Способ определения уроновых кислот и 6-дезоксиальдогексоз в биологических жидкостях
Изобретение относится к биохимии , к способам определения моносахаридов . Цель изобретения - повышение точности и определение альдопентоз, альдогексоз в одной пробе. Для этого в центрифужную пробирку с 3%-ной трихлоруксусной кислотой помещают пробу крови из пальца, центрифугируют и к безбелковому центрифугату добавляют ортотолуидиновый реактив. Пробы, нагревают 8 мин при 110 С на водяной бане, р-р охлаждают до 18-20 с и спектрофотометрируют при световой плотности D в трех длинах волн: А 362, 400 и 650 нм. Коэффициенты экстинции Е устанавливают, измеряя аналогично световые плотности р-ров глюкозы, ксилозы и глюкуроновой кислоты . 1 табл. с (
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК. SU„„13869 (51) 4 С 01 И 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
N jPP 1,g
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ц,, ц
К А 8TOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ ь4 (21) 403 1468/28-14 (22) 27,02.86 (46) 07,04.88. Бюл. Р 13 (71) Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева (72) В.Ю.Андреев (53) 612.015(088.8) (56) Rev. med.(RSR), 1981, 27, У 1, р. 49-53. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОНОВЫХ КИСЛОТ И 6-ДЕЗОКСИАЛЬДОГЕКСОЗ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к биохимии, к способам определения моносахаридов. Цель изобретения — повьппение точности и определение альдопентоз, альдогексоэ в одной пробе. Для этого в центрифужную пробирку с ЗЖ-ной трихлоруксусной кислотой помещают пробу крови иэ пальца, центрифугируют и к безбелковому центрифугату добавляют ортотолуидиновый реактив. Пробы о нагревают 8 мин при 110 С на водяной о бане, р-р охлаждают до 18-20 С и спектрофотометрируют при световой плотности D в трех длинах волн:
362, 400 и 650 нм. Коэффициенты экстинции Е устанавливают, измеряя аналогично световые плотности р-ров глюкозы, ксилозы и глюкуроновой кислоты. 1 табл.
1386903
D з 65о
С ге ксоз E
У
65о гекооз
Вз soo -С ге ксоз E з5оо re ксоз пантоз
Е
Л 5оо пентоз
D лэ62-(С rekco> Е лз62 rekcog +С оентоз Елз62 тентоз)
ЧРОНозыХ kMcnoT+ -- м,З
+ 6= 4ЕЗОК СИа 64О Л 362 рОНОЗЫХ КИС От +6=4ЕЗОКСИЫЛЬдОГЕКоОЗ ге ксоз
Где С гекооз > Спентоз 35 гф о р м у л а изобретения
СУРоноьнк kucno + 6=4езоксно 464огенсоз.— Способ определения уроновых кислот концентрации альдогексоз, альдопентоз и 6-дезоксиальдогексоз в биологичеси уроновых кислот + 6-дезоксиальдогек- ких жидкостях путем обработки пробы соз соответственно, реагентом на альдегидную группу с з л 5о з П A 5оо и В з зь2 — световая 40 последующей спектрофотометрической плотность при длинах волн 650, 500 и регистрацией продукта реакции, о т—
362 нм соответственно. л и ч а ю шийся тем, что, с цеВ таблице представлены данные со- лью повьппения точности способа и обесдержания галактуроновой кислоты в ис- печения возможности определения алькусственно приготовленной смеси мо- 45 догексоз и альдопентоз в одной проносахарицов, полученные предлагаемым бе, в качестве реагента используют 0и известным способами. толуидиновый реактив, а измерения про.Данные, представленные в таблице водят соответственно при 650, 500
Ь подтверждают точность способа. и 362 нм.
Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения моносахаридов.
Цель изобретения — повьппение точ5 ности и обеспечение возможности определения альдопентоэ и альдогексоэ в одной пробе.
Пример . Определение моносахаридов в крови. 10
В центрифужную пробирку наливают
0,45 мл 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты.и 0,05 мл крови из
Пальца и центрифугируют. К 0,2 мл беэбелкавого центрифугата добавляют 15
1,8 мл ортотолуидинового реактива.
Пробу нагревают 8 мин при 100 С на
Водяной бане. Раствор охлаждают до комнатной температуры и помещают в спектрофотометрическую кювету толщи- 20 ной 10 мм. Затем на спектрофотометре
Измеряют световые плотности D исследуемого раствора при трех длинах волне h 362 нм, Л 500 нм и Л 650 нм.
Световые плотности определяют против 25
Контрольной кюветы с дистиллированной водой. Коэффициенты экстинции Е устаНавливают, измеряя аналогичным образом световые плотности растворов глю-. козы, ксилозы и глюкуроновой кислоты 30 известных концентраций (0,025
0,100 мг/мл).
Продукты реакции с ортотолуидино вым реактивом альдогексоз (глюкозы, галактозы, маннбзы), дают три максимума поглощения на длинах волн
362 нм, Л 500 нм и Л 650 нм. Продукты реакции альдопентоз (ксилозы, рибозы, арабинозы) дают два максимума поглощения на длинах волн h 362 нм, и Ь 500 нм. Продукты реакции уроновых кислот (глюкуроновой и галактуроновой кислот), а также 6-дезоксиальЪ догексоз (6-дезоксиманнозы и 6-дезоксигалактоэы) дают один максимум поглощения на длине волны Л 362 нм.
Следовательно, концентрации альдогексоз, альдопентоз, уроновых кислот и 6-дезоксиальдогексоз можно определить по следующим формулам.
1386903
Ошибка
Разность
Ошибка
Реактив разности
ttl
Ортотолуидиновый 13,4
Не достоверна
0,18
0,6
0,76
0,90
0,64
О, 781
О 5
13,9
Составитель Л.Сабурова
Редактор О, Мрковецкая Техред Л. Сердюкова Корректор О, Кундрик
Заказ 1491/43 Тираж 847 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 !
Карбаэольный (по известному
4 способу) Среднее арифметическое тп, (мкг/0,2 мл) среднего арифметического, ill между вариантами, d ритерий остоверости, Достоверность разности
