ на приборе. 2 табл.

1386911

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к иммунологии.

Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа.

Пример 1. Исследование фа5 гоцитарной активности лейкоцитов крови у больного К. с обострением хронического гранулематозного периодон гита.

Приготовление тест-объекта. К нафеске 20 мг ацетонвысушенных клеток икрдкокка добавляют 0,8 мл 0,01 раствора МаОН и 0,2 мл раствора люминола, полученного путем растворе-15 ия 10 мг сухого люминола в 1 мл диметилсульфоксида. Клетки с люминалом перемешивают на мешалке 20 мин и оставляют в темноте при комнатной температуре на 18-24 ч, затем осадок клеток отмывают от несвязавшегося люинола путемцентрифугирования при

000 об./мин (три раза по 5 мл 0,9Х+ного раствора NaC1). К отмытому осадку микрококков добавляют 2 мл (),9Х-ного раствора МаС1 и получают меченные люминолом клетки микрококка и дозе 20 мг/мл . Данная суспензия ь|икрококка сохраняет свою активность в течение 1-2 мес в условиях хранения 30 при 4 С.

Для постановки реакции определения фагоцитарной активности лейкоцитов корови берут из пальца обследуемого буровь в количестве 0,2-0,3 мл в

35 в икропробирку с гепарином (20 ед./мл).

11о 25 мкл крови разливают в три кюз еты (объемом 3 мл), предназначенные я измерения хемилюминесценции на риборе люминометре (LKB-1250, Финляндия) . В кюветы добавляют по 100 мкл тест-объекта в разведении 1,2 мг/мл, закрывают колпачками и встряхивают в течение 20-30 с на приборе микровст-. ряхивателе для микропробирок или путем постукивания по столу для равномерного распределения капли крови с тест-объектом IIO дну кюветы. Затем пробирки инкубируют в термостате на

37 С и через 15, 30, 45 мин измеряют степень хемилюминесценции на при- 5ц боре. При снятии показаний свечения, мВ, с дисплея прибора записывают наибольшую цифру из трех, возникающих каждые 1-2 с. Интенсивность фагоцитоза лейкоцитами тест-объекта выра55 жают светосуммой трех изделий. Одновременно с исследованием крови больного определяют фагоцитарную активность У постоянного донора. фагоцитарную активность лейкоцитов крови больного выражают в процентах к таковой у донора по формуле: (А:В)х100, где А и  — светосумма хемилюминесценции лейкоцитов с тест-объектом у больного и донора, соответственно.

В тябл. 1 приведены результаты определения фагоцитарной активности у больного с обострением хронического гранулематоэного периодонтита до и после лечения (на каждого больного и донора брали пе 3 кюветы).

Из табл. 1 видно, что у боЛьного до лечения отмечалось снижение фагоцитарной активности лейкоцитов крови, а к концу лечения она восстанавливалась и приблизилась к таковой у здорового донора. Таким образом, предложенный способ позволяет определить степень восстановления защитных сил организма в процессе лечения пери/ одонтита.

Пример 2. Исследование у донора фагоцитарной активности лейкоцитов крови при использовании различных ее объемов.

Этапы те же, что.и в примере 1, за исключением того, что кровь берут иэ вены, вносят в кювету в объеме

10, 25, 50 и 100 мкл и тест-объект в объеме 10 мкл в той же концентрации, что и в примере 1. Пробы встряхивают на протяжении 20 с. Результа ы исследований приведены в табл. 2, Иэ табл. 2 видно, что увеличение объема крови до 100 мкл в,пробе ведет к уменьшению интенсивности хемилюминесценции, тем самым снижается чувствительность реакции: объемы крови 25 и 50 мкл дают более сильную хемигпоминесценцию. При использовании 10 мкл хемилюминесценция ниже, чем в осталь ных пробах. Однако выявление хемилю минесценции в 10 мкл крови само по себе свидетельствует о преимуществах метода, так как позволяет в необходимых случаям испольэовать кровь и в таких микрообъемах (например, в педиатрии).

Предложенный способ проще известного, так как нет необходимости готовить синтетические микросферы и покрывать их белком. Он Обладает большей чувствительностью в 10 раэ, поэтому может быть использован в случаях, когда уменьшено количество фагоцитов sa счет патологии или у опре1386911

Таблица 1

Светосумма хемилюминесценции, мВ до лечения после лечения

Об сл едуемый

11,5 14,3 12,3

Б-ой К. Обострение хро- 7,8 7,4 7 5 нического гранулематозного периодонтита Среднее ?,5

Среднее 12,7

10,6 15,7 12,4 13,0 14,5 12,8

Среднее 12,9 Среднее 13,4

Здоровый донор

Z к показателю фагоцитоза у донора

94,7

58,1

Таблица 2

Светосумма хемилюминесценции мВ, в зависимости от объема крови, мкл

50 1 00

10

14,9

+0,60

7,1

+0,50

12,1

+0,81

10,0

„0,80

Составитель П. Бонарцев

Редактор В. Данко Техред Л.Сердюкова Корректор Л. Патай

Заказ 1491/43 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 ° Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Э деленных видов животных, а также в случае низкой чувствительности люминометра. Способ предполагает использование микрообъемов крови, поэтому может быть использован в педиатрии или у мелких животных.

Формула и э о б р е т е н и я

Способ определения активности фа- 10 гоцитов путем смешивания фагоцитов с суспензией меченного люминалом тест-объекта, инкубации при 37 С в течение 30-40 мин с последующим учетом результатов по измерению реакции хемилюминесценции, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, в качестве тест-объекта исполь". зуют микроорганизмы Мз.сгососсиз 1узоdokticus а инкубацию проводят в монослое фагоцитов при их соотношении с тест-объектом 1: 10,