Способ количественного определения производных кумарина

 

Изобретение относится к способам определения производных кумарина. Цель изобретения - упрощение способа. По предлагаемому способу крысам внутривенно вводят производные кумарина. Затем берут, пробу крови. Получают из нее плазму и добавляют к последней хлороформ. Готовят хроматограмму и помещают ее в систему бензол - ацетон в соотношении 10:3. Хроматограмму сушат.и рассматривают ее в УФ-свете. Исследуемые соединения проявляются в виде ярко-фиолетовых пятен. Эти пятна вырезают и вещества эл:оируют с пластины в колбу трижды через фильтр с помощью хлороформа. Объем ДОВОДЯТ до метки хлороформом и перемешивают. Оптические плотности растворов измеряют на спектрофотометре при 335 и 330 нм соответственно .Количественное содержание исследуемых соединений определяют по калибровочнь1м графикам. 2 табл., I ил. (/)

СООЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 N 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 368881 1/28-14 (22) 09. 01 . 84 (46) 07.09.86. Бюл. N- 33 (71) Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт (72) А.Ç.Абышев, А.И.Мозжухин, Д,З.Абышев и П.П.Денисенко (53) 616. 07 (088.8) (56) J.Pharm. Sei, 1977, v. 66, М 6, р, 799. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ КУИАРИНА (57) Изобретение отноеится к способам определения производных кумарина.

Цель изобретения — упрощение способа, По предлагаемому способу крысам внутривенно вводят производные кумарина.

„„SU„„1255922 А 1

Затем берут пробу крови, Получают из нее плазму и добавляют к последней хлороформ. Готовят хроматограмму и помещают ее в систему бензол— ацетон в соотношейий 10:3. Хроматограмму сушат.и рассматривают ее в

УФ-свете. Исследуемые соединения проявляются в виде ярко-фиолетовых пятен. Эти пятна вырезают и вещества зхкоируют с пластины в колбу трижды через фильтр с помощью хлороформа, Объем доводят до метки хлороформом и перемешивают. Оптические плотности растворов измеряют на спектрофотометре при 335 и 330 нм соответственно. Ко- личественное содержание исследуемых соединений определяют по калибровочйым графикам. 2 табл., 1 ил, 1 )255922

Изобретение относится к способу определения физиологически активных веществ кумаринового ряда, а именно декурсинола и обтусифола формулы соответственно

5 ропипетки наносят на стартовую линию (1,5 см от нижнего края) пластины силуфол (20 20 см), После улетучивания растворителя в местах нанесения проб, хроматограмму помещают в предварительно ()0-15 мин) насыщенную камеру с системой растворителей бензол — ацетон в соотношении 10:3, Нижний край пластины погружают в систему растворителей примерно на ) см так, чтобы уровень растворителя был ниже стартовой линии. Когда фронт растворителя находится на расстоянии 0 5 см от верхнего края пластины, ее извлекают из камеры и отмечают линию фронта.

Хроматограмму сушат в вытяжном шкафу в течение 5-)0 хНН затем обнаруживают пятна, рассматривая хроматограмму в УФ-свете, При этом исследуемые соединения проявляются в виде ярко-фиолетовых пятен со значе иями Г :1 = 0,27, а П=0,55; что позволяет идентифицировать их среди многочисленных природных соединений, извлекаемых иэ исследуемых биосред, После этого соответствующие пятна обводят, вырезают и вещества злюируют с пластины в мерную колбу емкостью 25 мл через ск.;адчать.й бумажный фильтр трижды по 5,0 и; хлороформом, Объем доводят до метки хлороформом, перемешивают и оп"".H÷åñêèå плотности растворов измеряют, напри1ер„ на спектрофотометре СФ-26 в кювете с толщиной 1,0 см па фоне чис(того хлороформа при соответствующих длинах волн () цля ) = 335 нм, а для П = 330 нм), Количественное соцержание. исследуемых соединений определяют пс калибровочным графи«ам, Я табл, ) вреде гавлень. результаты определения концентрации декурсино,IB н плазме крови и тканя крыс после внутривенного и .:«рорального введения,, Я) о

40 в плазме крови и различных тканях, Декурсинол-З-окси-3, 4-дигидропира-gg но-5, 6: 6, 7 -кумарин (! ), С„Н „„О т,пл, 180-181,5 С; 22 — 8,89 (с 2,56; хлороформ) и обтусифол- 2-иэопропилокси-б-метокси-бензодиоксано-5, 6:8,7кумарин (II) С„ Е, О, т,пл, 151 — 25

152 С; 20 + 57,3 (с 6,5; хлороформ) обладают выраженной противоаритмической активностью (4,5).

Целью изобретения является разработка простого способа определения концентраций декурсинола и обтусифола в биосредах за счет подбора экстрагента, хроматографирования и спектрофотометрирования.

На чертеже изображен калибровочный график, поясняющий предлагаемый способ.

Пример. Крысам внутривенно вводят декурсинол (1) и обтусифол (II) в дозе 10,0 и 0 мг/кг, соответственно, и через 15, 30, 60, 120, 240, 360 и 420 мин отбирают пробы крони, почки, печень, легкие, мозг, сердце и н них определяют содержания исследуемых веществ:

1,5,0 мл крови помещают в пробирку и центрифугируют в течение 1520 мин при 3000 oa/, К,0 плазмы добавляют 6,0 мл хлороФорма и встряхивают в течение 1 ч, затем содержимое переносят в делительную норонку емкостью 10 0 мл, После расслоения снимают нижний хлороформный слой, фильтруют через складчатый бумажный фильтр в пробирку и растворитель упаривают досуха. Остаток растворяют 1,0 мл хлороформа. 50 мкл полученного раствора с помощью микВ табл. 2 приведены результаты определения концентра,ии обтусифола в плазме крови и тканях крь)с после ннутривенного введения в дозе

),0 мг/к

Формула изобретения

Способ количественного определения производных кумарина н биологических объектах путем зкстракции органическим растнорителем, выпаривания, раст22

12559

4 используют хлороформ, хроматографируют в системе растворителей бензол — ацетон в соотношении 10:3 с последующим спектрофотометрированием декурсинола и обтусифола при 335 и

330 нм соответственно. Таблица 1 ворения осадка в органическом растворителе и хроматографирования, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью определения декурсинола, обтусифола и упрощения способа в качестве органического растворителя

Показатели за время в мин

Пути введения

Дозы, мг/кг

Биообъекты

15

l0 в/в

0,93+0,04 0,83+0,02

Плазма

1,85+0, 05 l, 60+0, 05

3, 60+0, 035 2) 80+0, 05 в/в

Плазма

Перорально

Плазма

l,51+0,03 0,93+0 02 в/в

Легкие

1, 43+01 02 Iэ,2 1+0 э 85 в/в

Миокард

Мозг

1, 60+0, 04

1)40+0)02 в/в

Продолжение табл. 1

360 480

Показатели за время, в мин

Виообъекты

120 240

О, 18+0, 01

О, 72+0, 03 О, 53+0, 02 0,31+0, 009

Плазма

0 81+0 035

1, 01+0, 035

1,36+0,05

° Плазма

1,50+0,035 1,20+0,035 0,70+0,02

Плазма

0,47+0,035

О, 56+Î, 02

0,85+0,02

0,53+0 035

0,80+0, 035

1,30+0,02

Каждые представленные данные являются средним из ll измерений.

Легкие

Миокард

Мозг

0,23+0,03

0,25+0,02

0,45+0,02

0 28+0 02

0,35+0,02

0,10+0,02

0,10+0,02

0,06+0,02

1255922

Та блица 2

Показатели за время в мин

35 1 30 (60 (120 (2АО I 480 (660

Биообъек ты

0,70+

Плазма

0,03

Оэ65+ Ою55+ 0 42+ 01 28+

О, 75+

Печень

0,009 0,009 0,02

0,02 0,02

0,02

0,70+ 0,65+ 0„58+ 0,40+

0,16+

О, 30+

Почки

0 009 0035 002

0,03

0,03 0,02

0,10+

О 85+ 0,77+ 0,70+ 0,47+ 0,25+

-Легкие

0,02

0,02

0,02

0,02

0,03

0,03+

0,003

0, 45+

0,90+ 0,85+ О, 75+ 0,65+

Миокард

0,03

0,03

0„03

0,03

0,03

0,01

Ф

Каждые представленные данные являются средним из 10 измерений.

ОЯ 04 РЮ РР N fl 14 1Е10 гя/ю

Составитель Л.Покрьппкина

Техред М.Ходанич

Редактор А.Шандор

Корректор В,Синицкая

Заказ 4815/43

Тираж 778 Подписно е

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектная,4

0,90+

0,03

0,55+

0,03

0,47+ 0,38+

0,02 0,01

0i 18+

О, 009

О, 15+

0,003

0,20+

О, 05+

О, 009

О, 05+

0 005