Способ определения концентрации сердечных гликозидов в растворе

 

Изобретение относится к фармако логии. Цель изобретения - упрощение способа. К суспензии эритроцитов добавляют спиртовый раствор дигитоксина и в одну из проб вводят анализируемый раствор. После перемешивания измеряют разность потенциалов между калийселективным электродом и электродом сравнения в каждой пробе. Пробы инкубируют, измеряют конечную разность потенциалов в пробах и вычисляют прирост разности электродных ротенциалов за время инкубации. Затем определяют концентрацию дигитоксина в анализируемой пробе. 1 ил., 1 табл. оо О1 ГчЭ 05 О 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„, 1352368 А i (50 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4072848/28-14 (22) 02.06.86 (46) 15.11 ° 87. Бюл. Р 42 (71) Всесоюзный научно-исследовательский, проектно-конструкторский и технологический институт источников тока (72) И.И.Сулейманов (53) 612 ° 015 (088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ

СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ В РАСТВОРЕ (57) Изобретение относится к фармако логии. Цель изобретения — упрощение способа. К суспензии эритроцитов добавляют спиртовый раствор дигитоксина и в одну из проб вводят анализируемый раствор. После перемешивания измеряют разность потенциалов межцу калийселективным электродом и электродом сравнения в каждой пробе. Пробы инкубируют, измеряют конечную разность потенциалов в пробах и вычисляют прирост разности электродных потенциалов за время инкубации. Затем определяют концентрацию дигитоксина в анализируемой пробе. 1 ил., 1 табл.

1352368

Изобретение относится к медицинской биологии и может быть использовано в фармацевтической промьппленности для контроля качества препаратов сер- 5 дечных гликозидов.

Цель изобретения — упрощение способа за счет использования калийселективного электрода и эритроцитов кролика в качестве тест-объекта. 10

Пример 1. Определение концентрации уабаина в водных растворах.

Определение начинают с отбора

10 мл крови из ушной вены кролика в гепаринизированную пробирку. Эритро- 11 циты осаждают центрифугированием при

3000 g/мин .в течение 10 мин, трижДы промывают холодной инкубационной средой, содержащей, мИ: NaCl 160; KCl 5; трис-HCl 5, рН 7,4, удаляя супернатант и лейкоциты путем отсасывания.

Затем из полученной эритроцитарной массы готовят суспензию в инкубационной среде вышеуказанного состава.

Из стандартного препарата уабаина 25 готовят ряд водных растворов - от

5х10 до 5х10 И.

Суспензию эритроцитов разливают по

0,49 мл в пластиковые флаконы,подходящего размера. В каждую пробу добав- 30 ляют по 0,01 мл соответствующего раствора уабаина, чтобы получить концентрационный ряд от 10 до 10 " И гликозида в пробе. В одну из проб добавляют 0,01 мл анализируемого раст- 35 вора. Пробы перемешивают и измеряют разность потенциалов между калийселективным электродом и электродом сравнения в каждой пробе, При этом необходимо соблюдать следующие усло- 40 вия. электрод сравнения должен быть снабжен солевым мостиком, заполненным инкубационной средой; перед каждым 1 опытом необходимо проверять крутизну электродной функции, чтобы убедиться 45

I в работоспособности калийселективного электрода, для повьппения стабильности электродного потенциала измерения требуется проводить в термостатируемой ячейке; для контроля дрейфа потенциа- 50 лов электродной пары нужно предварять каждое йзмерение в пробе проверкой разности потенциалов в инкубационной среде. осле измерения исходной разности потенциалов в каждой пробе флаконы с пробами помещают в термостат и инкубируют при 37 С в течение 3 ч, затем пробы вновь перемешивают и измеряют конечную разность потенциалов в пробах.

Далее вычисляют прирост разности, электродных потенциалов за время инкубации с учетом дрейфа потенциалов для каждой пробы. Зависимость прироста разности потенциалов от концентрации уабаина в пробе изображают графически в виде кривой линии. По ней определяют концентрацию уабаина в анализируемом растворе следующим образом: находят на кривой точку, ордината которой соответствует приросту разности электродных потенциалов в анализируемой пробе (к примеру,это значение равно 5,5 мВ ). Абсцисса этой точки, равная 2,5x10 M, соответствует концентрации уабаина в анализируемой пробе, а поскольку в ней анализируемый раствор разбавлен в 50 раз, то, умножая величину концентрации уабаина в определяемой пробе на коэффициент разбавления, получают значение концентрации уабаина в анализируемом растворе, равное 1,255х10 И

-5 (= 0,235х10 И, что соответствует погрешности способа-прототипа) .

Пример 2. Определение концентрации дигитоксина в спиртовых растворах.

Из стандартного препарата дигитоксина (вследствие его нерастворимости в воде ), готовят спиртовые растворы с концентрацией от 1,25х10 до 5х х10 8 И. Суспензию эритроцитов кролика получают таким же способом, как при определении уабаина, затем ее разливают до 0,49 мл в пластиковые флаконы и добавляют по 0,01 мл соответствующего спиртового раствора ди/ гитоксина, чтобы получить концентрационный ряд от 0,25х10 до 10 И.

В одну из проб добавляют 0,01 мл анализируемого раствора. Незначительное содержание спирта (2X по объему) в

I чю . пробах не влияет на определение дигитоксина.

Дальнейшие операции (измерение разности электродных потенциалов, инкубация проб и графическое изображение результатов проводят так же, как для определения уабаина. Кривая, отражающая зависимость прироста разности потенциалов электродной пары от концентрации дигитоксина в пробах, изображена на чертеже.

При помощи данной кривой определяют концентрацию дигитоксина в аналиСреднеквадратическое отклонеЧисло Полученное зна опре- чение концентделе- рации (в средний нем), М

Гликозид

Концентрация гликозида в контрольном растворе, М

0,234х10

0,19х10

0,21х10

5 1,33х10

5 1,95xl0

5 1,09х10

Уабаин 1,25x10"

2,00х10

1 00х10 4

Дигиток2,5 «10

1,40x10

2,80х10

0 78x 1 0

5 2,71x10

5 1,38х10

5 2,88х10

0,14х10

0,24х10 з 1 зируемом растворе способом, указанным выше для определения уабаина.

Таким же образом определяют концентрацию любого другого гликозида.

Результаты контрольного определения уабаина и дигитоксина приведены в таблице.

Формула изобретения

Способ определения концентрации сердечных гликозидов в растворе путем измерения активности препарата.

352368

К -Иа -AT фазы, индикаторным электродом в инкубационной среде с последующим расчетом калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа эа счет сокращения числа стадий, в качестве индикаторного электрода используют Кселективный электрод, а в качестве препарата. используют эритроциты кролика, которые добавляют в инкубационную среду в количестве, обеспечиваю+ + щем насыщающую концентрацию К -Na -АТфазы.

1352368

Составитель Л.Сабурова

Редактор И.Рыбченко Техред М.Дидык Корректор С. Шекмар

Заказ 6425 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г. Ужгород, ул. Проектная, 4