Способ консервации изолированных клеток печени

 

Изобретение может быть использовано , в трансплантологии для создания банка изолированных клеток печени . С целью увеличения жизнеспособности клеток на I мл среды изолированные клетки печени помещают в охлажденную до 2-4°С среду I99. Герметично подсоединяют вакуум-отсос и создают разрежение . мм рт.ст. Ампулу заполняют газообразным аргоном (данную процедуру повторяют 2-3 раза). Ампулы запаивают и хранят при 2 . На 10 и 20 сутки ампулы вскрывают, заменяют надосадочную среду 199 свежей, заполняют аргоном и запаивают. Хранят ампулы при до 30 сут от начала консервации . 1 табл. i (Л ю 00 со и| со

СОЮЗ СОаЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

09) (11) 151) 4 А 01 N 1/02

ГОСУДАРСТаЕНН11й НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3784817/28-14 (22) 20.08.84 (46) 15.02.87. Бюл. Р 6 (71) Казахский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии им. А.Н. Сызганова (72) N.À. Алиев, Г.Е. Островерхов, Л.А. Гройзик, В.Г. Бруслик и А.Ш. Шахназаров (53) 615.475(088.8) (56) Алиев IT.A. и др. Способы консервации изолированных клеток печени. — Здравоохранение Казахстана, 1982, 9 3, с. 74-76. (54) СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ ИЗОЛИРОВАННЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ (57) Изобретение может быть использовано.в трансплантологии для создания банка изолированных клеток печени. С целью увеличения жизнеспособности клеток на 1 мл среды изолированные клетки печени помещают в охлажденную до 2-4 С среду 199. Герметично подсоединяют вакуум-отсос

-и и создают разрежение 10 .мм рт.ст.

Ампулу заполняют газообразным арго— ном (данную процедуру повторяют

2 — 3 раза). Ампулы запаивают и храо нят при 2 -4 С. На 10 и 20 сутки ампулы вскрывают, заменяют надосадочную среду 199 свежей, заполняют аргоном и запаивают. Хранят ампулы при о

2-4 С до 30 сут от начала консервации. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, преимущественно к трансплантологии, гепатологии и цитофизиологии, и может быть использовано для создания банка изолированных клеток печени.

Цель изобретения — увеличение жизнеспособных клеток на I мл среды путем хранения взвеси клеток в атмосфере аргона.

Способ осуществляют следующим образом.

Изолированные клетки печени помео щают в охлажденную до +2-4 С среду

199 в концентрациях 1,25 .10 — 20 х б

<10 клеток/мл. При +2-4 С к ампуле б о

C взвесью изолированных клеток печени герметично подсоединяют вакуум-отсос и создают разрежение

- !!

10 мм рт.ст., после чего, не нарушая герметичности, ампулу заполняют газообразным аргоном (указанную процедуру повторяют 2-3 раза) . Ампулы эапаивают с помощью горелки и хранят о при +2-4 С. На десятые и двадцатые сутки ампулы вскрывают, осторожно удаляют надосадочную среду 199 и заменяют ее тем же количеством свежей среды 199, охлажденной до +2-4 С, после чего заполнение ампул аргоном и запаивание их проводят вновь.Храо нят ампулы при +2-4 С до 30 сут от начала консервации.

Результаты 30-суточной консервации изолированных клеток печени, пров денной согласно предлагаемому способу в атмосфере аргона (А), в сравнении с консервацией в атмосфере о воздуха (B) при +2-4 С с двухкратной сменой среды 199 (, М т) представлены в таблице.

289437 2 ток печени в атмосфере аргона на 4681%, АСТ вЂ” на 25-72, калия — на 2940, кальция — на 8-17%, меди — на !

5-20, железа — на 6-22%, а концентрация натрия выше на 2-9, что свидетельствует о менее выраженном внутриклеточном отеке. Закисление среды при использовании аргона наступает значительно медленнее.

Электронно-микроскопические исследования подтверждают, что использование аргона согласно предлагаемому способу позволяет уменьшить внутриклеточный отек, лучше сохранить мембранные структуры, ядро, митохондрии.

Консервированные согласно предлагаемому способу изолированные клетки печени биологически активны— при трансплантации в условиях острой печеночной недостаточности они компенсируют утраченные функции поврежденной печени, поддерживают мета25 болизм в течение "критического периода недостаточности печени, усиливают в ней репаративно-восстанови-. тельные процессы и создают условия для выздоровления 43,3-70 животных с моделью острой печеночной недос- . таточности.

Использование предлагаемого способа консервации изолированных клеток печени обеспечивает по сравнению с известными способами пролонгирова35 ние срока хранения и уменьшение степени их гибели, что позволяет создать 30-суточный банк, где имеется от 52,8+0,4 до 90,3+ 3,2 (от исходного количества) жизнеспособных

40 и функционально активных клеток.

Данные биохимических методов исследования и атомно-абсорбционной спектрофотометрии о содержании в среде консервации (среде 199) веществ, по которым можно судить о степени разрушения клеток, показывают, что концентрация AJ1T достоверно ниже при хранении изолированных клеФормула изобретения

Способ консервации изолированных клеток печени в закрытой стерильной 5 емкости, содержащей газ и среду 199, отличающийся тем, что с целью увеличения жизнеспособных клеток íà l мл среды, емкость над средой заполняют газообразным аргоном.

1289437!

Срок наблюдения, сут

Способ

Среда консервации

20

30 в среде, клет/мл

Среда

199

20 е10

78,6tOэ4 59ь! 0 ° 8 52в8+Оэ4

66,2+1,1 47,7+0,6 43 920 9

68,5 0,5 62,7+0,9 ° 55,4+0,6

I 0 i IO

66,411,1

60,1 0,5 48,7 0,8

78,7Н,3 66,6+1,6 57,9+1,2

5 10

2,5 10

79 2й2,2 65,1+2,5 59,6+2,8

l 25 lO

96,1+2,6 93,5+3,2 90,3+3,2

88,4 3,2 78,0%2,7 73,4+2,1

Составитель М. Позняк

Редактор С. Лысина Техред П.Олейник Корректор В. Бутяга

Заказ 7834/3 Тирвк 653 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Уагород, ул. Проектная, 4

Концентрация клеток

74,9+0,9 58,5 0,7 48,6+1,2

94,0 3,2 84,9+1,4 76,8+0,7