Способ определения ристомицина сульфата
Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу гликопептидного антибиотика, ристомицина сульфата, используемого в клинической практике для лечения септических инфекций, устойчивых к другим антибиотикам. Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа стадий и повышение селективности. Для этого используют очищенную сумму лектинов семян мышиного горошка. Размолотые семена
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИ.1ЕСНИК
РЕСПУБЛИК (50 4 С 01 N 33/53 31/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3748750/28-14 (22) 04.06.84 (46) 07.04.87. Бюл,У 13 (71) Львовский государственный медицинский институт (72) В.А,Антонюк, Л.Я,Лебяк и
Л.Я.Ладная (53) 615.779.9(088.8) (56) Бражникова M,Ã, и др. Антибиотики . Т.8, 1963, с,392-394, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РИСТОИИЦИНА
СУЛЬФАТА (57) Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу гликопептидного антибиотика, ристомицина сульфата, используемого в клинической практике для лечения септических инфекций, устойчивых K другим антибиотикам, Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения числа стадий и повышение селективности, Для этого используют очищенную сумму лектинов семян мышиного горошка, Размолотые семена (200 r) экстрагируют, перемешивая с
0,9Х-ным раствором (1000 мл) МаСI 1„„SU„„1302199 А1
3 ч., рН 4,0, Осадок удаляют центрифугированием, доводят рН до 8,0, вновь образовавшийся осадок удаляют центрифугированием, Из раствора белки осаждают сульфатом аммония, Осадок подсушивают, растворяют в дистил лированной воде, диализуют против
0,9Ж-ного раствора, а затем против дистиллированной воды, далее лиофиль но высушивают. Получают аморфное вещество светло-коричневого цвета.
1Х-ный раствор которого в 0,97.-ном растворе NaC1 используют для идентификации ристомицина сульфата.Определение ристомицина сульфата основано на следующих реакциях:1) 0-маннозоспецифичныйлектин + й-ацетил-0-галактозаминспецифичный лектин †+компле . лектинов (растворимый); 2) комплекс лектинов + ристомицин — ристомицин
I комплекс лектинов (осадок) . Реакции просты в выполнении ° Способ может применяться в аптеках, контрольноаналитических лабораториях и при контроле производства ристомицина сульфата, 2
Определение ристомицина сульфата основано на следующих реакциях: 1) 0маннозоспецифичный лектин + М-ацетил-D-галактозаминспецифичный лектин комплекс лектинов (растворимый);
2) комплекс лектинов + ристомицин — ристомицин — комплекс лектинов (осадок).
Пример 1. К 0 5 мл lX íîãî раствора реактива на 0,9 -ном NaCE рН 7,0, полученного из семян мышиного горошка, добавляют 0 5 мл 17-ного раствора ристомицина сульфата ° Образуется обильный осадок ° Открываемый минимум ристомицина сульфата при использовании 1 ного раствора реактива при визуальном наблюдении—
70 мкг/мл раствора, Реакцию необхо1 1302199
Изобретение относится к области фармацевтического анализа, в частности к анализу гликопептидного антибиотика ристомицина сульфата, используемого в клинической практике,для лечения тяжелых септических инфекций„ вызванных устойчивыми к другим антибиотикам стафилококками и энтерококками °
Цель изобретения — упрощение сно- 10 со6а за счет сокращения числа стадий и повышение селективности.
Способ осуществляется следующим образом, Для определения ристомицииа суль- 15 фата используют очищенную сумму лектинов семян мышиного горошка, которую получают по следующей методике, 200 г размолотых семян экстрагируют при непрерывном перемешивании
1 000 мл 0,9 -ного раствора натрия хлорида 1-3 ч, рН раствора доводят до 4,0 и образующийся осадок удаляют центрифугированием, Затем рН раствора доводят до 8,0 и вновь образующий 5 ся осадок удаляют центрифугированием.
Иэ полученного прозрачного раствора белки осаждают сульфатом аммония при
667.-ном насыщении, Осадок подсушивают, растворяют в небольшом объеме ЗО дистиллированной воды и диализируют против 0,9 -ного раствора NaC1 а затем против дистиллированноч воды, после чего лиофильно высушивают, Получают 350-500 мг аморфного вещества светло-коричневого цвета.. 17.— ный раствор последнего в 0,97-ном растворе NaC1 используют для идентификации ристомицина сульфата.
Раствор, содержащий ристомицин щ сульфат, обрабатывают этим реагентом при рН 4,0-10,0, а о наличии в пробе ристомицина сульфата судят по образованию осадка, выявляемому визуально, 45
Осадок ристомицина сульфата образует 0-маннозоспецифичный лектин семян мышиного горошка, Для его визу ального наблюдения необходимо не меньше 30 мин, При совместном присутствии в растворе 0-маннозоспецифичного и N-ацетил-D- галактозаминспецифичного лектина осадок ристомицина сульфата образуется сразу госле добавления реактива, Это объясняется взаимодействием двух лектинов между собой, В результате образуется еще бопее сложный комплекс, и осадок выпадает сразу. димо проводить в водных или водносолевых растворах в диапазоне рН 4,010„0, так как при рН 3,0 и ниже, а также при рН 10,0 и выше комплекс разрушается, Реакцию можно проводить в диапазоне температур 0 — 56 С, при температурах выше 65 С происходит денатурация лектинов реагента, Пример 2. Проводят, как пример 1, за исключением того, что устанавливают рН 4,0 и берут концентрацию реагента 1%, Чувствительность способа снижается до 200 мкг/мл ристомицина сульфата.. Селективность для выявления ристомицина сульфата сохраняется °
Пример 3, Проводят, как пример 1, за исключением того, что устанавливают рН 10,0, берут концентрацию реагента 57.„ Чувствительность реакции выявления ристомицина сульфата снижается до 200 мкг/мл, селективность выявления ристомицина сульфата сохраняется.
Способ определения ристомицина сульфата позволяет проводить реакцию в присутствии ароматических аминокислот, белков, моносахаридов, в том числе 0-манноэы, 0„-глюкозы, L-арабинозы и -рамноэы, .лептидных и гликоэидных антибиотиков, Реакпия проста в выполнении ° Способ может бь1ть применен в аптечных учреждениях, контрольно-аналитических лабораториях, а также при контроле производства ристомицина сульфата
Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я
Способ определения ристомицина сульфата путем обработки пробы хими1302
Составитель Н. Гуляева
Редактор О,Юрковецкая Техред И.Попович Корректор. JI,Ïàòàé
Заказ 1212/44
Тираж 777 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
ПроизводсТвенно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4 ческим реагентом, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий и повышения селективности,в ка199 4 честве реагента используют солевой раствор суммарного препарата лектинов из мышиного горошка (Vicia cracca L.),à реакцию проводят при рН 4,0-10 0.


