Способ определения антиоксидантной активности липидов крови

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к биохимии , точнее к липидологии, предназначено для биохимической диагностики . Цель изобретения - повышение точности и чувствительности способа. Для этого порцию крови стабилизируют раствором цитрата натрия, гомогенизируют , смешивают с i0-кратным избытком смеси н-гептан: изопропиловый спирт (1:1), встряхивают 3 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, вьщеряивают 1 мин для расслоения фаз, гептановый слой сушат с безводным сульфатом натрия, смешивают с раст- ,вором инициатора (динитрилазобисизомасляной кислоты) в хлорбензоле с .конечной концентрацией инициатора 4-8 мг/мл насыщают пробу кислородом при 55-56 С, определяют время поглощения 10 (С) и 100 мм (tj) кислорода, параметры скорости окисления А и AJ , равные отношению С ti к массе липидов в мг, где й - Т, , 1 табл. 2 . (Л со 00 со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

СЮ4 G01 33348 (21) 3772909/28-14 (22) 16.07.84 (46) 23.06.87,Бюл. Р 23 (71) Тюменский государственный медицинский институт .(72) В,Н. Ушкалова и Н.В.Иоанидис (53) 612. 015 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1051428, кл. G О1 N 33/48, 1983. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИПИДОВ КРОВИ (57) Изобретение относится к биохимии, точнее к липидологии, предназ- начено для биохимической диагностики. Цель изобретения вЂ” повышение точности и чувствительности способа.

Для этого порцию крови стабилизиру„,80„„318911 ют раствором цитрата натрия, гомогенизируют, смешивают с 10-кратным избытком смеси н-гептан: изопропиловый спирт (1:1), встряхивают 3 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, вьщернивают 1 мин для расслоения фаз, гептановый слой сушат с безводным сульфатом натрия, смешивают с раст,вором инициатора (динитрилазобисизомасляной кислоты) в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора

4 " 8 мг/мл насыщают пробу кислородом при 55-56 С, определяют время поглощения 10 (c<) и 100 мм () кислорода, параметры скорости окисления А, и А, равные отношению и ь к массе липидов в мг, где "т=

= ь вЂ” С,, 1 табл.

1 !3!

Изобретение относится к биохимии, в частности липидологии, и может быть использовано в биохимической диагнос- тике.

Цель изобретения вЂ” повышение точ ности и чувствительности способа за счет" проведения экстрагирования и окисления липидов в определенных ус= ловиях.

Способ осуществляется следующим

4 образом.

1,5 вЂ” 3 мл цельной крови стабилизируют 1/10 объема 3,8%-ного раствора-цитрата натрия, гомогенизируют, смешивают с десятикратным избытком смеси н-гептан. изопропиловый спирт (1:1 по объему), встряхивают в течение 3 мин, центрифугируют 5 мин.при

3000 об/мин, выдерживают в течение

1 мин для расслоения фаз, гептановый слой сушат с 1,5 вЂ” 3 r безводного сульфата натрия, смешивают с 1 мл раствора инициатора (динитрилазобисизомасляной кислоты) в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора

4 вЂ” 8 мг/мл, насьпцают пробу кислородом при 55 вЂ” 65 С, фиксируют время поглощения 10 („) и 100 мм () кислорода, определяют параметры скорости окисления А„ и А, равные отношению „ и ьс к массе лйпидов в мг, "1 где 3ь = вЂ” Г, Пример 1. Используют 1 мл крови женщин 20 - 25 лет, которую смешивают с 9 мл смеси гептан-изопропиловый спирт 1:1 v/v, встряхивают

3 мин, центрифугируют 5 мин при

3000 об/мин,, выдерживают 1 мин для разделения фаз, отбирают гептановый экстракт, который смешивают с безводным сульфатом натрия для обезвожива-, ния, фильтруют, Фильтрат смешивают с 1 мл раствора динитрилазобисиэомасляной кислоты в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора 4 мг/мл, насыщают пробу кислородом при 55 С. Измеряют количество поглощенного кислорода во времени, строят график этой зависимости. Определяют период индукции и скорость окисления графически. Получают период индукции и скорость окисления, равные 138 + 10 мин и 1,50 +

+ 0,20 мм / мин, соответственно.При" мер показывает повьппение точности анализа по предлагаемому способу по сравнению с известным при использова8911 2

20 скорость окисления графически. Получают значения равные 70 + 5 мин и

5,0 + 0,05 мм /мин, соответственно, Используют кровь локтевой вены женщин 20-25 лет, Кровь стабилизируют

1/1 0 объема 3,8Х-ного цитрата натрия, путем центрифугирования делят на плазму и эритроциты, Отбирают по

0,1 мл плазмы и эритроцитов, которые .параллельно смешивают с 9, 9 мл сме35

45 симости. Определяют период индукции и скорость окисления графически.Получают для плазмы . перйод индукции и скорость окисления, равные 46 +

+ 6 мин, 0,75 + 0,07 ммэ/мин, соответ50 ственно. Получают укаэанные параметры для эритроцитов, равные 76+-8 мин и 0,42 + 0,08 мм /мин.

Результаты определения антиоксидантной активности липидов крови, 55 приведены в таблице.

55 нии нижних предельных режимов анализа.

Пример 2, Используют 0,01 мл эритроцитов крови женщин 20 вЂ” 26 лет, которые смешивают с 9,9 мл смеси гептан-изопропиловый спирт 1:1 v/÷, встряхивают 3 мин, центрифугируют при

3000 об/мин в течение 5 мин, отбирают гептановый экстракт, который смешивают с безводным сульфатом натрия для обе звоживания, фильтруют.

Фильтрат смешивают с 1 мл раствора динитрилазобисиэомасляной кислоты в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора 8 мг/мл, насьпцают пробу кислородом при 65 С, Измеряют количество поглощенного кислорода во. времени, строят график этой зависимости, Определяют период .индукции и си гептан-изопропиловый спирт 1:1

v/v, встряхивают в течение 3 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, выдерживают в течение 1 мин для расслоения фаз,. отбирают гептановый экстракт, смешивают его с безводным сульфатом натрия для обезвоживания, фильтруют.

Фильтрат смешивают с 1 мл раство- ра динитрилазобисизомасляной кислоты в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора 6 мг/мл, насыщают пробу кислородом при 60 С, Измеряют количество поглощенного кислорода во времени, строят график этой завиФормула изобретения

Способ определения антиоксидантной активности липидов крови путем

13189 экстрагирования липидов смесью органических растворителей, насыщения ис.следуемой пробы кислородом в присутствии инициатора окисления и определения количества поглощенного кислорода во времени с последующим расчетом периода индукции и скорости окисления, отличающийся

"2 ° мин

Объект, пол, возраст . ь„, мин

А2э мин/мг

А„ мин/мг

5,1+0,2

40 125! 1,3+0,5

8,810,4

25 112 2,5+0, 1.

47 213 6,0+0,3 22,1+ 0,9

197 6,1+ 0,3

20,1+0,9

11,0+0,5

23 108 3,1+ 0,1

7,7+0,3

27 85 3,6+0,2

64 . 2,4+0,1

6,2+0,3

Составитель Н. Гуляева

Техред Л. Олийнык Корректор А.Обручар

Редактор А. Шандор

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 2503/37

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãoðoä, ул.Проектная, 4

Кровь, ж, 35 лет

Кровь, ж, 60 лет

Кровь, м, 40 лет

Кровь, ж, 60 лет

11 4 тем, что, с целью повышеиия точности и ускорения способа, экстрагирование проводят 10-1000-кратным избытком смеси гептана и иэопропилового спирта, а окисление гептановой фазы проводят при 55-65 при концентрации инициатора 4 вЂ” 8 мг/мл.

Способ определения антиоксидантной активности липидов крови

Изобретение относится к медицине

Штамп для безоблойной штамповки // 1318339

Изобретение относится к обработке металлов двалением, а именно к конструкциям штампов для безоблойной штамповки

Способ прогнозирования течения герпетиформного дерматита дюринга // 1317361

Изобретение относится к области медицинь1 и предназначено для дерматологии

Способ определения днк в клетках // 1317360

Изобретение относится к цитохимии и предназначено для количественного определения ДНК в клетках микроорганизмов методом проточной цитофлюорометрии

Способ диагностики туберкулезного пародонтита // 1317306

Способ получения культуры эмбриональных клеток лейдига // 1317305

Изобретение относится к медицине , точнее к цитологии

Самофиксирующийся пневматический байонетный прижим // 1316778

Изобретение относится к устройствам для зажима деталей при обработке и может быть использовано на сварочных кантователях

Способ диагностики сердечной недостаточности // 1314269

Изобретение относится к медицине , точнее к кардиологии

Способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы и донных отложениях // 1314268

Изобретение относится к области медицинской паразитологии, а именно к способам санитарно-гельминтологического обследования объектов внешней среды

Способ фиксации образцов биологических тканей для гистологического исследования // 1314251

Изобретение относится к гистологии

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750