Способ определения активности комплемента

 

Изобретение относится к биологии , предназначено для изучения комплемента в эксперименте ив клинике при необходимости многократных исследований и в тех случаях когда забор крови труден из-за малых размеров подопытных животных или из-за тяжелого состояния больных. Цель изобретения - повышение чувствительности метода и упрощение путем сокращения числа стадий. Для этого эритроциты барана 3 раза отмывают физрастворомцентрифугируют при 1000 об/мин. Готовят взвесь 4-10 эритроцитов в 1 мкл физиологического раствора, в равном объеме приливают разведенную в тройном титре гемолитическую кромолью сыворотку. Полученную гемосистему инкубируют 10 мин при . В опытные пробирки вносят по 6,2 мл физраствора и гемосистемы и испытуемую сыворотку - 2 мкл. В контрольную пробирку вносят те же ингредиенты, но вместо сыворотки - 2 мкл физраствора . Инкубация 30 мин при пипетируют содержимое пробирок, отбирают 0,1 мл реакционной взвеси соединяют с 0,9 мл физраствора разводят в 10 раз) и нелизироваиные эритроциты считают в камере Гореева опытные и контрольные пробы. Расчет по формуле х(в-а):в-100, где х - комплементарная активность, а - количество сосчитанных эритроцитов опытной пробы , в - количество сосчитанных эритроцитов контрольной пробы. Результат дается в литических единицах. 1 табл, г (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО(ЩИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (И) (5)) 4 G 01 N 33/48, 6 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, 15 IL it (a" At

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3940281/28-14 (22) 01.08.85 (46) 23.03.87. Бюл. 1)i 11 (71) Институт иммунологии (72) С.Н.Турищев (53) 612.015(088.8) (56) Актуальные вопросы инфекционной патологии и иммунологии. М.: 1967, с. 109. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

КОМПЛЕМЕНТА (57) Изобретение относится к биологии, предназначено для изучения комплемента в эксперименте и в клинике при необходимости многократных исследований и в тех случаях когда забор крови труден из-эа малых размеров подопытных животных или из-sa тяжелого состояния больных. Цель изобретения — повышение чувствительности метода и упрощение путем сокращения числа стадий. Для этого эритроциты барана 3 раза отмывают физрастворомРф центрифугируют при 1000 об/мин. Готовят взвесь 4 .10 эритроцитов в

1 мкл физиологического раствора, в равном объеме приливают разведенную в тройном титре гемолитическую кромолью сыворотку. Полученную гемосистему инкубируют 10 мин при 37 С. В опытные пробирки вносят по 0,2 мл физраствора и гемосистемы и испытуемую сыворотку — 2 мкл. В контрольную пробирку вносят те же ингредиенты, но вместо сыворотки — 2 мкл физраствора. Инкубация 30 мин при 37 С пипетируют содержимое пробирок, отбирают 0,1 мл реакционной взвеси, соединяют с 0,9 мл физраствора (разводят в 10 раз) и нелнзированные эритроциты считают в камере Гореева опытные и контрольные пробы. Расчет по формуле х=(в-а):в 100, где х — комплементарная активность, а — количество сосчитанных эритроцитов опытной пробы, в — количество сосчитанных эритроцитов контрольной пробы. Результат дается в литических единицах. 1 табл, 94 2 личью сыворотку. Полученную гемосистему инкубируют 1О мин при 37 С.

В опытные пробирки вносят по 0,2 мл физраствора и гемосистемы и автопипеткой — 2 мкл испытуемой сыворотки.

В контрольную пробирку вносят те же. ингредиенты, но вместо сыворотки—

2 мкл физраствора. Инкубация 30 мин при 37 С. Пипетируют содержимое пробирок, отбирают 0,1 мл реакционной взвеси, соединяют с 0,9 мл физраствора (разводят в 10 раз) и нелизированные эритроциты считают в камере

Горяева; в 5 больших квадратах (увеличение 10x10) проводят опытные и контрольные пробы.

Для вычисления результата пользуются формулой в-а х= — --x100, в

Эритроциты барана трижды отмывают физраствором, центрифугируют при 25

1000 об/мин. Готовят взвесь 4 10

5 эритроцитов .в 1 мкл физиологического раствора. К приготовленной взвеси в равном объеме приливают разведенную в тройном титре гемолитическую кро- З7

Показатели

2 3 4 5 6 . 7 8 9 10 11

Количество эритроцитов в 5 квадратах

62 21 131

Активность комплемента, л.е.

68 90 34 64 30 56 32 80 23 69

1 12981

Изобретение относится к области биологии и может быть использовано для изучения комплемента в эксперименте и в клинике, особенно при необходимости многократных исследований и в тех случаях, когда взятие крови затруднено маленькими размерами подопытных животных или тяжелым ° состоянием больных.

Целью изобретения является повыше- 1О ние чувствительности метода и его упЪ рощение за счет сокращения числа стадии °

Пример 1. Делают забор крови в капилляр.

Крови для исследования достаточно 1 капли.

Центрифугированием отделяют сыворотку. В качестве разводящей жидкос- 20 ти применяют веронал-мединаловый буфер или физраствор (рН 7,2-7,4).

Пример 2 ° Берут 400 мг гемогената селезенки мыши, добавляют

1,2 мл физиологического раствора.

Далее способ осуществляют аналогично примеру 1.

Получают в контроле — 202 эритроцита в 5 больших квадратах; в опыте—

170 эритроцитов, 20 лимфоцитов °

Комплементарная активность равна

15,8 л.е.

Процент примеси в данном случае достаточно высок (9X) что, несомненно, повлияло бы на результат при фотокалориметрическом и визуальном учете. где х — комплементарная активность; а — количество сосчитанных эритроцитов опытной пробы; в — количество сосчитанных эритроцитов контрольной пробы. Результат выражают в литичес» ких единицах (л.е.).

Результаты определения комплементарной активности сыворотки 10 крыс представлены.в таблице.

72 139 86 135 39 151 61 199

В том случае, если биологическая жидкость обладает крайне слабой или высокой активностью комплемента, следует увеличить или уменьшить ее количество в опыте и в последующем использовать подобранное для данного материала соотношение. Например, при низкой активности, не определяющейся в 2 мкл сыворотки, берут 3 мкл, а при необходимости и больше, до получения положительных результатов. Напротив, при высокой активности можно уменьшить количество исследуемой сыворотки до предельного (I мкл), в последующем прибегая к разведениям.

Составитель Л.Сабурова

Техред М.Ходанич Корректор Л.Патай

Редактор Н.Егорова

Заказ 855/23 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

1роиэводственно-полиграфическое предприятие,г.ужгород,ул.Проектная,4

3 1298

Формула изобретения

Способ определения активности комплемента, включающий разведение гемолитической сыворотки в тройном титре, добавление к ней взвеси эритроцитов барана с последующим инкубированием полученной смеси с испытуемым биологическим препаратом и физиологическим раствором и учетом результатов, f0 отличающийся тем, что, .

194 4 с целью повышения чувствительности способа и его упрощения за счет сокращения числа стадий, взвесь эритроцитов барана берут в количестве

4 10 в l мкл физиологического раст5 вора, а гемолитическую сыворотку, физиологический раствор и взвесь эритроцитов берут при их соотношении

1:100:100 соответственно, а учет результатов проводят путем подсчета количества лизированных эритроцитов.